田紅菊 梁亞芳 陳建林

細(xì)胞DNA倍體分析聯(lián)合陰道鏡檢查對宮頸病變的診斷價(jià)值

田紅菊 梁亞芳 陳建林

目的探討DNA倍體分析系統(tǒng)聯(lián)合陰道鏡檢查在篩查宮頸病變的價(jià)值。方法對我院2012年3月至9月婦科門診參加宮頸癌前病變篩查婦女222 例，采用宮頸上皮細(xì)胞DNA倍體分析方法，對其中30例結(jié)果異常者皆進(jìn)一步在陰道鏡下作多點(diǎn)宮頸活體組織病理檢查。結(jié)果共檢出宮頸上皮細(xì)胞DNA倍體異常者30例，占13.51 %，其中異倍體細(xì)胞(0

DNA倍體分析；陰道鏡；篩查;宮頸癌前病變

當(dāng)前發(fā)病率位居我國婦科惡性腫瘤之首的宮頸癌，是一種目前唯一可通過醫(yī)學(xué)干預(yù)能使發(fā)病率及死亡率皆可下降的人類腫瘤。而預(yù)防和控制宮頸癌的關(guān)鍵措施之一是早期診斷和治療宮頸癌前病變。本研究通過對我院婦科門診行癌前病變篩查222例婦女，采用細(xì)胞DNA倍體分析方法，對其結(jié)果異常者皆進(jìn)一步行陰道鏡檢及活檢病理診斷，對其結(jié)果進(jìn)行分析、比較，以探討DNA倍體分析系統(tǒng)在宮頸癌前病變篩查的應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料 我院婦科門診2012年3月至2012年9月參加宮頸癌前病變篩查婦女222例，采用DNA倍體分析檢測方法，對結(jié)果異常的婦女，皆進(jìn)行陰道鏡檢查，并同時(shí)多點(diǎn)取宮頸組織送病檢?；颊吣挲g22～52歲, 平均40.03歲。

1.2方法

1.2.1材料 普查試劑盒由武漢蘭丁腫瘤早期診斷檢測中心提供，其中包括：宮頸刷、盛有固定液的標(biāo)本管、標(biāo)簽、申請單。

1.2.2取材 受檢者在受檢前3 d無同房史，受檢前48 h不得作陰道沖洗及任何陰道治療，用特制宮頸刷，將刷頭中央較長刷絲從宮頸外口插入宮頸管內(nèi)，兩邊較短刷絲抵住宮頸黏膜面，始終朝一個(gè)方向(順時(shí)針或逆時(shí)針)旋轉(zhuǎn)3～5圈，取出宮頸刷，拔下刷頭，浸泡在樣本收集管中， 擰緊瓶蓋，用力振搖數(shù)次，送DNA試驗(yàn)室制片，用Feulgen染色作DNA定量測定。

1.2.3陰道鏡檢查 受檢者取截石位，窺陰器暴露宮頸后，用生理鹽水棉球擦拭宮頸分泌物，作初步觀察。然后以3%冰醋酸及2.5%碘酒涂布宮頸，仔細(xì)觀察陰道鏡圖像，并拍攝存檔。所有病例均在陰道鏡下定位取組織數(shù)塊，分點(diǎn)分瓶用1%福爾馬林液固定后送病理檢查。

1.3結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)

1.3.1DNA倍體分析 采用武漢蘭丁醫(yī)學(xué)高科技有限公司所提供的全自動(dòng)細(xì)胞圖像分析系統(tǒng)(automatic imaging cytometry，AICM)對染色片中的每一個(gè)細(xì)胞核進(jìn)行掃描分析，根據(jù)每個(gè)細(xì)胞核的123個(gè)核特征參數(shù)值，自動(dòng)進(jìn)行分類和計(jì)數(shù)，自動(dòng)打印DNA倍體分析直方圖和細(xì)胞點(diǎn)陣圖。以測定細(xì)胞核IOD(intergrated optical density)來判斷DNA含量。以DNA指數(shù)(DNA index)來表示DNA的含量。 DNA定量細(xì)胞學(xué)常用C(content)作為單位來衡量DNA含量。在靜止期(G0期)和DNA合成前期(G1期)的細(xì)胞， 核染色體對數(shù)為23對，稱為DNA二倍體細(xì)胞(diploidy或2 c細(xì)胞)。在DNA合成期(S期)的細(xì)胞，染色體對數(shù)在23對至46對之間，可出現(xiàn)非整倍體細(xì)胞，如3 c細(xì)胞。DNA合成后期(G2期)的細(xì)胞，染色體為46對，為DNA四倍體細(xì)胞(tetraploidy,或4 c細(xì)胞)。出現(xiàn)DNA指數(shù)>2.5的判斷為DNA倍體異常細(xì)胞(5 c細(xì)胞)。

根據(jù)AcCell系統(tǒng)診斷軟件所做的細(xì)胞DNA倍體分析結(jié)果和建議如表1所示：

表1 根據(jù)AcCell系統(tǒng)診斷軟件所做的細(xì)胞DNA部體分析結(jié)果與建議

注：(DNA倍體異常細(xì)胞：指DNA含量在5 c以上的細(xì)胞)。

1.3.2陰道鏡及病理學(xué)檢查 凡DNA定量分析結(jié)果異常，均進(jìn)行陰道鏡檢查并對宮頸可疑部位進(jìn)行組織活檢。陰道鏡檢查異常圖像包括：白色上皮；點(diǎn)狀血管；鑲嵌；異型血管；真性糜爛；浸潤癌。病理診斷報(bào)告分別為正常、宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ或浸潤癌。

2 結(jié)果

2.1宮頸細(xì)胞DNA異常結(jié)果的檢出率 宮頸細(xì)胞DNA檢測結(jié)果222份樣本中，正常2 c細(xì)胞為主192例，占86.49%；DNA指數(shù)大于2.5細(xì)胞30例，占13.51%。其中宮頸上皮細(xì)胞DNA倍體分析為5 c細(xì)胞<3個(gè)有19例，占63.3%；5 c細(xì)胞3～5個(gè)有5例，占16.7%；5 c細(xì)胞5～15個(gè)有3例，占10.0%；5 c細(xì)胞≥15個(gè)有3例，占10%。

2.2AcCell系統(tǒng)診斷軟件所作的宮頸細(xì)胞DNA倍體分析異常結(jié)果與陰道鏡下活檢病理結(jié)果對比 發(fā)現(xiàn)DNA倍體異常的30例，皆進(jìn)一步行陰道鏡檢及活檢，其病理診斷為宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)12例，占40.0%。其中CINⅠ6例，占20%；CINⅡ3例，占10%；CINⅢ 3例，占10%；宮頸炎18例，占60.0%。

宮頸上皮細(xì)胞DNA倍體分析為5 c細(xì)胞<3個(gè)有19例，其中檢出CINⅠ4例，陽性檢出率為21.1%。5 c細(xì)胞3～5個(gè)有5例，其中 CINⅠ2例， CINⅡ1例，陽性檢出率為60%。5 c細(xì)胞5～15個(gè)有3例，其中CINⅡ1例，CINⅢ1例，陽性檢出率為66.7%。5 c細(xì)胞≥15個(gè)有3例， CINⅡ1例，CINⅢ2例，陽性檢出率為100%。

2.3陰道鏡圖像與病理診斷的關(guān)系 正常陰道鏡圖像10例，檢出CIN1例，占10.0%。異常陰道鏡圖像20例，檢出CIN 11例，占55.0%。異常陰道鏡圖像中白色上皮14例，占70.0%；血管異型1例，占5.0%；點(diǎn)狀血管1例，占5.0%；鑲嵌4例，占20%。

3 討論

3.1宮頸細(xì)胞DNA檢測在宮頸病變篩查中的診斷價(jià)值 腫瘤病理學(xué)研究顯示，細(xì)胞癌變發(fā)病時(shí)都需要經(jīng)過5個(gè)階段：基因突變，增生，非典型增生，原位癌，浸潤癌。前4個(gè)階段為癌前病變，而癌前病變早期是很難被傳統(tǒng)的診斷方法發(fā)現(xiàn)。但細(xì)胞核內(nèi)DNA含量、DNA在細(xì)胞核內(nèi)的分布和排列形式、細(xì)胞核大小的改變則是細(xì)胞癌變過程中最早期的變化。蘭丁DNA倍體分析系統(tǒng)即通過對細(xì)胞核內(nèi)DNA含量或倍體的測定和分析來判定細(xì)胞的生理狀態(tài)和病理改變，是近十年來在惡性腫瘤診斷中發(fā)展的一種新方法[1]。相對傳統(tǒng)的細(xì)胞學(xué)的主觀、經(jīng)驗(yàn)診斷，其采用自動(dòng)細(xì)胞掃描、診斷系統(tǒng)及質(zhì)控系統(tǒng)，保證了結(jié)果的客觀準(zhǔn)確，消除了人為因素誤差。實(shí)現(xiàn)了由經(jīng)驗(yàn)細(xì)胞學(xué)向循證細(xì)胞學(xué)的跨越。國外有文獻(xiàn)報(bào)道對一組宮頸病變的婦女進(jìn)行DNA倍體分析，所有慢性宮頸炎者宮頸上皮細(xì)胞均為二倍體，而CIN者可見不同比例的異倍體細(xì)胞，CINⅢ病例中的異倍體細(xì)胞更可高達(dá)95.2%[2]。本研究中DNA倍體異常的30例中，在陰道鏡指導(dǎo)下活檢病理診斷CIN12例，陽性檢出率為40%(12/30)。其中5 c細(xì)胞<3個(gè)有19例，檢出CINⅠ4例，陽性檢出率為21.1%。5 c細(xì)胞3～5個(gè)有5例，檢出 CINⅠ2例， CINⅡ1例，陽性檢出率為60%。5 c細(xì)胞5～15個(gè)有3例，檢出CINⅡ1例，CINⅢ1例，陽性檢出率為66.7%。5 c細(xì)胞≥15個(gè)有3例， CINⅡ1例，CINⅢ2例，陽性檢出率為100%。其結(jié)果證實(shí)了DNA異倍體細(xì)胞與CIN發(fā)生密切相關(guān)，且其數(shù)量與CIN病變程度相關(guān)，異常細(xì)胞越多，病變程度越重。本研究中在高級別中陽性檢出率更高，可能與本研究樣本數(shù)較小有關(guān)。

3.2宮頸細(xì)胞DNA篩查異?；蚺R床可疑患者應(yīng)做陰道鏡檢 對宮頸細(xì)胞DNA篩查異常及臨床可疑患者，均應(yīng)行陰道鏡檢查及取活組織病理檢查。陰道鏡檢查是利用陰道鏡放大技術(shù)，全面觀察鱗柱細(xì)胞交界處及移行帶肉眼看不到的微小的病變，評定其病變，確定并取活體組織，做出組織學(xué)診斷。對篩查、診斷女性宮頸病變有重要價(jià)值。特別對宮頸轉(zhuǎn)化區(qū)完全看不見或不滿意的陰道鏡檢查而宮頸細(xì)胞DNA異?；颊咭欢ㄒ袑m頸管騷刮及宮頸活檢病理檢查。在本組DNA倍體異常的30例中，我們發(fā)現(xiàn)陰道鏡圖像異常20例，其中CIN11例，陽性檢出率為55.0%。陰道鏡圖像異常中以白色上皮最常見，占70%。但在陰道鏡圖像正常者中，仍發(fā)現(xiàn)1例為CIN，有10.0% 的漏診率。故DNA倍體分析系統(tǒng)與陰道鏡聯(lián)合應(yīng)用可使宮頸病變陽性檢出率有所提高。

綜上，DNA倍體分析系統(tǒng)可作為宮頸癌前病變篩查的一種新的方法，結(jié)合陰道鏡檢查和病理活檢可以早期診斷宮頸癌前病變，對降低宮頸癌的死亡率具有明顯意義。

[1] 孫小蓉, 汪鍵. Alfred Boecking. DNA倍體分析系統(tǒng)用于宮頸癌及上皮內(nèi)瘤變的診斷及檢測. 中華病理學(xué)雜志, 2005，4(7)：435-437.

[2] Rihet S, Lorenzato M, Clavel C. Oncogenic human papillomaviruses and ploidy in cervical lesions. J Clin Pathol,1996,49:892-896.

410007 湖南省職業(yè)病防治院(田紅菊 梁亞芳);中南大學(xué)附屬湘雅二醫(yī)院(陳建林)

陳建林 E-mail:jianlinchen2009@126.com