廣東省韶關市食品藥品檢驗所（512028）劉旺培 黃義純 陳華龍

維生素B1片為用于預防和治療維生素B1缺乏癥，如腳氣病、神經(jīng)炎、消化不良等藥品，口服吸收快，安全有效?，F(xiàn)行的國家藥品標準沒有對維生素B1片的含量均勻度作規(guī)定。本文介紹高效液相色譜法測定維生素B1的含量均勻度，具有分析方法簡單、快速、分析結(jié)果準確、穩(wěn)定的特點。

1 儀器與試藥

日本島津LC-20A高效液相色譜儀，四元梯度泵，自動進樣器，Lc-solution工作站。維生素B1對照品（中國藥品生物制品檢定所提供），維生素B1片樣品（2012年韶關市評價抽驗和監(jiān)督抽驗）；甲醇和乙腈為色譜純，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[1]色譜柱：Diamonsil，C18（150mm×4.6mm；5μm）；流動相：甲醇-乙腈-0.02mol/L庚烷磺酸鈉溶液（含1%三乙胺，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至5.5，9∶9∶82）；檢測波長為238nm；流速為1.0ml/min；進樣量：10μl。

2.2 線性范圍試驗 精密稱取維生素B1對照品適量，加水稀釋至含維生素B1為0.5026mg/ml的儲備液；分別吸取儲備液溶液1.0ml、2.0ml、3.0ml、5.0ml、10.0ml，置于10ml量瓶中，加水稀釋至刻度。分別取上述溶液10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以濃度作橫坐標（X），以峰面積作縱坐標（Y），作線性回歸，得回歸方程。線性試驗結(jié)果表明：維生素B1在50.5～505μg/ml濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關系?；貧w方程分別為Y＝18240X+39282，r＝0.99999。

2.3 精密度試驗 取含維生素B1濃度分別為101μg/ml的對照品溶液，精密取10μl，注入液相色譜儀，重復進樣5次，計算峰面積的RSD分別為0.1%。結(jié)果顯示，本方法及儀器精密度良好。

附表1 維生素B1加樣回收試驗結(jié)果

附表2 3種批次維生素B1片的含量均勻度測量結(jié)果

2.4 溶液的穩(wěn)定性試驗 取同一維生素B1片樣品溶液，置于室溫下，分別于0h、2h、8h、12h、24h取樣測定，結(jié)果顯示，本品溶液在24h內(nèi)測定，維生素B1的峰面積均無明顯改變，說明本測定溶液較穩(wěn)定。

2.5 回收率試驗 精密量取已知含量的供試品0.06670（含維生素B1為9.513mg）置100ml容量瓶中，分別加入維生素B1（0.505mg/ml）對照品各1.6、2.0、2.4ml，加水稀釋至刻度，精密取10μl注入液相色譜儀，測定回收率，結(jié)果見附表1。

2.6 含量均勻度測定 取維生素B1片（標示量10mg）置100ml量瓶中，加水約70ml，超聲使維生素B1溶解，加水稀釋至刻度，過濾，精密量取續(xù)濾液10μl，注入色譜儀，記錄色譜圖。另取維生素B1對照品適量，加水稀釋至每1ml含0.1mg的溶液，同法測定，按外標法以峰面積計算，即得。

以上述方法分別測定3批維生素B1片的含量均勻度，含量均勻度A+1.80S，，X為標示含量為100的相對含量。

結(jié)果顯示，3批樣品的含量均勻度均符合規(guī)定（A+1.80S≤15.0）。見附表2。

3 討論

3.1 流動相和溶劑的選擇 維生素B1為水溶性物質(zhì)，在水中溶解性很好，在中性水中相對穩(wěn)定，用水做溶劑既經(jīng)濟又環(huán)保，且便于操作。本文選用甲醇-乙腈-0.02mol/L庚烷磺酸鈉溶液（含1%三乙胺，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至5.5，9∶9∶82）為流動相，維生素B1的峰形好，保留時間適中。

3.2 測定波長的選擇 以水為空白，用供試品溶液和對照品溶液在200～400nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果維生素B1在238nm波長處有最大吸收，所以選擇238nm為測定波長，且在238nm波長處雜質(zhì)吸收小。

3.3 結(jié)果 實驗證明，該研究提出的HPLC法測定維生素B1片含量均勻度，選擇性、準確度及專屬性高，且方法簡便、精密度高、重現(xiàn)性好，自動化程度高，可作為維生素B1片的質(zhì)量控制方法。