侯小霞 劉俊曉 王孟麗

胎盤FATP1和HFABP基因的表達(dá)水平與胎兒生長(zhǎng)發(fā)育的相關(guān)性研究

侯小霞 劉俊曉 王孟麗

目的 探討必需脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白水平與胎兒生長(zhǎng)發(fā)育的相關(guān)性。方法 采用實(shí)時(shí)定量PCR(RT-PCR)檢測(cè)胎盤中FATP1和HFABP mRNA 表達(dá)水平, 同時(shí)收集新生兒的身長(zhǎng)、體重、頭圍和胎齡等指標(biāo)。結(jié)果 胎盤中FATP1 和HFABP mRNA的水平, 男性和女性之間有顯著差異；FATP1 mRNA的水平與新生兒的身長(zhǎng)相關(guān), HFABP與胎齡表現(xiàn)出相關(guān)性。結(jié)論 胎盤中FATP1和HFABP的表達(dá)與胎兒的發(fā)育關(guān)系密切。

胎盤；FATP1；HFABP；生長(zhǎng)發(fā)育

胎盤能調(diào)節(jié)母體與胎兒之間營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和外源性化學(xué)物質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)。必需脂肪酸及其衍生物是通過(guò)胎盤來(lái)調(diào)節(jié)的重要物質(zhì), 也是生物膜必不可少的組成成分和胞內(nèi)外信號(hào)分子的前體。哺乳動(dòng)物不能合成必需脂肪酸, 因此, 胎兒依賴母體日常攝入的必需脂肪酸及其在胎盤中的定向運(yùn)輸來(lái)獲取足夠的數(shù)量, 以維持正常發(fā)育［1］。胎盤中必需脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白FATP1及HFABP的表達(dá)水平反應(yīng)了胎兒能通過(guò)胎盤獲得的必需脂肪酸的數(shù)量。本實(shí)驗(yàn)以新生兒為研究對(duì)象, 在出生時(shí)采集胎盤組織, 檢測(cè)胎盤中必需脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白FATP1及HFABP的mRNA表達(dá)水平, 從而探討胎兒生長(zhǎng)發(fā)育與新生兒胎盤必需脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白水平的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 一般資料 本研究中, 男性新生兒69名, 女性新生兒52名, 均在同一地區(qū)醫(yī)院出生。在取得父母同意后, 在新生兒出生時(shí)進(jìn)行樣本采集和數(shù)據(jù)收集。

1.2 胎盤的采集和蛋白水平的檢測(cè) 以臍帶附著處為中心將胎盤分成兩份, 在臍帶周圍剪一小塊全厚度的組織, 立即放入凍存管中, 標(biāo)記姓名和編號(hào), -70 ℃低溫冰箱保存。采用實(shí)時(shí)定量PCR(RT-PCR)檢測(cè)胎盤中FATP1和HFABP mRNA 表達(dá)水平。主要試劑：RNA 酶抑制劑(廣州瑞真生物有限公司)；逆轉(zhuǎn)錄PCR試劑盒(PrimeScript RT reagent Kit Perfect Real Time, Takara, 日本)；熒光定量PCR試劑盒(SYBR Premix Ex TaqTM(Tli RNaseH Plus), Takara, 日 本 )；2×Taq PCR Master Mix(北京諾維森生物科技有限公司)。

胎盤組織RNA提?。喝?00 mg胎盤組織置于勻漿器中,充分研磨, 加入1000 μl Trizol, 轉(zhuǎn)移至EP管中, 反復(fù)吹打至組織完全分散, 加入氯仿200 μl, 顛倒混勻, 27 ℃ 放置 5 min,4 ℃12000 rmp離心15 min, 將上層水相轉(zhuǎn)移于另一EP管中,加入等體積異丙醇混勻放置 15 min, 4 ℃12000 rmp離心10 min, 棄上清, 加預(yù)冷的75%乙醇, 4 ℃7500 rmp離心 5min,棄上清, 加入30 μl DEPC水。

逆轉(zhuǎn)錄cDNA的反應(yīng)條件：37℃,15 min(反轉(zhuǎn)錄反應(yīng))；85℃,5 sec(反轉(zhuǎn)錄酶的失活反應(yīng))。將cDNA用DEPC水稀釋5倍, 備用。實(shí)時(shí)定量PCR的擴(kuò)增標(biāo)準(zhǔn)程序：95 ℃, 30 s；95 ℃ , 5 s; 60 ℃ , 31 s (重復(fù) 40個(gè)循環(huán) )。

1.3 新生兒體格發(fā)育指標(biāo)的收集 新生兒出生后, 進(jìn)行身長(zhǎng)(cm)、體重(kg)、頭圍(cm)和胎齡(周)的檢測(cè), 收集數(shù)據(jù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析, 偏正態(tài)分布用中位數(shù)表示, 均數(shù)比較用非參數(shù)檢驗(yàn)(K-S、M-W檢驗(yàn)), 相關(guān)因素分析使用Spearman等級(jí)相關(guān)分析, 以α=0.05作為檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

胎盤中FATP1 和 HFABP mRNA的水平, 經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示, 男性新生兒胎盤中FATP1 和 HFABP mRNA的表達(dá)水平高于女性, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＜0.01)。隨著FATP1 mRNA表達(dá)水平的升高, HFABP的表達(dá)水平也顯著增加(Rs=0.51, P＜0.001)；FATP1與新生兒的身長(zhǎng)相關(guān), HFABP與胎齡表現(xiàn)出相關(guān)性。

表1 胎盤中FATP1及HFABP的表達(dá)水平與新生兒出生相關(guān)指標(biāo)的相關(guān)分析

3 討論

本研究發(fā)現(xiàn), 胎盤中FATP1, HFABP的表達(dá)水平在男性和女性新生兒中的表現(xiàn)出明顯的差異(P＜0.01), 表現(xiàn)為FATP1, HFABP在男性新生兒胎盤中的表達(dá)水平高于女性。由此我們推測(cè), FATP1, HFABP在男嬰和女嬰之間的生長(zhǎng)發(fā)育上存在較大的機(jī)制差別。以前的研究中, 脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)的上調(diào), 會(huì)導(dǎo)致各種類型的脂肪酸和脂質(zhì)在胎盤中積累, 可能會(huì)引起胎盤代謝活動(dòng)和脂質(zhì)活動(dòng)增強(qiáng), 從而降低胎兒必需脂肪酸的供給。胎兒脂肪酸供應(yīng)不足會(huì)導(dǎo)致胎兒宮內(nèi)發(fā)育遲緩, 胎兒面部畸形, 死胎, 嚴(yán)重的產(chǎn)后發(fā)育遲緩,并可能與成人時(shí)期一些疾病風(fēng)險(xiǎn)增加有關(guān)。胎盤中FATP1和HFABP的表達(dá)水平之間具有較強(qiáng)的相關(guān)性(P＜0.001), 胎盤中FATP1的表達(dá)水平與新生兒身長(zhǎng)有較強(qiáng)的相關(guān)性, 胎盤中HFABP的表達(dá)水平與新生兒胎齡有較強(qiáng)的相關(guān)性。說(shuō)明胎盤中FATP1和HFABP的表達(dá)與胎兒的發(fā)育關(guān)系密切。研究發(fā)現(xiàn), 胎兒長(zhǎng)鏈多聚不飽和脂肪酸的攝入情況與胎齡,胎兒體重, 身長(zhǎng), 頭圍均有關(guān)［2］。母親懷孕期間飲食中脂肪酸的構(gòu)成對(duì)一些出生結(jié)局會(huì)造成影響, 包括胎兒的生長(zhǎng)速度和胎齡［3］。

［1］ Y.Xu,S.Agrawal,T.J.Cook.Maternal Di-(2-ethylhexyl)-phthalate Exposure Infuences Essential Fatty Acid Homeostasis in Rat Placenta.Placenta, 2008, 29(11):962-969.

［2］ Gerard Hornstra.Essential fatty acids in mothers and their neonates.Am J Clin Nutr, 2000, 71:1262S-9S.

［3］ Olsen SF,Secher NJ.Low consumption of seafood in early pregnancy as a risk factor for preterm delivery: prospective cohort study.BMJ,2002,324(7335):447.

471009 洛陽(yáng), 鄭州大學(xué)附屬洛陽(yáng)中心醫(yī)院