鄧倩雯 林穎怡 宋麗莉

人丹收載于衛(wèi)生部《藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第19冊(cè)，處方由薄荷腦、肉桂、木香、小茴香、草豆蒄、甘草、兒茶、冰片、桔梗、樟腦和丁香羅勒油等11味中藥粉末組成的成方制劑，具有祛風(fēng)健胃功能。主要用于消化不良，惡心嘔吐，暈船，輕度中暑酒醉飽滯［1］。原標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量?jī)H有桔梗和甘草的薄層色譜鑒別。由于該處方主要是由中藥材粉末組成，故本實(shí)驗(yàn)采用簡(jiǎn)單方便，快捷準(zhǔn)確的顯微鑒別，對(duì)處方中的木香、小茴香和草豆蒄分別在顯微鏡下檢測(cè)，對(duì)肉桂藥材采用高效液相色譜法進(jìn)行含量測(cè)定，以更精確的監(jiān)測(cè)藥材的投料量［2］，這樣能更好的、更有效的對(duì)人丹進(jìn)行質(zhì)量控制。

1 儀器與試劑

顯微鏡:OLYMPUS BX-41系統(tǒng)生物顯微鏡;攝像放大倍數(shù):10×40;數(shù)碼成像裝置:MC 30;高效液相色譜儀:安捷倫1100;色譜柱:Diamonsil(鉆石)-C18 ODS(4.6 mm×250 mm，5μm);電子天秤:Sartorius-CPA225D，十萬分之一;乙腈:色譜純，Merck KGaA;水為超純水;其余試劑均為分析純;桂皮醛(批號(hào):111710-200513中國藥品生物制品檢定所購進(jìn));人丹及人丹缺肉桂陰性樣品(廣州王老吉藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn))。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 木香、小茴香、草豆蒄藥材粉末顯微鑒別 本品為灰褐色粉末，氣味香而辛涼。取樣品少許，制片后放置顯微鏡下觀察，并進(jìn)行顯微特征描述，其相同的顯微特征分別為:木香:木栓細(xì)胞:淡黃棕色。表面觀呈類多角形，大小不一，排列不甚整齊，垂周壁有的微波狀彎曲。小茴香:網(wǎng)紋細(xì)胞，位于中果皮維管束柱兩側(cè)，淡黃色。呈類長(zhǎng)方形或類長(zhǎng)圓形，直徑 25 ～55 μm，長(zhǎng)至102 μm，壁厚，微木化，具網(wǎng)狀紋孔，紋孔大，卵圓形或類矩圓形，直徑3～11μm，長(zhǎng)7～27 μm。草豆蔻:外胚乳細(xì)胞:呈類長(zhǎng)方形或不規(guī)則延長(zhǎng)，壁稍厚，有的呈連珠狀增厚，有細(xì)小紋孔，細(xì)胞內(nèi)充滿由細(xì)小淀粉粒集結(jié)成的淀粉團(tuán)，淀粉粒直徑1～5 μm，臍點(diǎn)點(diǎn)狀，淀粉團(tuán)中包埋有細(xì)小方晶［3，4］。見圖 1。

圖1 人丹粉末顯微特征圖

2.2 肉桂含量測(cè)定

2.2.1 波長(zhǎng)測(cè)定 安捷倫1100高效液相色譜儀，檢測(cè)器:DAD。配制桂皮醛對(duì)照品溶液及人丹(缺肉桂)陰性對(duì)照溶液，在200～400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描。掃描結(jié)果顯示桂皮醛對(duì)照品溶液在290nm處有最大吸收波長(zhǎng)，人丹(缺桂皮醛)陰性對(duì)照溶液，在290nm處無吸收波長(zhǎng)。參照《中國藥典》(2010年版一部)肉桂質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，選定290 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，結(jié)果見附圖2～3。

圖2 桂皮醛對(duì)照光譜圖

圖3 人丹缺桂皮醛陰性對(duì)照光譜圖

2.2.2 色譜條件 流動(dòng)相:乙腈-水(36:64);檢測(cè)波長(zhǎng):290nm;色譜柱:Diamonsil(R)鉆石 C18(5μm，250 mm ×4.6 mm)，柱系列號(hào):8131121;柱溫:35℃。理論塔板數(shù)按桂皮醛峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。

2.2.3 供試品溶液與對(duì)照品溶液配制 供試品溶液的配制:取人丹粉末2.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入甲醇25 ml，密塞，稱定重量，冰水中超聲處理20 min，取出，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，即得［5］。

對(duì)照品溶液的配制:取桂皮醛對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含10μg的溶液，搖勻，即得。

陰性對(duì)照品溶液的配制:按人丹處方量(缺肉桂藥材)，配制陰性樣品，按以上供試品溶液的制備方法，取同樣比例的量，制備陰性對(duì)照品溶液。

2.2.4 專屬性考察 按上述色譜條件操作，將桂皮醛對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液，注入液相色譜儀中，得高效液相色譜圖，陰性對(duì)照無干擾。結(jié)果見附圖4。

圖4 從上至下為:對(duì)照品溶液、樣品溶液和陰性溶液色譜圖

2.2.5 線性關(guān)系考察 取桂皮醛對(duì)照品溶液，分別為每1 ml 各 含 1.2631μg、2.5262μg、5.0525μg、10.1050μg、20.2101μg、40.4202μg、80.8403μg，以 10μL 為進(jìn)樣量，按上述所制定的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，得峰面積。以各峰面積為縱坐標(biāo)，各對(duì)照品的濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，桂皮醛含量在1.2631～80.8403μg內(nèi)，濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系?；貧w方程為:Y=43.423X +12.208，R2=0.9999。

2.2.6 精密度試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定桂皮醛峰面積值，計(jì)算得RSD為0.22%。結(jié)果所建立方法具有良好的精密度。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、24、72 h內(nèi)，分別進(jìn)樣 10 μL，計(jì)算桂皮醛含量，得 RSD 為1.69%。結(jié)果制備的供試品溶液在72 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一批號(hào)樣品，按供試品溶液制備方法平行制備6份，測(cè)定桂皮醛含量，計(jì)算，得RSD為0.70%。結(jié)果該方法重復(fù)性良好。

2.2.9 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱定已知含量的人丹樣品2.0 g，分別精密加入一定量的桂皮醛對(duì)照品溶液，測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 人丹加樣回收率試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果(%)

2.2.10 樣品測(cè)定 分別精密稱定三個(gè)批號(hào)的人丹，進(jìn)行含量測(cè)定分析，結(jié)果見表2。

表2 樣品測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 顯微鑒別，采用木香、小茴香、草豆蔻原藥材中在顯微鏡下的特征性的細(xì)胞組織與人丹制劑中在顯微下特征性的細(xì)胞組織進(jìn)行對(duì)比，選擇確定各相應(yīng)藥材的特征性的細(xì)胞組織。

3.2 處方中的肉桂也是主要成份之一，故只選用了桂皮醛作為本品的含量指標(biāo)進(jìn)行考察。桂皮醛的提取用甲醇作為溶劑，分別在冰水中超聲提取10、20、30 min，和在冰水中超聲提取10 min后放置過夜，再超聲提取10 min，結(jié)果在冰水中超聲提取20 mim相對(duì)含量最高。

3.3 對(duì)本品中的木香、小茴香、草豆蔻進(jìn)行顯微鑒別，肉桂作為高效液相色譜法的含量測(cè)定，它們具有特征性強(qiáng)，專屬性及重現(xiàn)性好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于人丹中藥材的質(zhì)量控制和分析。

［1］ 中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)-中藥成方制劑(第19冊(cè))，1998，6.

［2］ 國家藥典委員會(huì).中國藥典.2010年版(一部).北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2010:127，附錄Ⅵ D

［3］ 徐國均.《中藥材粉末顯微鑒定》人民衛(wèi)生出版社，1986:607，39，547，403.

［4］ 國家藥典委員會(huì).中國藥典.《中藥粉末顯微鑒別彩色圖集》廣東科技出版社，1999，150，90，234，78.

［5］ 馬蓉蓉;唐意紅;孫兆林;季宇彬;黃成鋼;，RP-HPLC測(cè)定不同產(chǎn)地肉桂中桂皮醛和肉桂酸的含量，中國現(xiàn)代中藥，2008年04(10):9-11.