★ 劉海云 吳歡歡 何志堅3

(1.江西中醫(yī)學(xué)院 南昌 330004；2.江西中醫(yī)學(xué)院科技學(xué)院 南昌 330009；3.江西省腫瘤醫(yī)院 南昌 330029)

菟絲子提取物對亞急性衰老小鼠的抗衰老作用研究*

★ 劉海云1**吳歡歡2何志堅3***

(1.江西中醫(yī)學(xué)院 南昌 330004；2.江西中醫(yī)學(xué)院科技學(xué)院 南昌 330009；3.江西省腫瘤醫(yī)院 南昌 330029)

目的：研究菟絲子提取物對實驗性衰老小鼠的抗衰老作用及機(jī)制。方法：以D-半乳糖致亞急性衰老小鼠為模型,同時給予灌胃不同濃度的菟絲子提取物,6周后,采用比色法測定肝臟和腦組織超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)活性來研究菟絲子延緩衰老的作用。結(jié)果：菟絲子提取物能顯著增加肝臟和腦組織中SOD和GSH-Px活性,降低其MDA含量。結(jié)論：菟絲子提取物抗衰老作用可能通過提高抗氧化酶SOD、GSH-PX活力，降低脂質(zhì)過氧化物MDA含量而實現(xiàn)。

菟絲子提取物；D-半乳糖；衰老小鼠；SOD；MDA；GSH-Px

緩衰老或抗衰老研究，是衰老生物學(xué)和老年醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域的熱點，衰老雖不可避免,但延緩衰老卻是可能的。[1]目前衰老的病理機(jī)制存在多種學(xué)術(shù)觀點,自由基學(xué)說是其中較重要的一種觀點。菟絲子為旋花科一年生寄生性蔓草菟絲子或大菟絲子的成熟種子。具有補(bǔ)肝腎、益精明目、固精縮尿、止瀉安胎的功效。[2]菟絲子作為一種常用的補(bǔ)陽藥物，在生殖內(nèi)分泌方面的研究較多，但在抗衰老方面的研究較少。本實驗從衰老的氧化損傷入手，采用D-gal衰老模型小鼠，[3]觀察菟絲子提取物對小鼠肝臟和腦組織中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)活性的影響，進(jìn)一步研究菟絲子抗衰老的作用機(jī)制。

1 材料

1.1 動物 昆明種5周齡小鼠50只,體質(zhì)量20-25g,雌雄各半，購自江西中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心。各組小鼠同室分籠飼養(yǎng),顆粒飼料喂養(yǎng),自由飲水，實驗前適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。

1.2 試劑 D-半乳糖(批號：274512)購自上海國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。超氧化物歧化酶(SOD)測定試劑盒(批號20120121)、丙二醛(MDA)測定試劑盒(批號20120217)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)活力測定試劑盒(批號20120214)均購于南京建成生物公司，菟絲子購自南昌新圣愛國藥館,其它常用試劑為國產(chǎn)分析純。

1.3 儀器 723型分光光度計(上海第三分析儀器廠),恒溫水浴鍋(江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司)微量進(jìn)樣器(德國eppendorf公司),MG-2型Y迷宮(張家港市生物醫(yī)學(xué)儀器廠),AdventurerTM電子天平(奧豪斯國際貿(mào)易有限公司)，TECAN酶標(biāo)儀sunrise(奧地利TECAN公司)，TGL16G型臺式高速離心機(jī)(上海醫(yī)用分析儀器廠)。

2 方法

2.1 菟絲子提取物的制備[4]菟絲子藥材500g，加4 000mL水浸泡2h，至微脹，文火煎2次，每次煎煮0.5h,過濾。合并2次提取液，濃縮至生藥濃度為0.4g/mL，置4℃冰箱貯藏，備用。

2.2 動物分組與給藥 小鼠隨機(jī)分為5組:正常對照組、衰老模型組、菟絲子提取物100、200、300mg.kg-1劑量組每組10只。除正常對照組外,其他各組按文獻(xiàn)[5-6]方法造模。將D-gal溶于注射用水,體積分?jǐn)?shù)10%,注射劑量為10mL/kg,頸背部皮下注射,每日1次,連續(xù)6周,正常對照組注射同體積的0.9%生理鹽水。在造模的同時,按低、中、高劑量菟絲子組,每日1次,灌胃給藥,對照組和模型組給同體積的0.9%生理鹽水，連續(xù)6周。

2.3 肝臟和腦組織的制備 末次給藥后30min眼眶取血,3 000r/min離心10min取血清。取血后迅速在冰上取肝臟和腦組織,用冰冷的生理鹽水(4℃)沖洗2次,濾紙拭干后,立即稱重,剪碎組織塊后,置于勻漿瓶中分別用9倍冰冷生理鹽水勻漿10min(勻漿器的末端置于冰水中)，分別制成10%肝臟組織和10%腦組織勻漿,然后以3 000r·min-1離心15min,取上清液待用，-70℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.4 肝臟和腦組織中MDA水平、SOD活性和GSH-PX測定 按測試盒說明書方法測定SOD活性、MDA和GSH-PX含量,重復(fù)3次,取平均值。

3 結(jié)果

3.1 菟絲子對衰老小鼠肝臟SOD、MDA和GSH-Px活性的影響 與正常對照組比較,模型組小鼠肝臟中MDA含量顯著提高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),SOD和GSH-Px活性明顯降低(P<0.05，P<0.01)；與模型組比較，菟絲子中、高劑量組MDA含量顯著降低(P<0.01),SOD和GSH-Px活性明顯升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，P<0.01),并呈劑量依賴性。見表1。

表1 菟絲子對衰老小鼠肝臟組織中SOD、MDA和GSH-Px的影響

3.2 菟絲子對衰老小鼠腦組織中SOD、MDA和GSH-Px活性的影響 與正常對照組比較,模型組小鼠腦組織中MDA含量顯著提高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),SOD和GSH-Px活性明顯降低(P<0.05，P<0.01)；與模型組比較，菟絲子中、高劑量組MDA含量顯著降低(P<0.05),SOD和GSH-Px活性明顯升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，P<0.01),并呈劑量依賴性。見表2。

表2 菟絲子對衰老小鼠腦組織中SOD、MDA和GSH-Px的影響

4 討論

衰老是生物體隨著時間的推移所帶來的一種自發(fā)的必然過程，它是復(fù)雜的自然現(xiàn)象，表現(xiàn)為結(jié)構(gòu)和機(jī)能衰退，適應(yīng)性和抵抗力下降。[7]眾所周知,由于衰老原因紛繁復(fù)雜,但眾多的學(xué)說之中,最為中外學(xué)者所認(rèn)同的是自由基學(xué)說。隨著年齡的增長,自由基產(chǎn)生增多,而清除自由基的相關(guān)酶活性下降以及機(jī)體免疫功能下降等多種因素均是機(jī)體發(fā)生衰老的重要機(jī)理。D-半乳糖致衰老小鼠模型，D-半乳糖在半乳糖氧化酶作用下，參與氧化反應(yīng)，生成糖和過氧化氫反應(yīng)過程中產(chǎn)生超氧陰離子自由基，其過量損傷可產(chǎn)生衰老反應(yīng)。[8]實驗表明菟絲子提取物具有抗氧化的作用,這可能與其直接或間接清除自由基對機(jī)體的損害作用,消除D-半乳糖引起的自由基產(chǎn)生增多,避免了因抗氧化性物質(zhì)消耗而導(dǎo)致組織損傷有關(guān),從而達(dá)到延緩衰老的作用。

本研究采用D-半乳糖小鼠頸背部皮下注射6周,造成亞急性衰老小鼠模型,其一般狀態(tài)欠佳,Y迷宮實驗結(jié)果表明模型組小鼠學(xué)習(xí)記憶能力顯著減退,而菟絲子各劑量組小鼠毛色光澤、精神狀態(tài)良好,學(xué)習(xí)記憶能力明顯改善。

SOD是機(jī)體防御體系的一種重要抗氧化酶,作為體內(nèi)清除自由基的關(guān)鍵酶,通過清除氧自由基從而保護(hù)細(xì)胞免受氧自由基損傷,故檢測SOD活性高低可間接反映機(jī)體清除自由基、保護(hù)細(xì)胞免受自由基損傷的能力。[9]MDA是機(jī)體在氧自由基作用下生成的脂質(zhì)過氧化物,可反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的水平,MDA生成的多少可間接反映組織細(xì)胞損傷的程度。[10]依據(jù)自由基學(xué)說,若能通過適量補(bǔ)充外源性抗氧化劑,增強(qiáng)機(jī)體自由基防御系統(tǒng)機(jī)能,即可達(dá)到抗衰老的目的。本實驗發(fā)現(xiàn)菟絲子提取物可不同程度地提高衰老小鼠肝臟和腦組織中SOD活性，抑制MDA含量的升高，表明兩者可提高體內(nèi)抗氧化酶活性，抑制脂質(zhì)過氧化發(fā)生，增強(qiáng)體內(nèi)自身抗氧化能力，對延緩衰老能起到一定的積極作用。

GSH-Px是廣泛存在于機(jī)體內(nèi)的一種重要的催化過氧化分解的酶,它特異性地催化GSH對過氧化氫的還原反應(yīng),抑制煙酸胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)形成OH-,削弱對脂質(zhì)過氧化作用的損傷,從而起到保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能完整的作用。[11]本實驗結(jié)果表明菟絲子提取物可顯著提高D-半乳糖致衰老小鼠肝臟和腦組織GSH-Px活性,提高體內(nèi)抗氧化酶活性,減輕自由基對生物大分子的傷害。

總之，本實驗應(yīng)用菟絲子提取物干預(yù)D-半乳糖誘導(dǎo)的亞急性衰老小鼠，能明顯改善衰老的行為學(xué)變化,提高衰老小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力,顯著提高SOD和GSH-Px活力，降低MDA含量，延緩衰老的進(jìn)程。提示菟絲子提取物可通過提高抗氧化酶的活性，抑制自由基損傷，防止脂質(zhì)過氧化的作用來延緩衰老，對進(jìn)一步開發(fā)菟絲子的臨床應(yīng)用前景提供了實驗依據(jù)。

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征稿啟事

《江西中醫(yī)藥》所設(shè)的重點欄目有《明醫(yī)心鑒》、《滕王閣醫(yī)話》等?！睹麽t(yī)心鑒》以介紹名老中醫(yī)經(jīng)驗和中醫(yī)臨證心得為主，重點刊載中醫(yī)關(guān)于疑難病的診療經(jīng)驗，要求觀點、方法新，經(jīng)驗獨到?！峨蹰w醫(yī)話》主要反映中醫(yī)教學(xué)、科研、臨床的一得之見，要求以小見大，有感而文，語言生動流暢，可讀性強(qiáng)，富于知識性、趣味性。

ResearchontheAnti-agingActionoftheExtractsofCuscutaChinensisinSubacuteAgingMice*

LIUHai-yun1**,WUHuan-huan2,HEZhi-jian3***

1.JiangxiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Nanchang330004;2.ScienceandTechnologycollegeofJiangxiUniversityofTCM,Nanchang330009;3.JiangxiTumorHospital,Nanchang330029

Objective: To observe the Anti-aging activity of the extracts of C. chinensis in the experimental aging mice. Method：The subacute aging mice model by D-galactose(D-gal) were given the extracts of C.chinensis via i.g. gtt. After 6 weeks, the colorimetric method was used to determine the cellular content of malondialdehyde(MDA)，the enzyme activity of superoxide dismutase(SOD) and glutathione peroxidase(GSH-PX). Results：Aqueous extract of C.chinensis could improve the activities of SOD,GSH-Px to differentdegree and decrease the contents of MDA. Conclusiou：The anti-aging activity of the extracts of C. chinensis is achieved by improving the activity of SOD and GSH-PX，and lowering the contents of MDA.

Extracts of Cuscuta Chinensis；D-Gal；Aging Model Mice； SOD；MDA；GSH-Px

江西省教育廳青年科學(xué)基金項目(項目編號：GJJ12541)；江西省衛(wèi)生廳中醫(yī)藥科研基金項目(項目編號：2011A137)；江西中醫(yī)學(xué)院校級課題項目(項目編號：2012ZR046)。

**作者簡介：劉海云(1979-)，女，山東菏澤人，碩士，講師，從事中醫(yī)藥抗衰老的研究工作,Tel：0791-87118930，E-mail：liuhaiyun98175@163.com。

***通訊作者：何志堅，碩士，副主任，從事腫瘤的研究工作,Tel：0791-88313571，E-mail：jxncga@126.com。

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2013-07-18)