李昌秀，徐紅梅，楊達(dá)榮，楊 柳，吳時(shí)軍，張 黎，曹友德 (.重慶市合川區(qū)人民醫(yī)院病理科，重慶 4050;.重慶醫(yī)科大學(xué)病理學(xué)教研室，重慶 40006)

食管癌組織中COX－2與PTEN、E－cadherin表達(dá)及臨床病理的關(guān)系

李昌秀1，徐紅梅1，楊達(dá)榮1，楊 柳1，吳時(shí)軍1，張 黎1，曹友德2(1.重慶市合川區(qū)人民醫(yī)院病理科，重慶 401520;2.重慶醫(yī)科大學(xué)病理學(xué)教研室，重慶 400016)

目的:探討COX－2與PTEN及E－cadherin在食管癌組織中的表達(dá)及意義，以期了解三者在食管癌發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移中的相互作用。方法:采用免疫組化法分別檢測COX－2、PTEN、E－cadherin在60例食管癌組織中的表達(dá)情況及相互關(guān)系。結(jié)果:COX－2在食管癌組織中的表達(dá)為70.00%，明顯高于在正常食管鱗狀上皮中的表達(dá)(P＜0.01)。而PTEN及E－cadherin在食管癌中表達(dá)分別為43.33%和38.33%，明顯低于兩者正常食管組織中的陽性率(P＜0.01)。在食管癌中COX－2表達(dá)與PTEN、E－cadherin的表達(dá)及分化程度呈一定的負(fù)相關(guān)，而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。而PTEN及E－cadherin的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論:COX－2、PTEN及E－cadherin共同參與食管癌的發(fā)生且影響癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移;食管癌中COX－2與PTEN及E－cadherin的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性;聯(lián)合檢測COX－2、PTEN及E－cadherin有望成為食管癌早期診斷、評(píng)估生物學(xué)行為及預(yù)后的重要指標(biāo)。

食管癌;環(huán)氧化酶－2(COX－2);PTEN;E－cadherin;免疫組化

食管癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一 ，其發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)復(fù)雜的過程，與多個(gè)基因或多個(gè)分子水平變化密切相關(guān)。近期研究發(fā)現(xiàn)在一些腫瘤中環(huán)氧化酶－2(cyclooxygenase－2，COX－2)的表達(dá)與第10號(hào)染色體同源丟失性磷酸酶和張力蛋白基因 (Phosphatase and Tensin homologue deleted on chromosome 10，PTEN)和 E－鈣黏蛋白(E－cadherin，E－CD)表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，而在食管癌中COX－2與PTEN及E－cadherin的表達(dá)是否也有密切的相關(guān)性目前尚未見報(bào)道。本研究用免疫組化法聯(lián)合檢測食管鱗癌組織中三者的表達(dá)情況，以期探討其表達(dá)水平與在食管癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 病例選擇:收集我院2005年～2011年食管癌根治切除的石蠟標(biāo)本60例。60例食管癌組織標(biāo)本經(jīng)病理組織學(xué)證實(shí)為鱗狀細(xì)胞癌，術(shù)前均未行放療及化療。其中男38例，女22例;年齡46～79歲，平均(63.4±7.6)歲;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移36例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移24例。癌旁正常黏膜組織(距癌組織3 cm以上，經(jīng)病理證實(shí)為分化良好的鱗狀上皮及少量固有層成分)40例作為正常對(duì)照。

1.2 主要試劑及方法:COX－2單克隆抗體(工作液)、PTEN單克隆抗體、E－cadherin單克隆抗體、SP試劑盒均及DAB顯色液購自福建邁新生物工程有限公司。組織經(jīng)10%甲醛固定，4 μm連續(xù)石蠟切片。采用SP免疫組化染色法，按照SP檢測試劑盒說明書的步驟操作。

1.3 結(jié)果的判定:參照許良中的資料［1］，綜合考慮切片中陽性細(xì)胞占所觀察同類細(xì)胞數(shù)的百分比和陽性細(xì)胞著色強(qiáng)度兩項(xiàng)指標(biāo)，半定量判斷結(jié)果。即先在低倍鏡下取選抗體表達(dá)部位(細(xì)胞漿、膜或核)的最強(qiáng)著色區(qū)，然后選10個(gè)高倍鏡視野(×400)，分別記數(shù)100個(gè)細(xì)胞，其顏色深淺參考文獻(xiàn)評(píng)分:無棕黃色顆粒為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。染色細(xì)胞所占百分比打分:無陽性細(xì)胞為0分，1% ～10%為1分，11% ～50%為2分，≥51%為3分。兩項(xiàng)乘積得分≥3分定為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料進(jìn)行χ2檢驗(yàn);兩個(gè)變量相關(guān)性分析采用雙變量相關(guān)分析P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 COX－2與PTEN及E－cadherin在食管癌中的表達(dá):COX－2蛋白陽性產(chǎn)物為棕黃色顆粒，位于食管癌細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)，為強(qiáng)表達(dá)(見圖1A);PTEN在正常食道鱗狀上皮中表達(dá)于細(xì)胞核，為強(qiáng)表達(dá)(見圖1B);E－cadherin在正常食道鱗狀上皮中表達(dá)于細(xì)胞膜(見圖1C)。COX－2在食管癌組織中的表達(dá)明顯高于在正常食管鱗狀上皮中的表達(dá)(P＜0.01)。而PTEN及E－cadherin在食管癌中表達(dá)分別為43.33%和38.33%，明顯低于兩者正常食管組織中的陽性率(P＜0.01)。見表1。

表1 COX－2、PTEN及E－cadherin在食管癌中的表達(dá)

注:與正常食管組織比較，①P＜0.01

表2 COX－2與PTEN及E－cadherin在食管癌中的表達(dá)與臨床病理的關(guān)系

2.2 COX－2與PTEN、E－cadherin在食管癌中的表達(dá)及臨床病理的關(guān)系:在食管癌中COX－2表達(dá)與PTEN表達(dá)、E－cadherin的表達(dá)及分化程度呈一定的負(fù)相關(guān)，而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。分化程度與PTEN及E－cadherin的表達(dá)無明顯相關(guān)。PTEN及E－cadherin與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。而PTEN、E－cadherin及COX－2在食管癌中的表達(dá)與患者的性別及年齡無相關(guān)性(P＞0.05)。見表2。

圖1C E－cadherin在食管正常組織中的表達(dá)(SP×200)

3 討論

近年來COX－2在多種腫瘤中表達(dá)情況受到關(guān)注，已從多方面證明COX－2在多種惡性腫瘤中表達(dá)上調(diào)，并且與腫瘤的發(fā)生及侵襲轉(zhuǎn)移密切有關(guān)［2－3］。COX－2可通過刺激腫瘤細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞凋亡、抑制機(jī)體免疫功能等促使癌前病變向腫瘤轉(zhuǎn)化，可以通過促進(jìn)脈管形成參與浸潤轉(zhuǎn)移。本研究顯示，食管癌組織中COX－2的表達(dá)陽性率為70.00%，較正常食管組織中COX－2的表達(dá)明顯升高，且與腫瘤的分化程度(r= －0.585，P＜0.01)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況(r=0.501，P ＜0.01)相關(guān)。Al－Maghrabi等對(duì)94例結(jié)直腸癌病例的分析發(fā)現(xiàn)COX－2與結(jié)直腸癌的分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及淋巴管轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)［4］。提示COX－2參與了食管癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移，可能是食管癌發(fā)生的一個(gè)早期事件和預(yù)后不良的指標(biāo)。

PTEN基因作為第一個(gè)具有雙特異性磷酸酶活性的抑癌基因，其在眾多惡性腫瘤中存在突變、缺失或低表達(dá)，導(dǎo)致其抑癌功能減弱或喪失。Hafsi等發(fā)現(xiàn)PTEN的過甲基化導(dǎo)致PTEN低水平轉(zhuǎn)錄及PTEN蛋白的減少甚至缺失［5］，從而引起胃腸道上皮過度增生進(jìn)而形成腫瘤。筆者的研究結(jié)果也顯示食管癌中PTEN的陽性表達(dá)率(43.33%)顯著低于正常食管組織(92.5%)(P＜0.01)，且淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中PTEN表達(dá)明顯低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P＜0.01)。這與Ettl等在涎腺癌中的研究結(jié)果一致［6］，我們推測PTEN蛋白可能對(duì)腫瘤細(xì)胞的遷移有抑制作用，是食管癌轉(zhuǎn)移的負(fù)相關(guān)因子。

E－cadherin是重要的鈣依賴性黏附分子，可通過細(xì)胞接觸抑制作用阻礙腫瘤細(xì)胞的去分化和惡性增殖，同時(shí)可通過保持細(xì)胞黏附，抑制腫瘤細(xì)胞的浸潤或脫離原發(fā)部位向局部淋巴結(jié)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。Saad等研究表明E－cadherin缺失或低表達(dá)可以成為預(yù)測胃癌疾病進(jìn)展、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后評(píng)估的有效指標(biāo)，甚至可以作為腫瘤轉(zhuǎn)移的一個(gè)標(biāo)志物［7］。本研究結(jié)果也顯示食管癌中的陽性表達(dá)率(38.33%)顯著低于正常食管組織(87.5%)(P＜0.01)，且淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中E－cadherin表達(dá)明顯低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P＜0.01)。這提示可能在食管癌發(fā)生早期E－cadherin基因就已經(jīng)發(fā)生改變，并隨腫瘤的進(jìn)展最終完全消失，致使維持細(xì)胞間緊密連結(jié)、聚集的黏附系統(tǒng)功能喪失，促使細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化、增殖及侵襲轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)。

有學(xué)者發(fā)現(xiàn)選擇性COX－2抑制劑可上調(diào)胃癌細(xì)胞PTEN基因表達(dá)，并推測COX－2和PTEN在腫瘤的發(fā)生過程中起著協(xié)同作用［8］。我們的研究結(jié)果也顯示在COX－2陰性組中食管癌PTEN表達(dá)陽性率為77.78%，顯著高于COX－2陽性組(28.57%)，兩者表達(dá)之間存在顯著的負(fù)相關(guān)(r=－0.615，P＜0.01)。St－Germain等用PI3K抑制劑作用于子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株后［9］，Akt磷?；灰种频耐瑫r(shí)COX－2的表達(dá)也減低。而PI3K的產(chǎn)物PIP3與細(xì)胞內(nèi)含有pH結(jié)構(gòu)域的Akt和PDK1結(jié)合后激活A(yù)kt，且PTEN能夠使PIP3去磷酸化，從而推測COX－2可能通過PI3K/Akt通路參與PTEN的調(diào)控。我們的研究顯示在食管癌COX－2與E－cadherin的表達(dá)(r=－0.415，P＜0.01)也呈一定的負(fù)相關(guān)，這與Jang等在膀胱移行細(xì)胞癌發(fā)現(xiàn)COX－2與E－cadherin呈負(fù)相關(guān)基本一致［10］。同樣Luo等用RT－PCR技術(shù)檢測了塞來昔布作用鼻咽癌細(xì)胞后細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力明顯被抑制［11］，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的E－cadherin mRNA量較正常組明顯增加，說明COX－2抑制劑能夠增加E－cadherin的表達(dá)。而且有學(xué)者發(fā)現(xiàn)術(shù)前短期應(yīng)用塞來昔布可提高E－cadherin表達(dá)水平，對(duì)胃癌浸潤轉(zhuǎn)移具有潛在的治療意義，同時(shí)耐受性良好［12］。但是關(guān)于COX－2如何調(diào)節(jié)E－cadherin表達(dá)，至今還未見報(bào)道。

總之，本研究顯示COX－2與PTEN及E－cadherin存在負(fù)相關(guān)，COX－2可能通過某種機(jī)制負(fù)調(diào)控PTEN及E－cadherin，參與食管癌細(xì)胞的發(fā)生、浸潤和轉(zhuǎn)移，聯(lián)合檢測三者將有助于臨床評(píng)估病情和判斷預(yù)后，對(duì)食管癌的基因靶向治療也提供了一定的方向。但是還需要進(jìn)一步用基因及蛋白定量等方法去證實(shí)食管癌中COX－2、PTEN及E－cadherin的相關(guān)性，而且關(guān)于COX－2、PTEN及E－cadherin共同參與食管癌演化過程的具體機(jī)制還需進(jìn)一步探討。

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Expression of COX －2，PTEN and E －cadherin in esophageal carcinoma and their correlation with clinical－pathological characteristics

LI Chang － xiu，XU Hong － mei，YANG Da － rong，et al.(Department of Pathology，People's Hospi-

tal of Hechuan District，Hechuan 401520，China)

Objective To investigate the expression of COX－2，PTEN and E－cadherin in the esophageal carcinoma and to explore their interactions.Method The expression of COX －2，PTEN and E －cadherin was evaluated in 60 cases with esophageal carcinoma by immunohistochemical staining methods.Results The positive rate of COX－2 was 70.00%，which was significantly higher in esophageal carcinoma than that in normal squamous cell of esophagus(P＜0.01).The positive rate of PTEN and of E－cadherin was 43.33%and 38.33%respectively，which was significantly weaker in esophageal carcinoma than that in normal squamous cell of esophagus(P ＜0.01).The expression of COX－2 was negatively correlated with PTEN，E －cadherin and differentiating degree.But it was positively correlated with the lymph－node metastasis.The expression of PTEN and E－cadherin was negatively correlated with the lymph－node metastasis.Conclusion COX －2，PTEN and E －cadherin may play an important role in esophageal carcinoma development and lymph node metastasis.The expression of COX－2 is negatively correlated with PTEN and E－cadherin in esophageal carcinoma.There may be an interaction action among COX －2，PTEN and E －cadherin.Expressions of COX －2，PTEN and E －cadherin may be helpful in early diagnosis and evaluation of the biological behavior and prognosis of esophageal carcinoma.

Esophageal carcinoma;Cyclooxygenase－2;PTEN;E－cadherin;Immunohistochemical staining

重慶市衛(wèi)生局醫(yī)學(xué)科技項(xiàng)目［項(xiàng)目編號(hào):2010－2－433］通訊作者:曹友德

2012－06－28 編校:潘宏竹］