張 琳，邵 赟，趙曉輝* ，岳會(huì)蘭，陳 晨，陶燕鐸，梅麗娟，周國(guó)英

1中國(guó)科學(xué)院西北高原生物研究所，西寧 810008;2中國(guó)科學(xué)院研究生院，北京 100049

玄參科馬先蒿屬(Pedicularis)植物在全球約有500余種［1］，我國(guó)已知的有300余種，廣泛分布于我國(guó)西北和西南地區(qū)的高山上［2］，其藥用種類達(dá)到50余種［3］。其民間應(yīng)用歷史悠久，療效明顯，享有盛譽(yù)［1］。其中以根、根莖入藥者如太白參、蘚生馬先蒿、互葉鳳尾參等20余種，多有滋陰補(bǔ)腎、補(bǔ)中益氣、健脾和胃等功能;以花或全草入藥者如斑唇馬先蒿、阿拉善馬先蒿、聚花馬先蒿、長(zhǎng)花馬先蒿等近30種，多具有清熱解毒、利尿、保肝等作用［3］。近年來(lái)，關(guān)于該屬藥用植物化學(xué)成分的研究已經(jīng)越來(lái)越引起學(xué)者的重視。目前已經(jīng)從該屬植物中分離出了多種化學(xué)成分，如苯丙素苷類、黃酮類、生物堿類、環(huán)烯醚萜類化合物，其中苯丙素苷類和環(huán)烯醚萜類是該屬植物的特征性化合物［4-6］。

斑唇馬先蒿［Pedicularis longiflora Rudolph.var.tubiformis(Klotz)．Tsoong］，作為馬先蒿屬中的一種，是藏藥中的一種傳統(tǒng)藥材，主產(chǎn)于西藏等地，分布于青海、云南西北部、四川西部、甘肅部分地區(qū)［7］。生于海拔2700～5300 m的高山草甸、沼澤、湖邊、河谷及溪流兩旁、云杉林緣。具有清熱解毒、強(qiáng)筋利水、固精等功效?？扇萑胨帲糜陲L(fēng)熱癥、肉食中毒、高燒神昏譫語(yǔ)、水腫、遺精等癥［8］，具有較高的藥用價(jià)值。然而，對(duì)斑唇馬先蒿化學(xué)成分的研究的報(bào)道少之又少，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，只有 Ting-Fu Jiang等利用毛細(xì)管電泳的方法從斑唇馬先蒿中分離并鑒定出了四種苯丙素苷類物質(zhì):echinocoside、verbascoside、pedicularioside M、pedicularioside A［4］。本研究對(duì)斑唇馬先蒿的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)的分離純化，可以為藏藥斑唇馬先蒿的深入研究提供基礎(chǔ)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與材料

Bruker AV-400型核磁共振儀;Agilent 1200型高效液相色譜儀;薄層、柱層析硅膠(青島海洋化工工廠生產(chǎn));Sephadex LH-20(Pharmaeia生產(chǎn));D101型大孔樹脂(天津波鴻樹脂科技有限公司生產(chǎn));反相C18柱(成都科譜生物有限公司)。

斑唇馬先蒿全草采自青海省剛察縣，經(jīng)中國(guó)科學(xué)院西北高原生物研究所高級(jí)工程師梅麗娟鑒定為斑唇馬先蒿。

1.2 提取與分離

斑唇馬先蒿全草陰干后，取2 kg粉碎，70%酒精熱回流提取3次，每次2小時(shí)，提取液減壓濃縮得浸膏，然后使浸膏懸浮于適量純水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，減壓濃縮，得到石油醚部分18 g、乙酸乙酯部分83 g、正丁醇部分52 g。其中乙酸乙酯部分反復(fù)過硅膠柱、Sephadex LH-20柱、反相 C18柱，分離得到化合物 1(62 mg)、2(41 mg)、3(24 mg)、4(32 mg)。正丁醇部分經(jīng)過大孔樹脂D101粗分離后反復(fù)上反相C18柱，分離得到化合物5(149 mg)、6(46 mg)、7(76 mg)。

2 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物 1:黃色針晶。1H NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ:12.99(1H，s，5-OH)，7.41(1H，d，J=8.3 Hz，H-6')，7.40(1H，s，H-2')，6.88(1H，d，J=8.3 Hz，H-5')，6.68(1H，s，H-8)，6.44(1H，s，H-3)，6.19(1H，s，H-6);13C NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ:182.3(C-4)，165.0(C-2)，164.6(C-7)，162.1(C-5)，158.0(C-9)，150.5(C-4')，146.4(C-3')，122.1(C-1')，118.6(C-6')，116.7(C-5')，114.0(C-2')，104.3(C-10)，103.5(C-3)，99.5(C-6)，94.5(C-8)。以上核磁數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)［9］中報(bào)道的木犀草素(luteolin)的核磁數(shù)據(jù)基本一致，因此確定該化合物為木犀草素(luteolin)。其結(jié)構(gòu)如圖1所示。

化合物 2:黃色針晶。1H NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ:12.98(1H，s，5-OH)，10.61(1H，s，7-OH)，7.93(2H，d，J=8.4 Hz，H-2'，6')，6.94(2H，d，J=8.8 Hz，H-3'，5')，6.79(1H，s，H-3)，6.49(1H，d，J=2.1 Hz，H-8)，6.20(1H，d，J=2.1 Hz，H-6);13C NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ:181.7(C-4)，164.1(C-2)，163.7(C-7)，161.4(C-5)，161.1(C-4')，157.3(C-9)，128.4(C-2')，128.4(C-6')，121.2(C-1')，115.9(C-3')，115.9(C-5')，103.7(C-10)，102.8(C-3)，98.8(C-6)，93.9(C-8)。這與參考文獻(xiàn)［10］中報(bào)道的芹菜素(apigenin)的核磁數(shù)據(jù)基本一致，因此確定該化合物為芹菜素(apigenin)。其結(jié)構(gòu)如圖1所示。

化合物 3:黃色針晶。1H NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ:7.55(1H，d，J=8.4 Hz，H-6')，7.54(1H，s，H-2')，6.93(1H，d，J=8.4 Hz，H-5')，6.87(1H，s，H-3)，6.48(1H，s，H-8)，6.17(1H，s，H-6)，3.81(3H，s，H-OCH3);13C NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ:181.5(C-4)，166.2(C-2)，163.4(C-7)，161.4(C-5)，157.4(C-9)，150.9(C-3')，148.0(C-4')，121.3(C-1')，120.3(C-6')，115.8(C-5')，110.1(C-2')，103.3(C-10)，103.0(C-3)，99.1(C-6)，94.1(C-8)，55.8(C-OMe)。以上核磁數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)［9］中報(bào)道的金圣草黃素(chrysoeriol)的核磁數(shù)據(jù)基本一致，因此確定該化合物為金圣草黃素(chrysoeriol)。其結(jié)構(gòu)如圖1所示。

化合物 4:黃色粉末。1H NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ:12.95(s，1H)，10.90(s，1H)，9.37(s，1H)，7.30(s，2H)，6.92(s，1H)，6.56(d，1H，J=2.0 Hz)，6.21(d，1H，J=1.6 Hz)，3.87(s，6H)，3.14(s，3H);13C NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ:181.9(C-4)，164.1(C-7)，163.8(C-3')，163.8(C-5')，161.2(C-5)，157.5(C-9)，148.3(C-2)，139.8(C-3)，120.6(C-1')，104.5(C-2')，104.5(C-6')，104.4(C-10)，103.8(C-4')，98.9(C-6)，94.4(C-8)，56.5(C-OMe)。以上核磁數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)［11］中報(bào)道的 3，5，7-三羥基-3'，5'-二甲氧基黃酮 (3，5，7-trihydroxy-3'，5'-dimethoxyl flavone)的核磁數(shù)據(jù)基本一致，因此確定該化合物為3，5，7-三羥基-3'，5'-二甲氧基黃酮(3，5，7-trihydroxy-3'，5'-dimethoxyl flavone)。其結(jié)構(gòu)如圖1所示。

化合物 5:無(wú)色針晶。1H NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ:7.44(d，1H，J=16.0 Hz)，7.02(d，1H，J=1.6 Hz)，6.97(dd，1H，J=1.6，8.4 Hz)，6.75(d，1H，J=8.0 Hz)，6.63(d，1H，J=1.6 Hz)，6.61(d，1H，J=8.0 Hz)，6.48(dd，1H，J=1.6 Hz，J=8.0 Hz)，6.19(d，1H，J=16.0 Hz)，5.00(s，1H)，4.70(t，1H，J=9.2 Hz)，4.34(d，1H，J=7.6 Hz)，3.86(m，1H)，3.77(m，1H)，3.73(m，2H)，3.56(m，1H)，3.46(m，1H)，3.36(m，1H)，3.30(m，1H)，3.26(m，1H)，3.17(m，1H)，3.09(t，1H，J=9.6 Hz)，2.67(m，2H)，1.02(d，3H，J=6.0 Hz);13C NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ:165.9(C-9')，148.5(C-4')，145.8(C-7')，145.6(C-3')，145.0(C-3)，143.6(C-4)，129.3(C-1)，125.6(C-1')，121.7(C-6')，119.8(C-6)，116.4(C-2)，115.9(C-5')，115.6(C-5)，114.7(C-2')，113.7(C-8')，102，4(glc-1)，101.4(rham-1)，79.2(glc-3)，74.6(glc-2)，71.7(glc-5)，71.6(rham-4)，70.6(rham-2)，70.5(C-8)，70.4(rham-5)，69.2(glc-4)，68.9(rham-3)，60.8(glc-6)，35.1(C-7)，18.3(rham-6)。通過與參考文獻(xiàn)［12］中的毛蕊花苷(verbascoside)的核磁數(shù)據(jù)比對(duì)后，確定該化合物為毛蕊花苷(verbascoside)。其結(jié)構(gòu)如圖1所示。

化合物6:白色無(wú)定型粉末。1H NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ:7.45(d，1H，J=16.0 Hz)，7.04(d，1H，J=1.6 Hz)，6.95(dd，1H，J=2.0 Hz，J=8.4 Hz)，6.74(d，1H，8.0 Hz)，6.59(d，1H，J=1.6 Hz)，6.56(d，1H，J=8.0 Hz)，6.44(dd，1H，J=1.6 Hz，J=8.0 Hz)，6.30(d，1H，J=15.6 Hz)，5.02(s，1H)，4.35(d，1H，J=10.8 Hz)，4.26(d，1H，J=7.6 Hz)，4.18(m，1H)，3.88(m，1H)，3.74(m，1H)，3.65(m，1H)，3.57(m，1H)，3.50(m，2H)，3.46(m，1H)，3.40(m，1H)，3.19(m，1H)，3.10(m，1H)，2.65(m，2H)，1.07(d，3H，J=6.0 Hz);13C NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ:166.7(C-9')，148.4(C-4')，145.5(C-7')，145.4(C-3')，144.9(C-3)，143.4(C-4)，129.3(C-1)，125.5(C-1')，121.6(C-6')，119.6(C-6)，116.3(C-2)，115.8(C-5')，115.5(C-5)，114.8(C-2')，113.9(C-8')，102.7(glc-1)，100.7(rham-1)，80.9(glc-3)，74.1(glc-2)，73.8(glc-5)，72.1(rham-4)，70.6(rham-2)，70.5(C-8)，70.4(rham-5)，68.5(glc-4)，68.2(rham-3)，63.5(glc-6)，35.2(C-7)，17.9(rham-6)。這與參考文獻(xiàn)［13］中報(bào)道的異毛蕊花苷(isoverbascoside)的核磁數(shù)據(jù)是一致的，因此確定該化合物為異毛蕊花苷(isoverbascoside)。其結(jié)構(gòu)如圖1所示。

化合物7:黃色粉末。1H NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ:7.43(d，1H，J=8.0 Hz)，7.41(s，1H)，6.89(d，1H，J=8.0Hz)，6.78(d，1H，J=1.6 Hz)，6.74(s，1H)，6.43(d，1H，J=2.0 Hz)，4.06(1H，d，J=7.6 Hz)，3.69(m，1H)，3.48-3.44(m，3H，)3.25(m，1H)，3.18(m，1H);13C NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ:181.9(C-4)，164.5(C-2)，163.0(C-7)，161.0(C-5)，157.1(C-9)，149.9(C-3')，145.7(C-4')，121.5(C-1')，119.3(C-6')，116.0(C-5')，113.5(C-2')，105.4(C-3)，103.3(C-10)，99.9(C-6)，99.6(glc-1)，94.9(C-8)，77.2(glc-5)，76.3(glc-3)，73.1(glc-2)，69.5(glc-4)，60.6(glc-6)。這與文獻(xiàn)［14］中報(bào)道的木犀草 素-4'-O-β-D-葡 萄 糖 苷 (luteolin-4'-O-β-D-glucoside)核磁數(shù)據(jù)一致，因此確定該化合物為木犀草素-4'-O-β-D-葡萄糖苷 (luteolin-4'-O-β-D-glucoside)。其結(jié)構(gòu)如圖1所示。

圖1 化合物化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig.1 Chemical structures of the purified compounds

3 結(jié)果與討論

藏藥斑唇馬先蒿具有較高的藥用價(jià)值，然而對(duì)其化學(xué)成分研究極少，這嚴(yán)重限制了其深入研究和開發(fā)利用。本研究利用多種柱層析色譜技術(shù)從斑唇馬先蒿中分離出了7個(gè)化合物:木犀草素(luteolin)、芹菜素(qpigenin)、金圣草黃素(chrysoeriol)、3，5，7-三羥基-3'，5'-二甲氧基黃酮 (3，5，7-trihydroxy-3'，5'-dimethoxyl flavone)，毛蕊花苷(verbasco-side)、異毛蕊花苷(isoverbascoside)，木犀草素-4'-O-β-D-葡萄糖苷(luteolin-4'-O-β-D-glucoside)，且均為首次從該植物中分離出，為對(duì)藏藥斑唇馬先蒿的深入研究提供了基礎(chǔ)。

1 Wu Z(吳臻)，Li FR(李發(fā)榮)，Yang JX(楊建雄).Research advances in medicinal plants of Pedicularis species.Lishizhen Med Mater Medica Res(時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥)，2002，13:305-307.

2 The elves of high mountains—pedicularis.World of life(生命世界)，2011，8:94-95.

3 Guan F(關(guān)放)，Yu L(于蘭)，Yang Y(楊云).Research advances in the plants of Pedicularis species.Northwest Pharm J(西北藥學(xué)雜志)，2006，21:142-143.

4 Jiang TF，Ou QY，Shi YP.Separation and determination of phenylpropanoid glycosides from Pedicularis species by capillary electrophoresis.J Chromatogr A，2003，986:163-167.

5 Jia ZJ(賈忠建)，Liu ZM(劉自民)，Wang CZ(王長(zhǎng)增).Study on the phenylpropanoid glycosides in plants of Pedicularis species.Chem J Chin Univ(高等學(xué)校化學(xué)學(xué)報(bào))，1992，13:481-482.

6 Yang LC(楊連春)，Shen LD(沈連德).Studies on the chemical constituents of Pedicularis muscicola Maxim.Chin J Chin Mater Med(中國(guó)中藥雜志)，1992，17:485-487.

7 Wu ZY(吳征鎰).Flora of Tibet(西藏植物志).Beijing:Science Press，1983.374.

8 Ministry of Health of the People's Republic of China Pharmacopoeia Committee.Pharmaceutical Standards of the Ministry of Health of the People's Republic of China，Tibetan Traditional Medicine，Vol.1(中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)，藏藥第一冊(cè)).Beijing:People's Health Publishing House，1995.100.

9 Jin HK，Young HC，S MP，et al.Antioxidants and inhibitor of matrix metalloproteinase-1 expression from leaves of Zostera marina L..Arch Pharm Res，2004，27:177-183.

10 Berashvili DT，Alaniya MD，Bakuridze AD，et al.Apignin glucuronide from Perilla nankinensisleaves.Chem Nat Compd，2005，41:97-98.

11 Chen YZ(陳耀祖)，Zhang HD(張惠迪)，Zhang SM(張所明)，et al.Studies on the chemical constituents of Lagotis Brachystachya Maxim.Chem J Chin Univ(高等學(xué)?；瘜W(xué)學(xué)報(bào))，1989，3:260-262.

12 Huang XJ(黃曉君)，Yin ZQ(殷志琦)，Ye WC(葉文才)，et al.Chemical constituents from the fruits of Ligustrum lucidum.Chin Pharm J(中國(guó)中藥雜志)，2010，35:861-864.

13 Xin F(辛菲)，Jin YS(金藝淑)，Sha Y(沙沂)，et al.Study on the chemical constitutes of Verbena officinalis L.Mod Chin Med(中國(guó)現(xiàn)代中藥)，2008，10(10):21-23.

14 Zhang YH(張?jiān)?，He L(何麗)，Guan HY(關(guān)煥玉)，et al.Flavonoids of Lysimachia paridiformis var.stenophylla.Chin Pharm J(中國(guó)中藥雜志)，2010，35:1824-1826.