王 靜 陳利平 王發(fā)渭 孫志高 許成勇

（1.新疆維吾爾自治區(qū)烏魯木齊民族干部學(xué)院軍醫(yī)訓(xùn)練大隊，新疆 烏魯木齊 831200；2.解放軍總醫(yī)院海南分院，海南 三亞 572004）

焦慮癥的病因和發(fā)病機制尚未完全闡明，與神經(jīng)遞質(zhì)、內(nèi)分泌、激素水平、神經(jīng)肽的變化有關(guān)［1］。動物孤養(yǎng)加不確定性空瓶刺激實驗?zāi)芤鸫笫蟪霈F(xiàn)攻擊，撕咬瓶子和籠子，修飾減少等一系列的焦慮反應(yīng)，被用作焦慮模型［2］。本研究采用動物孤養(yǎng)加不確定性空瓶刺激實驗方法建立焦慮大鼠模型，觀察舒郁寧心湯對焦慮大鼠的行為學(xué)及神經(jīng)肽的影響。

1 材料與方法

1.1 動物 健康SPF 級SD 雄性大鼠50 只（解放軍總醫(yī)院醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供，動物號為SCXK-京-2009-0029），體質(zhì)量180～220 g。

1.2 藥物與試劑 舒郁寧心湯處方由中國人民解放軍總醫(yī)院中醫(yī)科提供，由酸棗仁15 g，郁金10 g，梔子10 g，百合10 g，五味子6 g 組成，上藥浸泡、煎煮，過濾，于80℃恒溫水浴中濃縮成含生藥量5 g/mL 藥液，存冰箱備用，使用時蒸餾水稀釋大鼠灌胃；地西泮片劑，2.5mg/片，北京益民藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，地西泮片研磨，加入2%羧甲基纖維素鈉適量，用蒸餾水配成0.2 mg/mL 混懸液備用。采用競爭酶聯(lián)免疫分析法測定血清神經(jīng)肽（NPY）含量，NPY 放射免疫試劑盒由解放軍總醫(yī)院東亞免疫技術(shù)研究所生產(chǎn)；儀器：酶標(biāo)儀THERMO MultiskanMK3（美國產(chǎn)品）。

1.3 分組與造模 大鼠隨機分為空白對照組、模型組、地西泮組、舒郁寧心湯小劑量組（含生藥0.5 g/mL）、舒郁寧心湯大劑量組（含生藥5.0 g/mL），每組10 只大鼠；正常對照組每籠飼養(yǎng)5 只，其他組每籠飼養(yǎng)1 只。大鼠適應(yīng)期飼養(yǎng)1 周，除正常組外，其他各組單籠飼養(yǎng)且接受不確定性空瓶飲水刺激實驗建立焦慮應(yīng)激模型［3］。定時喂水，訓(xùn)練7 d，即每日9∶00～9∶10 和21∶00～21∶10給動物飲水10 min，其余時間撤去水瓶不給水［3］。定時喂水期結(jié)束后開始應(yīng)激實驗，除正常組外，其他各組在上述兩個時間段內(nèi)給予不確定空瓶刺激，每日1～2次，持續(xù)2 周；正常組自由飲水和攝食。

1.4 行為學(xué)觀察 將空瓶應(yīng)激實驗的10 min 等分為10個時間段，在每個時間段內(nèi)記錄每只大鼠出現(xiàn)攻擊、探究、修飾行為的頻率。攻擊行為：撕咬或攻擊空瓶和籠子。探究行為：前后左右運動和光顧水瓶所在位置。修飾行為：梳理皮毛和洗臉。不出現(xiàn)攻擊、探究、修飾行為的計分為0 分，行為出現(xiàn)的為1 分，得分基于2名觀察者的結(jié)果平均而得，其中1人為雙盲控制。14個觀察日的前3 d 和后3 d的平均積分用于統(tǒng)計分析。

1.5 血清NPY、皮質(zhì)酮（CORT）含量的測定 各組動物于治療結(jié)束后腹腔靜脈取血，血液在冰浴試管中靜置30 min，4℃，3000 轉(zhuǎn)/min 離心10 min，分離血清，保存在-70℃冰箱中，按說明進行測定。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS12.0 統(tǒng)計軟件。所有結(jié)果以表示，采用t 檢驗。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 舒郁寧心湯對焦慮大鼠空瓶應(yīng)激行為影響 見表1。模型組、地西泮組和兩中藥組大鼠的探究、攻擊行為較空白對照組比明顯增加（P＜0.01）；修飾行為較空白對照組比明顯減少（P＜0.01）。舒郁寧心湯大劑量組和地西泮組攻擊行為積分較模型組顯著降低，修飾行為積分較模型組顯著增加（P＜0.05）；舒郁寧心湯小劑量組修飾和攻擊行為積分雖與模型組比有降低，兩組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 各組空瓶應(yīng)激行為積分比較（分，±s）

表1 各組空瓶應(yīng)激行為積分比較（分，±s）

與模型組比較，*P＜0.05；與對照組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。下同。

2.2 舒郁寧心湯對焦慮大鼠各組血清 NPY、CORT含量的影響 見表2。模型組大鼠血清NPY、CORT的含量較空白對照組明顯升高（P＜0.05）；舒郁寧心湯大劑量治療后大鼠血清NPY、CORT的含量較模型組明顯下降（P＜0.05）。

表2 各組血清NPY、CORT 含量比較（±s）

表2 各組血清NPY、CORT 含量比較（±s）

3 討論

焦慮是一種內(nèi)心緊張不安，預(yù)感到要發(fā)生某種不利情況而又難以應(yīng)付的一種不愉快、缺乏安全感的情緒，是機體對某些環(huán)境刺激形成的一種條件反射，可以看作是一種保護性反應(yīng)。但如果焦慮的程度過重或持續(xù)時間過長，則是一個醫(yī)學(xué)問題，過度的焦慮使人感覺緊張、擔(dān)心、注意力不集中，長期這樣會出現(xiàn)疲勞、失眠、快感缺失、安全感缺乏。焦慮癥的發(fā)病除遺傳因素與神經(jīng)生物學(xué)因素外，還源于患者內(nèi)在的心理沖突，是被壓抑的內(nèi)在潛意識中的沖突被激活形成的泛化且持續(xù)的焦慮狀態(tài)［4］。Kennett 等［5］研究發(fā)現(xiàn)給予大鼠空瓶刺激后能引起大鼠出現(xiàn)攻擊，撕咬瓶子和籠子，修飾減少等一系列的焦慮反應(yīng)；林文娟等［6］通過實驗證實空瓶應(yīng)激模型是一種有效的焦慮應(yīng)激模型；李寧等［7］研究也證明空瓶應(yīng)激模型是一種有效的慢性焦慮應(yīng)激模型，且操作簡便、重復(fù)性好，利用空瓶刺激誘發(fā)定時喂水動物的情緒應(yīng)激模型所建立的情緒應(yīng)激動物模型，與以往的利用電擊等建立的條件反射性情緒應(yīng)激模型比較，排除了物理應(yīng)激的干擾，是一種相對純粹的心理應(yīng)激動物模型，且操作簡便、重復(fù)性好，符合實驗研究的要求。本研究結(jié)果顯示：空白對照組的大鼠幾乎沒有攻擊性的行為，得分為零；探究行為較少，主要表現(xiàn)為梳理皮毛和洗臉等修飾行為，修飾行為表明大鼠處于正常狀態(tài)，基本沒有情緒應(yīng)激反應(yīng)。模型組大鼠空瓶刺激期間主要表現(xiàn)為攻擊行為，探究行為顯著增加，修飾行為顯著降低。大劑量舒郁寧心湯、地西泮治療后，大鼠的攻擊行為明顯降低，修飾行為明顯增加，表明大鼠趨于正常。神經(jīng)肽作為神經(jīng)遞質(zhì)廣泛分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，并與去甲腎上腺素共存于交感神經(jīng)末梢，在交感神經(jīng)興奮時與去甲腎上腺素共同釋放調(diào)節(jié)神經(jīng)功能。NPY的生物學(xué)作用極為復(fù)雜，除控制食欲、調(diào)節(jié)心血管系統(tǒng)、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌功能外，還與學(xué)習(xí)、記憶、疼痛、焦慮、抑郁等有關(guān)［8］。下丘腦-垂體-腎上腺軸是機體應(yīng)激反應(yīng)的主要調(diào)節(jié)器，當(dāng)機體長期處于應(yīng)激狀態(tài)時，會出現(xiàn)下丘腦-垂體-腎上腺軸的功能亢進、交感神經(jīng)興奮，分泌促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素，作用于腎上腺皮質(zhì)使之分泌糖皮質(zhì)激素，導(dǎo)致HPA 軸功能持續(xù)亢進，引起海馬神經(jīng)元的損傷及其功能障礙［9］，本研究結(jié)果顯示：焦慮模型組大鼠的血清NPY、CORT 含量明顯升高，大劑量舒郁寧心湯干預(yù)后大鼠血清NPY、CORT 含量明顯降低。

中醫(yī)藥治療情感障礙類疾病立足于整體調(diào)節(jié)，即可疏肝理氣、清心安神，調(diào)節(jié)患者的情緒，又可改善因情緒不暢、氣血不調(diào)導(dǎo)致的軀體癥狀。焦慮癥屬于中醫(yī)學(xué)情志病范疇，可歸屬于“郁證”、“不寐”、“驚悸”、“怔忡”、“百合病”等病的范疇，其發(fā)病大多由情志所傷，肝失疏泄，肝氣郁結(jié)化火，或思慮過度、勞傷心脾、氣血不足、心失所養(yǎng)，心火旺盛所致。臨床表現(xiàn)為：焦躁不安、急躁易怒、神經(jīng)緊張、肌肉緊張、出汗、頭重腳輕、心悸、頭暈、上腹不適等系列癥狀。因此，治療以疏肝理氣、清心安神為主。舒郁寧心湯由酸棗仁、郁金、梔子、百合、五味子組成，方中酸棗仁，入肝、心經(jīng)，養(yǎng)心、安神、益肝，為君藥；郁金入心、肝、膽經(jīng)，疏肝理氣活血，為臣藥；梔子入心、肝、膽經(jīng)，清心泄火除煩，百合子入心、肺經(jīng)，養(yǎng)陰清肺、清心除煩，共為佐藥；五味子，入心、肝、肺經(jīng)，寧心安神，生津斂肺。全方具有疏肝理氣、清心安神之功效。本研究僅觀察舒郁寧心湯對應(yīng)激焦慮大鼠行為，血清NPY、CORT 含量變化進行研究，焦慮證的發(fā)病機理較為復(fù)雜，有關(guān)舒郁寧心湯的作用機理還有待于進一步的研究。

本實驗顯示大劑量舒郁寧心湯可以改善慢性應(yīng)激焦慮大鼠行為，其作用可能與降低血清NPY、CORT 含量有關(guān)，上述作用與其劑量呈正相關(guān)。

［1］吳東輝，劉少文.廣泛性焦慮障礙的神經(jīng)生物學(xué)機制［J］.國外醫(yī)學(xué)：精神病學(xué)分冊，2003，30（2）：124-126.

［2］元曉麗，林文娟.焦慮和抑郁動物模型的研究方法和策略［J］.心理科學(xué)進展，2005，13（3）：327.

［3］李寧，唐啟盛，趙瑞珍，等.慢性焦慮應(yīng)激大鼠行為學(xué)的變化及高架十字迷宮的測評［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2010，28（4）：711-713.

［4］郝偉.神經(jīng)病學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：120-121.

［5］Kennett GA，Dickinson SL，Curzon G.Enhancement of some 5-HT dependent behavioural responses following repeated immobilization in rats［J］.Brain Research，1985，330：253-263.

［6］林文娟，王瑋雯，邵楓.慢性情緒應(yīng)激對大鼠行為、神經(jīng)內(nèi)分泌和免疫反應(yīng)的影響：一個新的情緒應(yīng)激模型［J］.科學(xué)通報，2003，48（9）：926-929.

［7］李寧，唐啟盛，趙瑞珍，等.慢性焦慮應(yīng)激大鼠行為學(xué)的變化及中藥丹桅逍遙散的干預(yù)作用［J］.北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2009，32（12）：826.

［8］Heilig M，Zachrisson O，Thorsell A.Decreased cerebrospinal fluid neuropeptide Y（NPY）in patients with treatment refractory unipolar major depression：preliminary evidence for association with prepro NPY gene polymorphism［J］.J Psychiatr Res，2004，38（2）：113-121.

［9］王海生，孫德清.神經(jīng)精神系統(tǒng)臨床藥理學(xué)［M］.北京：化工工業(yè)出版社，2010：60-61.