胡云衢，任海波，宋 宣，李玉柱，崔志茹

慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)是一種可以預(yù)防和治療的常見疾病，其特征是持續(xù)存在的氣流受限，氣流受限呈進(jìn)行性發(fā)展，伴有氣道和肺對有害顆?；驓怏w所致慢性炎性反應(yīng)的增加［1］。該病發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，目前還未完全清楚。研究表明，細(xì)胞免疫功能紊亂即T 淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)失衡在COPD 發(fā)病中起著重要作用［2］。本研究通過觀察COPD 患者細(xì)胞免疫功能和IL-6，IL-8、TNF-ɑ 等細(xì)胞因子水平的變化，探討以上指標(biāo)的變化在COPD 病程中的臨床意義。

1 對象與方法

1.1 對象 選取2010-07至2012-04 急性起病的COPD 患者80例，其中男38例，女42例，年齡49～83歲，中位年齡68歲。所有患者診斷符合2007年中華醫(yī)學(xué)會修訂的《慢性阻塞性肺疾病診治指南》的診斷標(biāo)準(zhǔn)，且近期內(nèi)未用過免疫抑制藥、激素等。對照組選取健康體檢者30例，其中男16例，女14例，年齡48～81歲，中位年齡65歲，無慢性咳嗽、咳痰、氣喘等病史，且行肺功能等相關(guān)檢查明確排除為COPD。兩組性別、年齡具有可比性。

1.2 檢查方法 所有入選對象晨起抽取靜脈血2 ml，加0.4 ml EDTA 抗凝。取100 μl 上述抗凝血，用simule Test 試劑，其中內(nèi)含雙色熒光素標(biāo)記的單克隆抗體CD3、CD4、CD8、CD16、CD56 直接標(biāo)記全血細(xì)胞，4℃避光培養(yǎng)20 min 后加入2 ml 紅細(xì)胞裂解液，混勻后室溫培養(yǎng)l0 min，PBS 液洗滌兩遍。最后加入200 ml PBS 液混勻，立刻上機(jī)檢測。ELISA法檢測血清IL-6、IL-8、TNF-ɑ 的標(biāo)本處理、測定步驟和含量計算嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行。溶血素、淋巴細(xì)胞亞群檢測試劑盒及流式細(xì)胞儀(FACS Calibur)全部由美國BD 公司生產(chǎn)。

1.3 肺功能測定 采用比利時生產(chǎn)的Medi-soft肺功能儀，測定第一秒用力呼氣容積(FEV1)、用力肺活量(FVC)和FEVl/FVC。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS17.0 軟件，計量資料用表示，采用t 檢驗，相關(guān)性檢驗采用直線相關(guān)分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 T 細(xì)胞亞群比較 COPD組總T 細(xì)胞(CD3+)、Th 細(xì)胞(CD3+)，Th/Ts 比值、自然殺傷(NK)細(xì)胞較對照組明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);兩組Ts 細(xì)胞比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)，見表1。COPD組血清CD3+、Th 細(xì)胞、Ts 細(xì)胞、NK 細(xì)胞水平與FEV1 無明顯相關(guān)性(r 分別為0.27，0.15，0.23，0.26，均P＞0.05)。

表1 COPD組與對照組T 細(xì)胞亞群的比較 (%)

2.2 兩組IL-6、IL-8 和TNF-α 比較 COPD組入院時血清IL-8、IL-6 和TNF-α 水平較對照組明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表2;IL-6、IL-8、TNF-α 與FEV1 存在負(fù)相關(guān)(r值分別為-0.74，-0.69，-0.76，均P＜0.05)。

表2 COPD組與對照組細(xì)胞因子的比較(pg/ml)

3 討 論

COPD 患病率及病死率高，居全球死亡原因第4位，但到目前為止其發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚。近年來，COPD 發(fā)病與免疫功能的關(guān)系越來越受到關(guān)注，已有組織病理學(xué)及支氣管活檢研究發(fā)現(xiàn)，T 淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)異常在COPD 發(fā)病中起著重要作用［3，4］;COPD 的發(fā)生與T 淋巴細(xì)胞在氣道內(nèi)和肺實質(zhì)的浸潤密切相關(guān)［5］。文獻(xiàn)［6］報道，COPD 患者外周血中輔助性T 細(xì)胞減少、抑制性T 細(xì)胞增加，且與肺泡損害程度及氣流阻塞的嚴(yán)重程度成正比。本研究結(jié)果顯示，COPD 急性發(fā)作入院時CD3+、Th 細(xì)胞，Th/Ts 比值、NK 細(xì)胞百分率較對照組明顯減低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。其中CD3+細(xì)胞下降，表明外周血中成熟T 細(xì)胞總數(shù)下降導(dǎo)致患者細(xì)胞免疫功能降低;CD4+細(xì)胞下降可引起表面帶有IgA 的B 淋巴細(xì)胞不能分化為分泌IgA 的漿細(xì)胞，導(dǎo)致機(jī)體免疫功能低下而易發(fā)反復(fù)的呼吸道感染;NK 細(xì)胞百分率明顯降低，使其對外來抗原免疫應(yīng)答能力減弱導(dǎo)致細(xì)胞免疫功能降低。

COPD 是一全身性疾病，呼吸道炎性反應(yīng)是誘發(fā)COPD 急性發(fā)作最主要的原因，IL-6、IL-8、TNF-α 參與了COPD 氣道炎性反應(yīng)及重構(gòu)過程［7］。當(dāng)呼吸道受到病毒或細(xì)菌感染時，可激活局部肺泡巨噬細(xì)胞釋放趨化因子，吸引循環(huán)中的炎性反應(yīng)細(xì)胞;釋放炎前細(xì)胞因子(IL-6、IL-8、TNF-α)擴(kuò)大炎性反應(yīng)，可導(dǎo)致血中TNF-α、IL-6、IL-8 升高［8］。IL-6 可顯著增加中性粒細(xì)胞的壞死，使細(xì)胞中的蛋白酶釋放到組織中，從而加重組織損傷和炎性反應(yīng)［9］。本研究顯示，COPD組急性起病入院時血清IL-8、IL-6 和TNF-α 水平明顯高于對照組(P＜0.05)，表明COPD 患者存在IL-6、IL-8、TNF-α的過量產(chǎn)生，上述炎性介質(zhì)不僅可引起支氣管的局部病變，也是引發(fā)COPD 肺外表現(xiàn)和病情持續(xù)進(jìn)展的主要因素。本研究發(fā)現(xiàn)，IL-6、IL-8、TNF-α 與FEV1 呈負(fù)相關(guān)，提示IL-6、IL-8、TNF-α 可反映肺功能損害的嚴(yán)重程度。其中TNF-α 可能是決定COPD 患者肺功能的主要因子之一，TNF-α 在細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中起關(guān)鍵作用，能在短時間內(nèi)水平急劇升高引起全身炎性反應(yīng)綜合征，同時誘導(dǎo)單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生IL-8，共同引起肺組織損傷從而導(dǎo)致肺功能下降。另外，TNF-α 還能促進(jìn)炎性反應(yīng)、血管生成和組織纖維增生，造成氣道重塑狹窄進(jìn)一步導(dǎo)致肺功能下降［10］。綜上所述，測定血清IL-6、IL-8、TNF-α 水平及T 淋巴細(xì)胞亞群對于監(jiān)測COPD 病情具有一定的價值，值得在臨床中推廣應(yīng)用。

［1］GOLD Executive Committee.Global strategy for the diagnosis，management，and prevention of chronic obstructive pulmonary disease (Revised 2011)［EB/OL］.［2012-01-16］.

［2］Barcel6 B，Pons J，F(xiàn)errer J M，et al.Phenotypic characterissfion of T-lymphoeytes in COPD:abnormal CD3+CD25+regulatory T-lymphocyte response to tobacco smoking［J］.Eur Respir J，2008，31(3):555-562.

［3］李曉珍，張 峰，游偉玲.COPD 患者外周血T 淋巴細(xì)胞亞群的變化及烏體林斯的調(diào)節(jié)作用［J］.放射免疫學(xué)雜志，2011，24(1):75-77.

［4］周茂華，黃 蔚，張 敏，等.老年慢性阻塞性肺疾病患者T 淋巴細(xì)胞免疫狀況的研究［J］.現(xiàn)代檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2009，24(4):85-87.

［5］孫雯雯，李燕芹，劉 斌.慢性阻塞性肺病患者的細(xì)胞免疫及細(xì)胞因子水平變化［J］.中國老年學(xué)雜志，2011，30(8):2124-2126 .

［6］吳 艷，惠復(fù)新，趙寅瀅，等.慢性阻塞性肺疾病患者病毒感染狀況及與T 淋巴細(xì)胞免疫功能的關(guān)系［J］.山東大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2011，49(11):117-119.

［7］Kent L，Smyth L，Claytoo C，et al.Cigarette smoke extract induced cytokine and ehemokine gene expression cilaiige8 in COPD macrophages［J］.Cytokine，2008，42(2):205-216.

［8］蔡柏薔.慢性阻塞性肺疾病診斷和治療的新進(jìn)展［J］.武警醫(yī)學(xué)，2007，18(8):565-566.

［9］張銀中，葉鐵虎，趙麗云.細(xì)胞因子白介素-6 和白介素-10 對中性粒細(xì)胞凋亡的影響［J］.武警醫(yī)學(xué)，2004，15(9):5647-649.

［10］劉 倩，郝青林.幾種細(xì)胞因子在慢性阻塞性肺疾病形成機(jī)制中的相關(guān)研究［J］.國際呼吸雜志，2010，30(19):1173-1175.