鄧倩雯 林穎怡 宋麗莉

人丹收載于衛(wèi)生部《藥品標準》中藥成方制劑第19冊，處方由薄荷腦、肉桂、木香、小茴香、草豆蒄、甘草、兒茶、冰片、桔梗、樟腦和丁香羅勒油等11味中藥粉末組成的成方制劑，具有祛風健胃功能。主要用于消化不良，惡心嘔吐，暈船，輕度中暑酒醉飽滯［1］。原標準質量僅有桔梗和甘草的薄層色譜鑒別。由于該處方主要是由中藥材粉末組成，故本實驗采用簡單方便，快捷準確的顯微鑒別，對處方中的木香、小茴香和草豆蒄分別在顯微鏡下檢測，對肉桂藥材采用高效液相色譜法進行含量測定，以更精確的監(jiān)測藥材的投料量［2］，這樣能更好的、更有效的對人丹進行質量控制。

1 儀器與試劑

顯微鏡:OLYMPUS BX-41系統(tǒng)生物顯微鏡;攝像放大倍數:10×40;數碼成像裝置:MC 30;高效液相色譜儀:安捷倫1100;色譜柱:Diamonsil(鉆石)-C18 ODS(4.6 mm×250 mm，5μm);電子天秤:Sartorius-CPA225D，十萬分之一;乙腈:色譜純，Merck KGaA;水為超純水;其余試劑均為分析純;桂皮醛(批號:111710-200513中國藥品生物制品檢定所購進);人丹及人丹缺肉桂陰性樣品(廣州王老吉藥業(yè)股份有限公司生產)。

2 實驗方法與結果

2.1 木香、小茴香、草豆蒄藥材粉末顯微鑒別 本品為灰褐色粉末，氣味香而辛涼。取樣品少許，制片后放置顯微鏡下觀察，并進行顯微特征描述，其相同的顯微特征分別為:木香:木栓細胞:淡黃棕色。表面觀呈類多角形，大小不一，排列不甚整齊，垂周壁有的微波狀彎曲。小茴香:網紋細胞，位于中果皮維管束柱兩側，淡黃色。呈類長方形或類長圓形，直徑 25 ～55 μm，長至102 μm，壁厚，微木化，具網狀紋孔，紋孔大，卵圓形或類矩圓形，直徑3～11μm，長7～27 μm。草豆蔻:外胚乳細胞:呈類長方形或不規(guī)則延長，壁稍厚，有的呈連珠狀增厚，有細小紋孔，細胞內充滿由細小淀粉粒集結成的淀粉團，淀粉粒直徑1～5 μm，臍點點狀，淀粉團中包埋有細小方晶［3，4］。見圖 1。

圖1 人丹粉末顯微特征圖

2.2 肉桂含量測定

2.2.1 波長測定 安捷倫1100高效液相色譜儀，檢測器:DAD。配制桂皮醛對照品溶液及人丹(缺肉桂)陰性對照溶液，在200～400nm波長范圍內進行光譜掃描。掃描結果顯示桂皮醛對照品溶液在290nm處有最大吸收波長，人丹(缺桂皮醛)陰性對照溶液，在290nm處無吸收波長。參照《中國藥典》(2010年版一部)肉桂質量標準，選定290 nm為檢測波長，結果見附圖2～3。

圖2 桂皮醛對照光譜圖

圖3 人丹缺桂皮醛陰性對照光譜圖

2.2.2 色譜條件 流動相:乙腈-水(36:64);檢測波長:290nm;色譜柱:Diamonsil(R)鉆石 C18(5μm，250 mm ×4.6 mm)，柱系列號:8131121;柱溫:35℃。理論塔板數按桂皮醛峰計算應不低于4000。

2.2.3 供試品溶液與對照品溶液配制 供試品溶液的配制:取人丹粉末2.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入甲醇25 ml，密塞，稱定重量，冰水中超聲處理20 min，取出，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，即得［5］。

對照品溶液的配制:取桂皮醛對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含10μg的溶液，搖勻，即得。

陰性對照品溶液的配制:按人丹處方量(缺肉桂藥材)，配制陰性樣品，按以上供試品溶液的制備方法，取同樣比例的量，制備陰性對照品溶液。

2.2.4 專屬性考察 按上述色譜條件操作，將桂皮醛對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液，注入液相色譜儀中，得高效液相色譜圖，陰性對照無干擾。結果見附圖4。

圖4 從上至下為:對照品溶液、樣品溶液和陰性溶液色譜圖

2.2.5 線性關系考察 取桂皮醛對照品溶液，分別為每1 ml 各 含 1.2631μg、2.5262μg、5.0525μg、10.1050μg、20.2101μg、40.4202μg、80.8403μg，以 10μL 為進樣量，按上述所制定的色譜條件進行測定，得峰面積。以各峰面積為縱坐標，各對照品的濃度為橫坐標，繪制標準曲線。結果表明，桂皮醛含量在1.2631～80.8403μg內，濃度與峰面積呈良好的線性關系。回歸方程為:Y=43.423X +12.208，R2=0.9999。

2.2.6 精密度試驗 取對照品溶液10μL，連續(xù)進樣5次，測定桂皮醛峰面積值，計算得RSD為0.22%。結果所建立方法具有良好的精密度。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、24、72 h內，分別進樣 10 μL，計算桂皮醛含量，得 RSD 為1.69%。結果制備的供試品溶液在72 h內穩(wěn)定。

2.2.8 重復性試驗 精密稱取同一批號樣品，按供試品溶液制備方法平行制備6份，測定桂皮醛含量，計算，得RSD為0.70%。結果該方法重復性良好。

2.2.9 加樣回收率試驗 精密稱定已知含量的人丹樣品2.0 g，分別精密加入一定量的桂皮醛對照品溶液，測定，計算回收率，結果見表1。

表1 人丹加樣回收率試驗測定結果(%)

2.2.10 樣品測定 分別精密稱定三個批號的人丹，進行含量測定分析，結果見表2。

表2 樣品測定結果

3 討論

3.1 顯微鑒別，采用木香、小茴香、草豆蔻原藥材中在顯微鏡下的特征性的細胞組織與人丹制劑中在顯微下特征性的細胞組織進行對比，選擇確定各相應藥材的特征性的細胞組織。

3.2 處方中的肉桂也是主要成份之一，故只選用了桂皮醛作為本品的含量指標進行考察。桂皮醛的提取用甲醇作為溶劑，分別在冰水中超聲提取10、20、30 min，和在冰水中超聲提取10 min后放置過夜，再超聲提取10 min，結果在冰水中超聲提取20 mim相對含量最高。

3.3 對本品中的木香、小茴香、草豆蔻進行顯微鑒別，肉桂作為高效液相色譜法的含量測定，它們具有特征性強，專屬性及重現(xiàn)性好，結果準確可靠，可用于人丹中藥材的質量控制和分析。

［1］ 中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準-中藥成方制劑(第19冊)，1998，6.

［2］ 國家藥典委員會.中國藥典.2010年版(一部).北京:化學工業(yè)出版社，2010:127，附錄Ⅵ D

［3］ 徐國均.《中藥材粉末顯微鑒定》人民衛(wèi)生出版社，1986:607，39，547，403.

［4］ 國家藥典委員會.中國藥典.《中藥粉末顯微鑒別彩色圖集》廣東科技出版社，1999，150，90，234，78.

［5］ 馬蓉蓉;唐意紅;孫兆林;季宇彬;黃成鋼;，RP-HPLC測定不同產地肉桂中桂皮醛和肉桂酸的含量，中國現(xiàn)代中藥，2008年04(10):9-11.