劉曉麗,馬禮鴻,王全義,王 凱

(1.遵義醫(yī)學院附屬醫(yī)院 病理科,貴州 遵義 563099；2.遵義市第一人民醫(yī)院 外科, 貴州 遵義 563099；3.濟寧醫(yī)學院附屬醫(yī)院 病理科，山東 濟寧 272029)

·臨床醫(yī)學研究·

COX-2、VEGF-C在宮頸鱗癌組織中的表達及意義

劉曉麗1,馬禮鴻2,王全義3,王 凱1

(1.遵義醫(yī)學院附屬醫(yī)院 病理科,貴州 遵義 563099；2.遵義市第一人民醫(yī)院 外科, 貴州 遵義 563099；3.濟寧醫(yī)學院附屬醫(yī)院 病理科，山東 濟寧 272029)

目的探討COX-2、VEGF-C在宮頸鱗癌組織中的表達及臨床病理特征的關系。方法選用組織芯片運用免疫組化S-P法檢測COX-2、VEGF-C在150例宮頸鱗癌組織、15例宮頸CIN組織、15例正常宮頸組織中的表達。結果COX-2、VEGF-C在宮頸鱗癌組織中表達的陽性率分別為79.3 %(119/150)、82.6%(125/150)；在CIN組織為40.0%(6/15)和33.3%(5/15), 在正常宮頸組織為13.3%(2/15)和20.0%(3/15)。宮頸鱗癌組織中COX-2的陽性表達與病理學分級、臨床分期及淋巴結轉移有關(P<0.05)，與患者年齡、腫塊大小均無關(P>0.05)。宮頸鱗癌組織中VEGF-C的陽性表達與臨床分期、淋巴結轉移有關(P<0.05)，與患者年齡、腫塊大小和病理學分級均無關(P>0.05)。兩蛋白陽性表達呈正相關(r=0.398,P<0.01)。隨訪5年的107例患者中COX-2、VEGF-C陽性患者的5年生存率均分別低于COX-2、VEGF-C陰性患者。結論COX-2、VEGF-C的高表達參與中老年宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展，并且兩蛋白具有協(xié)同作用，檢測兩蛋白的表達情況可作為臨床腫瘤生物學行為和患者預后判斷的參考指標。

COX-2；VEGF-C；宮頸腫瘤；鱗癌；預后

在世界范圍內，子宮頸鱗癌是女性第二位常見的惡性腫瘤，多發(fā)生于中老年女性。環(huán)氧化酶-2(Cyclooxygease-2,COX-2)是花生四烯酸轉化成前列腺素的限速酶，與腫瘤發(fā)生、增殖和浸潤密切相關[1]。血管內皮生長因子-C(vascular endothelial growth factors-C,VEGF-C)是特異性的淋巴管內皮細胞生長因子，與腫瘤的生長、轉移有關[2]。本研究采用組織芯片運用免疫組化S-P法檢測COX-2、VEGF-C在宮頸鱗癌組織中的表達，結合隨訪資料探討其間的關系及其臨床病理意義。

1 材料與方法

1.1 材料 選用廣西桂林泛譜生物技術有限公司生產(chǎn)的的組織芯片及實驗芯片，實驗標本分為3組：①正常組：正常宮頸組織15例，年齡40～55歲，平均年齡50.4歲；②宮頸CINI-II級：15例，40～55歲，平均年齡46.5歲；③惡性組：鱗癌150例，≤55歲71例，>55歲79例，年齡45～65歲，平均年齡55.2歲。按國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)2009年的宮頸癌臨床分期標準，臨床早期83例, 臨床晚期67例，有淋巴結轉移65例，無淋巴結轉移85例，病理分級高分化50例，中分化61例，低分化39例。所有病例臨床、病理資料完整，患者術前均未進行過抗腫瘤治療。術后隨訪資料完整107例，隨訪時間36～60個月，中位隨訪時間25個月，死亡6例，失訪3例。

1.2 免疫組化染色 采用S-P法，兔抗人COX-2單克隆抗體、兔抗人VEGF-C多克隆抗體通用型S-P試劑盒及DAB酶顯色試劑盒均購自福州邁新生物技術有限公司，染色方法及步驟按說明書進行，高壓抗原修復，用PBS代替一抗作為陰性對照，已知陽性切片作陽性對照，DAB顯色，蒸餾水清洗，蘇木素復染。酒精脫水、透明、封片。

1.3 結果判斷 在細胞核/細胞漿出現(xiàn)棕色或棕褐色顆粒為陽性信號。COX-2陽性表達于細胞漿/細胞核(見圖1)，VEGF-C陽性表達于細胞漿(見圖2)。隨機選擇10個高倍視野(×400)計數(shù)陽性表達的腫瘤細胞所占的百分比，取其平均值，<10%為陰性，≥10%為陽性。

1.4 統(tǒng)計學分析 用SPSS16.0統(tǒng)計分析軟件進行分析，組間差異比較采用2檢驗，兩分類變量之間的關聯(lián)性分析采用Pearson列聯(lián)系數(shù)度量，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 COX-2的表達 COX-2在惡性組、宮頸CINI-II級組及正常組陽性表達率為79.3 %(119/150)、40.0%(6/15)及13.3%(2/15)。COX-2蛋白陽性表達與腫瘤分化程度、淋巴結轉移和腫瘤臨床分期有密切相關(均P<0.05)，低分化組COX-2表達高于高、中分化組(2=6.74，P<0.01)，中、高分化組COX-2的表達未見差異(2=0.42,P=0.51)，有淋巴結轉移組高于無淋巴結轉移組(2= 16.65,P<0.01)，臨床分期晚期(Ⅱb+Ⅵ期)高于臨床分期早期 (I+Ⅱa期)(2=10.12,P<0.01)，與患者年齡、腫塊大小無關(P>0.05)(見表1)。

2.2 VEGF-C的表達 VEGF-C在惡性組、宮頸

CINI-II級組及正常組的陽性表達率分別為82.6%(125/150)、33.3%(5/15)及20.0%(3/15)。VEGF-C的表達在有淋巴結轉移組高于無淋巴結轉移組(χ2=15.25,P<0.01)，在臨床晚期(Ⅱb+Ⅵ期)的表達高于臨床早期(I+Ⅱa期)(χ2=12.95,P<0.01)，VEGF-C的表達與患者年齡、腫塊大小及分化程度無關(P>0.05)(見表2)。

表1宮頸鱗癌臨床病理特征與COX-2陽性表達

組別例數(shù)COX-2陽性(%)陰性(%)2P年齡(歲)≤557152(73.2)19(26.7)>557967(84.8)12(16.9)1.070.311腫瘤直徑≤2cm5540(72.0)15(27.2)>2cm9579(83.1)16(16.8)2.310.14分化程度高5032(64.0)18(36.0)中6152(85.2)9(14.7)6.740.01低3935(89.7)4(10.2)0.420.51淋巴結轉移無8558(68.2)27(31.7)有6561(93.8)3(4.9)16.65<0.01臨床分期早期8358(69.8)25(30.1)晚期6761(91.0)6(8.9)10.12<0.01

表2宮頸鱗癌臨床病理特征與VEGF-C陽性表達

組別例數(shù)COX-2陽性(%)陰性(%)2P年齡(歲)≤557157(80.2)14(19.7)>557968(86.0)11(13.9)0.250.61腫瘤直徑≤2cm5542(76.3)13(23.6)>2cm9583(87.3)12(12.6)3.030.11分化程度高5038(76.0)12(24.0)中6153(86.8)8(13.1)2.200.13低3936(92.3)3(7.6)0.720.40淋巴結轉移無8562(72.9)23(27.0)有6563(96.9)2(3.0)15.25<0.01臨床分期早期8361(73.4)22(26.5)晚期6764(95.5)3(4.4)12.95<0.01

2.3 COX-2、VEGF-C表達的相關性分析 相關性分析結果顯示，COX-2與VEGF-C在宮頸鱗癌組織中的陽性表達呈正相關(r=0.398，P<0.01,見表3)。

表3 COX-2、VEGF-C的表達

COX-2VEGF-C陽性陰性陽性10910陰性1615

2.4 COX-2、VEGF-C的表達與患者預后關系 術后隨訪資料完整107例，COX-2陽性患者5年生存率15%，明顯低于COX-2陰性患者的26%。VEGF-C陽性患者5年生存率12%，明顯低于VEGF-C陰性患者的30%。

3 討論

宮頸鱗癌是危害女性健康的惡性腫瘤之一，全世界每年有50萬新發(fā)病例，其中我國病例占1/4[3]，多見于40～60歲的女性，平均發(fā)病年齡54歲。COX-2是前列腺素合成過程中重要的限速酶，在正常組織中低表達或不表達，在多種腫瘤中高表達，與腫瘤細胞增殖、凋亡、促進血管形成、腫瘤免疫有關[4]。Goto R[5]等報道，下咽鱗癌中COX-2表達在低分化組高于中、高分化組，但與臨床分期、腫瘤復發(fā)及生存率均無關。鄒亮[6]等報道，細支氣管肺泡癌COX-2的表達與淋巴結轉移、腫塊大小有關，與患者性別、年齡、腫塊部位病理類型及臨床分期無關。這些研究報道結果的差異，可能與研究樣本大小、檢測方法及判斷標準的不同有關。本研究結果顯示，COX-2在宮頸鱗癌組織中表達升高，明顯高于宮頸CINI-II級及正常宮頸組織，其陽性表達與腫瘤分化程度、淋巴結轉移和腫瘤臨床分期有密切相關，低分化組COX-2表達高于高、中分化組，有淋巴結轉移組高于無淋巴結轉移組，臨床分期晚期組高于臨床分期早期組，COX-2的表達與腫瘤分化程度、淋巴結轉移和腫瘤臨床分期密切相關。

VEGF-C是一種分泌性多肽，又稱淋巴管生長因子，是血管內皮生長因子家族成員，研究報道認為其可促進淋巴管生長，與腫瘤細胞增殖及向區(qū)域淋巴結轉移、抑制腫瘤細胞凋亡、促進腫瘤細胞侵襲能力[7]有關。馬陳等[8]等報道，VEGF-C可誘導實體瘤組織內或腫瘤組織周的淋巴管生成及充盈擴張，促進惡性腫瘤細胞進行淋巴道轉移。本組實驗結果顯示，VEGF-C在腫瘤組織表達升高，在有淋巴結轉移組高于無淋巴結轉移組，臨床晚期組的表達高于臨床早期組， VEGF-C的表達與淋巴結轉移、臨床分期密切相關。結果還顯示，COX-2與VEGF-C在宮頸鱗癌組織中的表達呈正相關；術后隨訪資料表明，COX-2與VEGF-C高表達患者術后生存率低于其低表達組。這些研究結果表明，COX-2與VEGF-C的高表達在宮頸鱗癌的增殖過程中及其對患者預后有著重要的作用。

綜上所述，COX-2與 VEGF-C蛋白在中老年宮頸鱗癌組織中的表達升高與宮頸鱗癌組織的發(fā)生、浸潤及轉移過程相關密切，COX-2與 VEGF-C表達升高提示患者臨床預后不良，可作為中老年宮頸鱗癌患者臨床生物學行為和預后判斷的參考指標。

[1] 宋軼鵬，李明煥.COX-2與腫瘤的發(fā)生發(fā)展[J].癌癥進展, 2012, 10(1): 57-60.

[2]Hirakawa S,Brown L F,Kodama, et al.VEGF-C induced lymphangiogenesis insentinel lymph nodes promotes tumor metastasis to distant sites[J].Blood,2007,109(3):1010-1017.

[3]賴煒玲，李瑞芳，楊改珍.98例宮頸癌的細胞學結果分析[J].中國醫(yī)學創(chuàng)新，2012,9(27):72-73.

[4]O’Connor J K, Avent J, Lee R J, et al. Cyclooxygenase-2 expression correlates with diminished survival in invasive breast cancer treated with mastectomy and radiotherapy [J].Int J Rad Oncol Biol Phys,2004,58(4):1034-1040.

[5]Goto R, Hoshikawa H, Fujii T,et al. Chinicopathological siginficance of cyclooxygenase-2 expression in hypopharyngeal squamous cell carcinoma[J].Oncol Rep,2008, 19(3):645-650.

[6]鄒亮，高慧淳，周建洪，等.VEGF-C、COX-2在細支氣管肺泡癌中的表達及其意義[J].中國癌癥防治雜志，2011,3(4):306-309.

[7]Ueda M, Hung Y C, Terai Y,et al.Vascular endothelial growth factor-C expression and invasive phenotype in ovarian carcinomas [J].Clin Cancer Res,2005,11(9):3225-3232.

[8]馬陳,邢春根,陳曉剛,等. VEGF-C和VEGFR-3在大腸癌中的表達及其意義[J].現(xiàn)代實用醫(yī)學,2009,21(1):64-65.

[收稿2012-10-14;修回2013-02-17]

(編輯：譚秀榮)

ExpressionsandclinicopathologicalsignificancesofCOX-2andVEGF-Cincervicalsquamouscellcarcinoma

Liuxiaoli1,Malihong2,Wangquanyi3,Wangkai1

(1.Department of Pathology,The Affiliated Hospital of Zunyi Medical University,Guizhou Zunyi 563099,China;2.Department of Surgery,The First People’s Hospital, Guizhou Zunyi 563099,China;3.Department of Pathology,The Affiliated Hospital of Jining Medical University, Shandong Jining 272029,China)

ObjectiveTo detect the expressions of COX-2 and VEGF-C in cervical squamous cell carcinoma and investigate their correlations in cervical squamous cell carcinoma.MethodsThe expressions of COX-2 and VEGF-C in 150 cases of cervical squamous cell carcinoma, 15 cases of CIN tissues and 15 cases of normal human cervical tissues were determined by tissues array and S-P method of IHC.ResultsThe positive overexpression rates of COX-2 in cervical squamous cell carcinoma, CIN tissues and normal human cervical tissues were 79.3 % (119/150), 40.0% (6/15) and 13.3% (2/15), respectively. The positive overexpression rates of VEGF-C in cervical squamous cell carcinoma, CIN tissues and normal human cervical tissues were 82.6% (125/150), 33.3% (5/15) and 20.0% (3/15), respectively. The positive expression of them in malignant group were significantly higher than those in the CIN tissues and normal group(P<0.05). The positive expression of COX-2 in cervical squamous cell carcinoma were related to the tumor histological grade, clinical stage and metastasis of lymph node (P<0.05). The positive expression of VEGF-C in cervical squamous cell carcinoma were related to tumor clinical stage and metastasis of lymph node (P<0.05). The positive expressions of COX-2 and VEGF-C were not associated with the patient’s age and size of tumor (P>0.05). Furthermore, the significantly positive expression correlation between COX-2 and VEGF-C was shown (P<0.01). Among the 5-year follow-up data of 107 cases, the 5-year survival rate of patients with COX-2 and VEGF-C positive expressions was lower than that with these two proteins negative expressions, respectively.ConclusionThe high expressions of COX-2 and VEGF-C proteins play an important role in the development of cervical squamous cell carcinoma in old women with a synergistic effects of these two proteins. Detection of COX-2 and VEGF-C expressions could be used as the reference index for the tumor’s biological behavior and patients’ prognosis.

COX-2; VEGF-C; cervix neoplasms; squamous cell carcinoma; prognosis

R737.33

A

1000-2715(2013)02-0121-04