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        通脈丸方濃縮液的急性毒性實驗

        2013-10-31 09:17:44陳天朝宋薇王麗徐麗軍
        中國現(xiàn)代藥物應用 2013年8期
        關(guān)鍵詞:馬錢子濃縮液通脈

        陳天朝 宋薇 王麗 徐麗軍

        通脈丸為我院國家級名老中醫(yī)、中國中西醫(yī)結(jié)合學會周圍血管疾病專業(yè)委員會主任委員崔公讓教授的臨床經(jīng)驗處方,由制附子、黃芪、兩頭尖、馬錢子、赤芍、丹參、洋金花等數(shù)十味中藥組合而成,主治風寒濕痹、四肢驚孿、骨節(jié)疼痛、癰腫、動脈硬化閉塞癥、血栓閉塞性脈管炎等動脈缺血性疾病所致寒凝脈絡(luò)型脫疽。為了解通脈丸方的毒性,同時也為其毒代動力學的研究提供劑量依據(jù),進行了通脈丸方濃縮液的急性毒性試驗。

        1 材料與儀器

        1.1 動物 小鼠,體重18~22 g,雌雄各半,由河南省實驗動物中心提供。

        1.2 藥物 制附子(批號:110107產(chǎn)地:四川),黃芪(批號:100928產(chǎn)地:內(nèi)蒙古),當歸(批號:101026產(chǎn)地:甘肅),丹參(批號:110108產(chǎn)地:安徽),馬錢子(批號:110107產(chǎn)地:云南),兩頭尖(批號:100913產(chǎn)地:吉林),陳皮(批號:110108產(chǎn)地:浙江),赤芍(批號:110105產(chǎn)地:內(nèi)蒙古),洋金花(批號:100928產(chǎn)地:江蘇),琥珀(批號:101012產(chǎn)地:云南),甘草(批號:100928產(chǎn)地:內(nèi)蒙古)。

        1.3 儀器 DT-300A電子天平,上海醫(yī)用激光儀器廠;MH-3000可調(diào)式電熱套,北京科偉永興儀器有限公司;RE5220型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器,上海亞榮生化儀器廠

        2 方法

        2.1 灌胃藥品的制備 加入處方總量10倍量的40%乙醇,提取2次,每次140 min,合并藥液,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中70℃濃縮制成濃度為4.5 g/ml的藥液。根據(jù)給藥方案的需要進行稀釋得到不同濃度的溶液。

        2.2 通脈丸方濃縮液小鼠急性毒性預試驗 將小鼠適應性喂養(yǎng)3 d后,禁食12 h,不禁水,分為10組,每組4只,雌雄各半。以0.4 ml·10 g灌胃給藥,找出引起0%和100%死亡率的致死量范圍。

        2.3 通脈丸方濃縮液小鼠急性毒性正式試驗 將小鼠適應性喂養(yǎng)三天后,禁食12 h,不禁水。按體重隨機分為空白組和給藥組,每組10只,雌雄各半。由預實驗所得出0%和100%死亡率的致死量范圍確定正式試驗給藥組分別灌胃通脈丸方濃縮液 72,90,108,126,144,162 g/kg,空白組給予相同體積的生理鹽水。

        2.4 觀察指標 觀察給藥后4 h內(nèi)小鼠的反應情況,然后每天上、下午各觀察一次,連續(xù)7 d。觀察內(nèi)容包括小鼠的飲食、外觀、行為、排泄物等,記錄所有小鼠的死亡情況、中毒癥狀及中毒反應的起始時間、嚴重程度、持續(xù)時間、是否可逆等,對死亡小鼠及時進行尸檢。

        2.5 數(shù)據(jù)處理 試驗所得數(shù)據(jù)用 Bliss[1]法求得 LD50及95%可信限,繪制小鼠累積死亡數(shù)-時間曲線。

        3 結(jié)果

        3.1 通脈丸方濃縮液小鼠急性毒性預試驗結(jié)果 通脈丸方濃縮液對小鼠的0%和100%致死劑量分別為54 g/kg和180 g/kg。

        3.2 通脈丸方濃縮液小鼠急性毒性正式試驗結(jié)果

        3.2.1 觀察記錄結(jié)果 空白組小鼠給予生理鹽水后,7 d內(nèi)未出現(xiàn)任何異?,F(xiàn)象。給藥組小鼠給藥后均出現(xiàn)不同程度的中毒癥狀,表現(xiàn)為自主活動減少、豎毛等。死亡小鼠死亡時發(fā)生痙攣、全身抖動、抽搐及兩下肢直伸、兩上肢屈曲性強直、尾僵直、大小便失禁,最后呼吸停止而死亡。死亡小鼠尸檢,主要臟器肉眼未見病理改變。小鼠死亡時間分布見圖1。

        圖1 通脈丸方濃縮液不同劑量組小鼠累積死亡數(shù)-時間曲線

        通過記錄發(fā)現(xiàn)通脈丸方濃縮液所導致的小鼠死亡多發(fā)生于4 h之內(nèi),主要集中在灌胃后的2 h內(nèi),一般4 h之內(nèi)不死亡者,各方面體征逐漸恢復正常,未再見死亡。

        3.2.2 LD50測定結(jié)果 根據(jù)各劑量組小鼠給藥劑量及死亡率,計算通脈丸方濃縮液LD50及95%可信限,結(jié)果見表1。

        表1 Bliss法計算半數(shù)致死量(n=10)

        4 討論

        本實驗采用的方法為Bliss加權(quán)機率單位法。Bliss法是目前評價最為精確、可靠的LD50測定方法,優(yōu)點是該方法對劑量分組無嚴格要求,亦不需要劑量組有0%和100%死亡率。

        將本實驗中所觀察的現(xiàn)象與方中四味毒性成分中毒癥狀[2-11]進行對比分析,與方中馬錢子和洋金花毒性表現(xiàn)相似。將本實驗中所觀察現(xiàn)象與《中藥、天然藥物急性毒性研究技術(shù)指導原則》附錄Ⅱ中提供的關(guān)于動物急性毒性試驗的一般觀察結(jié)果與可能涉及的器官、組織、系統(tǒng)資料進行對比分析,小鼠灌胃后所出現(xiàn)的驚厥、強直性抽搐、角弓反張現(xiàn)象可能涉及的器官、組織、系統(tǒng)為:神經(jīng)肌肉、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、自主神經(jīng)系統(tǒng)。

        [1] 顧兵,張政,李玉萍,等.半數(shù)致死量及其計算方法概述.中國職業(yè)醫(yī)學,2009,6:507-508.

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        [9] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典,一部.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:250.

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