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        鼻咽癌組織中EBERs與BMI-1表達相關(guān)性研究

        2013-10-27 00:56:41聚,鄒彥,湯
        遵義醫(yī)科大學學報 2013年5期
        關(guān)鍵詞:原位雜交鼻咽癌陽性細胞

        王 聚,鄒 彥,湯 明

        (1.遵義醫(yī)學院附屬醫(yī)院 核醫(yī)學科,貴州 遵義 563099;2. 遵義醫(yī)學院附屬腫瘤醫(yī)院 頭頸腫瘤科,貴州 遵義 563099)

        鼻咽癌組織中EBERs與BMI-1表達相關(guān)性研究

        王 聚1,鄒 彥2,湯 明2

        (1.遵義醫(yī)學院附屬醫(yī)院 核醫(yī)學科,貴州 遵義 563099;2. 遵義醫(yī)學院附屬腫瘤醫(yī)院 頭頸腫瘤科,貴州 遵義 563099)

        目的探討鼻咽癌組織中EBERs與BMI-1表達相關(guān)性。方法對2007年12月至2009年11月收治的40例鼻咽癌患者的石蠟包埋切片進行研究:原位雜交方法檢測這些切片中EBERs的表達;免疫組化方法檢測這些切片中BMI-1的表達。結(jié)果40例鼻咽癌組織中EBERs情況:高表達組為11例,低表達組為29例,合計陽性表達率為100%(40/40)。40例鼻咽癌組織中BMI-1情況:BMI-1陽性表達率為32.5%(13/40)。鼻咽癌組織中EBERs表達與BMI-1表達差異無統(tǒng)計學意義,P>0.05。結(jié)論鼻咽癌中EBERs表達與BMI-1表達無相關(guān)性,有待進一步研究,并探討二者在鼻咽癌中的機理。

        鼻咽癌;EBERS;BMI-1

        我國是鼻咽癌高發(fā)區(qū),發(fā)病的確切原因尚不清楚,一般認為與EBV (epstein-barr virus ,EB病毒) 感染密切相關(guān);在感染人體后長期潛伏,可表達多種基因,其潛伏膜蛋白(LMP)編碼基因、EB病毒核抗原(EBNA)基因及EBV編碼的小RNA(EBER);其可能不同程度存在于鼻咽癌組織中并可能通過不同的機制導致鼻咽癌。在鼻咽癌中,層粘連蛋白、白細胞介素和潛伏膜蛋白-1一起上調(diào)

        BMI-1的表達[1]。關(guān)于鼻咽癌中EBERs和BMI-1表達相關(guān)性的研究尚未見報道,因此我們對2007年12月至2009年11月收治的40例鼻咽癌患者的組織切片進行研究,現(xiàn)報道如下。

        1 材料與方法

        1.1 實驗材料 收集我院2007年12月至2009年11月40例經(jīng)病理確診鼻咽癌的病理組織蠟塊,其中男性29例,女性11例,年齡30~77歲,中位年齡45歲,病理類型均為非角化型癌分化型。

        1.2 試驗方法 將上述病理組織蠟塊,連續(xù)4 μm 切片備用,平鋪于涂有多聚賴氨酸(1 mg/m1)的玻片上,行HE染色、EBERS原位雜交、BMI-1的EnVision二步免疫組化染色。EBERS檢測試劑盒購自Dako公司,為DakoCytomation EBV(EVER) probe,具體實驗步驟按說明書進行操作,用試劑盒所帶陰性控制試劑做陰性對照,用已知EBERs陽性的鼻咽癌組織切片做陽性對照。BMI-1檢測中鼠抗人BMI-1單克隆抗體購自R&D公司,EnVisionTM免疫組化試劑盒購自Gene Tech公司,具體染色方法按試劑盒說明書進行操作,陰性對照以TBS取代一抗,用已知BMI-1陽性的乳腺癌組織切片做陽性對照。

        1.3 結(jié)果評價

        1.3.1 EBERS結(jié)果評價 應(yīng)用普通光學顯微鏡,高倍鏡下(10×20)隨機取4個不同的視野,計數(shù)細胞總數(shù)及核陽性細胞數(shù),按陽性細胞所占的百分比積分。

        EBERs陽性表達于細胞核,呈紫黑色,表達信號強度分五級:(-)陰性;(+)<24%癌細胞陽性;(++)25%~49%癌細胞陽性;(+++)50%~74%癌細胞陽性;(++++)>75%癌細胞陽性。根據(jù)鼻咽癌組織中EBERs的表達情況分為陰性組、低表達組(+、++)和高表達組(+++、++++)。

        1.3.2 BMI-1結(jié)果評價 應(yīng)用普通光學顯微鏡,高倍鏡下(10×20)隨機取4個不同的視野,計數(shù)細胞總數(shù)及核陽性細胞數(shù),按陽性細胞所占的百分比積分。同時,根據(jù)染色的強弱程度也計分。

        BMI-1陽性表達于細胞核和細胞質(zhì),呈黃色、棕黃色。陽性細胞率≤10%為1分,陽性細胞率>10%且≤50%為2分,陽性細胞率>50%且≤75%為3分,陽性細胞率>75%為4分;同時,根據(jù)染色的強弱程度也計分:陰性1分,弱染色2分,中等強度染色3分,強染色4分。通過二者的乘積來判斷結(jié)果:≤4分為(-);>4分且≤8分為(+);>8分且≤12分為(++);>12分且≤16分為(+++)。

        1.4 統(tǒng)計學處理 本研究采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件數(shù)據(jù)包進行數(shù)據(jù)處理,相關(guān)性分析選擇Spearman相關(guān)檢驗,P<0.05有統(tǒng)計學意義。

        2 結(jié)果

        2.1 40例鼻咽癌組織中EBERs情況 (+)組14例、(++)組15例、(+++)組7例、(++++)組4例;合計低表達組為29例,高表達組為11例,陽性表達率為100%(40/40)。

        2.2 40例鼻咽癌組織中BMI-1情況 BMI-1表達陰性組27例,(+)組2例,(++)組8例,(+++)組3例,陽性表達率為32.5%(13/40)。

        2.3 鼻咽癌組織中EBERs 表達與BMI-1表達差異無統(tǒng)計學意義,P>0.05(見表1)。

        表1鼻咽癌組織中EBERs表達與BMI-1表達統(tǒng)計表

        組別BMI-1(-)BMI-1(+)BMI-1(++)BMI-1(+++)合計EBERs低表達組2215129EBERs高表達組513211合計2728340

        注:P>0.05。

        2.4 HE染色光鏡觀察結(jié)果(見圖1)。

        2.5 鼻咽癌組織中EBERs陽性表達光鏡觀察結(jié)果(見圖2)。

        2.6 鼻咽癌組織中BMI-1的陽性表達光鏡觀察結(jié)果(見圖3)。

        3 討論

        EBV是一種嗜B淋巴細胞的人類皰疹病毒,為雙鏈DNA病毒,是比較明確的DNA腫瘤病毒,在全球廣泛分布,感染人群后通常在人體內(nèi)終身潛伏。Ⅰ~Ⅲ型EBV潛伏感染均可合成EB 病毒轉(zhuǎn)錄的核內(nèi)小RNA ( EBV encoded small RNAs ,EBERs)。文獻報道[2]用原位雜交方法在鼻咽粘膜慢性炎中未檢測到EBERs,在鼻咽癌組織中EBERs陽性表達率100%(53/53)。本文對40例鼻咽癌組織中EBERs表達進行研究,陽性表達率結(jié)果也為100%(40/40),再次證明鼻咽癌組織中EBERs表達非常高,且用原位雜交的方法檢測鼻咽癌中EBERs表達方法簡單、技術(shù)成熟,可以作為檢測組織細胞EBV感染的一種方法。本文報道的40例鼻咽癌組織中EBERs表達陽性表達程度不一致,分析其原因可能與以下因素有關(guān):1、選取的鼻咽癌組織中本身EBERs拷貝數(shù)不同;2、由于選用的研究標本是既往確診鼻咽癌的病理組織蠟塊,在組織固定或保存過程中可能存在EBERs的分解。但是通過本文研究,用原位雜交的方法檢測鼻咽癌中EBERs表達至少在分化型非角化型鼻咽癌中是一種高敏感性的方法。

        宋立兵等[3]報道在鼻咽癌組織中BMI-1蛋白高表達率為38.7%(29/75)。我們研究的BMI-1蛋白陽性表達率為32.5%(13/40),高表達率為11.1%(3/40)。二者高表達率的不同,分析可能與研究的標本不同有關(guān)。近年研究表明[4]BMI-1蛋白在腫瘤組織中表達差異,主要與腫瘤的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等有關(guān)。

        在鼻咽癌發(fā)生過程中EB病毒可能在誘導基因突變中起作用,導致癌基因的激活,或破壞抑癌基因,并導致免疫系統(tǒng)對腫瘤細胞的識別能力降低,最終形成腫瘤。在鼻咽癌中,層粘連蛋白、白細胞介素和潛伏膜蛋白-1一起上調(diào)BMI-1的表達[1]。但是本文研究得出鼻咽癌中EBERs表達與BMI-1表達差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),二者間不存在相關(guān)性。EBERs由于缺乏3′端多聚腺苷,不編碼蛋白質(zhì)[5],不能直接發(fā)揮生物功能,導致腫瘤的形成。通過本文研究在鼻咽癌組織中EBERs表達與BMI-1表達無關(guān),因而EBERs表達后不會上調(diào)BMI-1的表達。鼻咽癌組織中EBERs表達與腫瘤形成有何關(guān)系有待研究。但是本文研究得出在鼻咽癌組織中BMI-1有一定的表達;其它研究也表明與正常鼻咽上皮細胞相比較,BMI-1在鼻咽癌細胞株中表達上調(diào)[3]。說明在鼻咽癌腫瘤形成過程中BMI-1會表達并起到一定作用,同時本文研究在鼻咽癌組織中BMI-1表達與EBERs表達無關(guān),因而何種機制促進BMI-1的表達有待進一步研究。但是BMI-1一旦被激活可高表達于腫瘤細胞中, 其發(fā)揮作用的途徑是控制下游的癌蛋白以及細胞周期調(diào)控蛋白, 如c-myc、pRB等的激活,在細胞周期起負調(diào)節(jié)作用,能保持靶基因特異的穩(wěn)定抑制狀態(tài),可能從細胞凋亡障礙、細胞增殖失控方面引起惡性腫瘤細胞的增生。

        本研究得出用原位雜交的方法檢測鼻咽癌組織中EBERs表達在分化性非角化型鼻咽癌中是一種高敏感性的方法。并且得出分化型非角化型鼻咽癌中EBERs表達與BMI-1表達關(guān)系無相關(guān)性。鼻咽癌組織中EBERs表達與腫瘤形成有何關(guān)系,何種機制促進BMI-1的表達,有待今后進一步進行研究;并探尋二者在鼻咽癌中的機理。

        [1] Michelle M S Chew,Sook-Yee Gan,Alan SB Khoo,etal,Interleukins, laminin and epstein-barr virus latent membrane protein 1 (EBV LMP1) Promote metastatic phenotype in nasopharyngeal carcinoma[J].BMC Cancer,2010,10: 574.

        [2]江慶萍,劉少顏,何秀芳,等. 鼻咽癌中MAP3K5和Epstein-Barr病毒編碼的miR-BART22表達的關(guān)系及意義[J]. 南方醫(yī)科大學學報,2011,31(7):1146-1149.

        [3]宋立兵,廖雯婷,曾木圣,等. 新的腫瘤標志物Bmi-1基因誘導正常鼻咽上皮細胞永生化[C]. 中國細胞生物學學會醫(yī)學細胞生物學學術(shù)大會論文集,2006.

        [4]胡花麗,馮愛強,張彥武,等. Bmi-1及Mel-18在乳腺癌中的表達及其與臨床病理特征的關(guān)系[J]. 中國普通外科雜志,2012,21(11),1410-1414.

        [5]閔華慶. 鼻咽癌研究[M]. 廣州: 廣東科技出版社,1998:57- 75.

        ResearchfortheexpressivecorrelationofEBERsandBMI-1innasopharyngealcarcinoma

        Wangju1,Zouyan2,Tangming2

        (1.Department of Nuclear,The Affiliated Hospital,Zunyi Medical University,Guizhou Zunyi 563099,China;2.Department of Head And Neck Oncology,The Oncology Hospital of The Affiliated Hospital,Zunyi Medical University,Guizhou Zunyi 563099,China)

        ObjectiveTo observe the expressive correlation of EBERs (EBV encoded small RNAs) and BMI-1 (B lymphoma Mo-MLV insertion region 1 homolog)in nasopharyngeal carcinoma (NPC).MethodsWe studied the paraffin-embedded sections of 40 NPC from December 2007 to November 2009. The expression of EBERs were detected by in situ hybridization.The expression of BMI-1were detected by Immunohistochemistry .ResultsOf the 40 cases of NPC, the low expression group was 29 cases,the high expression group was 11 cases,the positive rate of EBERSwas 100% (40/40).Of the 40 cases of NPC, the positive rate of EBERSwas 32.5%(13/40). The expression difference of EBERs and BMI-1was not statistically significant in NPC,P>0.05.ConclusionThe expression of EBERs and BMI-1 in NPC is not correlated . Further researches are needed to elucidate their expression in NPC.

        nasopharyngeal carcinoma; EBERs; BMI-1

        遵義市科技局分社基金項目(NO:200902)。

        鄒彥,女,主任醫(yī)師,研究方向:頭頸部腫瘤,E-mail:zouyan.714@163.com。

        R739.63

        A

        1000-2715(2013)05-0453-03

        [收稿2013-08-02;修回2013-09-29]

        (編輯:譚秀榮)

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