王惟 柴婷婷 李丹

不同洗滌液制備冰凍解凍去甘油紅細胞的檢測結果分析

王惟 柴婷婷 李丹

目的 通過用兩種洗滌溶液制備冰凍解凍去甘油紅細胞結果進行質量分析, 來比較應用不同洗滌溶液, 一類是9%氯化鈉、羥乙基淀粉130氯化鈉注射液、0.9%氯化鈉；一類是9%氯化鈉、0.9%氯化鈉分別進行解凍紅細胞洗滌, 選擇合適制備冰凍解凍去甘油紅細胞的洗滌方法。方法 隨機抽取2010年采血6 d之內新鮮全血32份, 通過手工制備冰凍紅細胞：6 d之內(2～6℃保存)新鮮全血經(jīng)過25 min, 2300轉, 離心后去除血漿, 將血液倒入三珠空袋內, 用無菌接駁機連接輸血器, 應用甘油160 ml, 25 min加入振蕩器60次/min, 室溫沉淀30 min后放入-80℃冰箱速凍, 1個月后進行解凍。隨機分為A、B兩組, 每組16袋, 應用ACP215血液處理儀進行解凍紅細胞。A組洗滌液包括9%氯化鈉、羥乙基淀粉130氯化鈉、0.9%氯化鈉這三種溶液；B組洗滌液包括9%氯化鈉、0.9%氯化鈉這兩種溶液。用兩種不同洗滌溶液進行冰凍解凍去甘油紅細胞洗滌, 通過檢測項目為紅細胞回收率%, 白細胞殘留率%, 血小板殘留率%, 甘油含量, 血漿游離血紅蛋白含量, 體外溶血等指標進行檢測分析。結果 A組解凍紅細胞：紅細胞回收率81.0%±2.6%, 白細胞殘留率0.67%±0.14%, 血小板殘留率0.00%, 甘油含量4.8±0.43 g/L, 血漿游離血紅蛋白含量0.62±0.11 g/L, 體外溶血13%±5%。B組解凍紅細胞：紅細胞回收率82.0%±2.3%, 白細胞殘留率0.61%±0.26%, 血小板殘留率0.42%±0.1%, 甘油含量(5.1±0.13)g/L,血漿游離血紅蛋白含量(0.53±0.12) g/L, 體外溶血12%±4%。兩組結果均符合國家標準, 且無統(tǒng)計學意義。結論 通過手工制備冰凍紅細胞后, 應用ACP215血液處理儀制備冰凍解凍去甘油紅細胞分別使用A、B兩種洗滌液, 根據(jù)統(tǒng)計學分析洗滌效果無統(tǒng)計學意義, 檢測結果均達到國家標準, 可以確定在洗滌中不加入羥乙基淀粉130氯化鈉注射液, 檢測結果也能達到國家標準。

冰凍解凍去甘油紅細胞；洗滌液；羥乙基淀粉；130氯化鈉注射液

冰凍紅細胞在國內外已普遍在臨床應用, 超低溫甘油化冰凍保存紅細胞, 可大幅度延長紅細胞在體外存活時間, 平時貯備, 一旦臨床需要可立即進行解凍洗滌。在制備冰凍解凍去甘油紅細胞必須用一定的洗滌和程序, 去除高濃度甘油,使高滲狀態(tài)下的紅細胞, 通過洗滌過渡到生理等滲狀態(tài)紅細胞懸液, 并去除了絕大部分白細胞、血小板、血漿蛋白, 減少了輸血副反應, 是臨床患者理想、安全、可靠的成分制品。2010年以前長春市中心血站使用ACP215血液處理儀制備冰凍解凍去甘油紅細胞應用9%氯化鈉, 羥乙基淀粉130氯化鈉注射液, 0.9%氯化鈉洗滌液進行血液洗滌；2010年5月以來進行A、B兩種洗滌液洗滌試驗, 為評價這2種洗滌液洗滌的冰凍解凍去甘油紅細胞質量狀況, 經(jīng)檢測得出2種洗滌液制備冰凍解凍去甘油紅細胞中各項指標并計算, 并比較2種洗滌液洗滌的冰凍解凍去甘油紅細胞合格率, 來確認羥乙基淀粉130氯化鈉注射液撤出對洗滌效果的影響。

1 材料與方法

1.1 儀器設備 ACP215血液處理儀(ACP215型、美國Haemonetics公司)賀利氏(6000型、德國)電熱恒溫水浴箱(HHW21－600型、天津), 無菌接駁機(SC-201型、日本),血細胞計數(shù)儀(KX－21型、日本), 半自動生化分析儀(MF－6.24型、德國)調速多用振蕩器(HY－4型、金壇市)-80℃速凍冰箱(MDF－U32V型、日本)。

1.2 試劑與材料 復方甘油試劑(北京博德桑特、080915)三珠袋(北京博德桑特、080904)ACP215紅細胞洗滌耗材(美國血技、G09120)9%氯化鈉(北京博德桑特、091221)羥乙基淀粉130氯化鈉注射液(山東長富、10020183)0.9%氯化鈉(山東威高、0809081)輸血器(江西洪達、080903)鎢酸鈉(天津化學試劑四廠、20090316)氫氧化鈉(天津博迪化工、20100307)乙二醇(天津富宇精細化工、090919)無水乙醇(沈陽華東試劑廠、20100307)稀釋液(希森美康醫(yī)用電子有限公司、G9142)酚酞(沈陽華東試劑廠、20091112)高碘酸鈉(天津福晨化學試劑廠、20080620)血漿游離血紅蛋白試劑盒(北京瑞爾達生物科技、C1005016)溶血劑(希森美康醫(yī)用電子有限公司、R9059)

1.3 冰凍紅細胞制備 取32袋距采用日期6 d之內新鮮全血200ml/袋, 用賀利氏6000, 2200轉25 min離心, 用分漿夾去除上層血漿, 采用人工手法, 把濃縮紅細胞用無菌接駁機接駁并轉移到三珠袋, 用調速多用振蕩器和輸血器加入160ml復方甘油溶液, 室溫靜止30 min后, 裝盒, 送入-80℃冰箱速凍。

1.4 冰凍解凍去甘油紅細胞制備 將保存30 d的冰凍紅細胞32袋隨機分為兩組, A組用洗滌液為9%氯化鈉注射液、羥乙基淀粉130氯化鈉、0.9%氯化鈉；B組用洗滌液為9%氯化鈉、0.9%氯化鈉。在37℃電熱恒溫水浴箱內4-6 min,使冰凍紅細胞融解, 確認無滲漏后, 用ACP215血液處理儀、無菌接駁機接駁進行洗滌, 使用去甘油化洗滌程序進行解凍洗滌。

1.5 檢測項目數(shù)據(jù) 分別計算兩組紅細胞回收率(%), 白細胞殘留率(%), 血小板殘留率(%), 甘油含量, 血漿游離血紅蛋白含量, 體外溶血等指標。

1.6 質量標準 紅細胞回收率≥80%, 白細胞殘留率≤1%,血小板殘留率≤1%, 甘油含量<10g/L, 血漿游離血紅蛋白含量≤1g/L, 體外溶血≤50%

1.7 統(tǒng)計學方法 采用SPSS11軟件進行檢查

2 結果

兩組洗滌液, A組(9%氯化鈉溶液, 羥乙基淀粉130氯化鈉注射液, 0.9%氯化鈉溶液)、B組(9%氯化鈉溶液, 0.9%氯化鈉溶液)制備冰凍解凍去甘油紅細胞, 檢測數(shù)據(jù)及比較,兩組檢測數(shù)據(jù)之間均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)

組別 洗滌液 n(份)體外溶血(%)A組 9%氯化鈉溶液，羥乙基淀粉130氯化鈉注射液0.9%氯化鈉溶液 16 81.0±2.6% 0.67±0.14% 0.00% 4.8±0.43 0.62±0.11 13±5 B組 9%氯化鈉溶液 0.9%氯化鈉溶液 16 82.0±2.3% 0.61±0.26% 0.00% 5.1±0.13 0.53±0.12 12±4紅細胞回收率(%)白細胞殘留率(%)血小板殘留率(%)甘油含量(g/L)血漿游離血紅蛋白(g/L)

3 討論

冰凍紅細胞制備基本有兩種方法：高濃度甘油保存法和低濃度甘油保存法。高濃度甘油保存法：終濃度為40%, 儲存在-65℃或-65℃以下冰箱中；中濃度甘油保存法：終濃度為20%, 儲存在-120℃以下液氧中；低濃度甘油保存法：終濃度14%, 采用快速冷凍, 儲存在-150℃液氧氣箱或液氧中。制備冰凍解凍去甘油紅細胞方法可分為慢速糖液聚集洗滌制備法, 由美國人哈斯(Huggins)發(fā)明, 加等體積的50%葡萄糖和10%蔗糖與0.9%氯化鈉溶液, 先用高滲逐漸過度到等滲, 洗滌液為9%氯化鈉、0.9%氯化鈉組合, 目前我國一般采用9%氯化鈉、羥乙基淀粉130氯化鈉、0.9%氯化鈉組合進行冰凍解凍紅細胞洗滌, 但是本站發(fā)生6例在洗滌過程中發(fā)生機器堵塞現(xiàn)象, 既影響機器使用壽命, 又延誤制備時間。用ACP215血液處理儀洗滌冰凍紅細胞時, 在洗滌液中不添加羥乙基淀粉130氯化鈉制備冰凍解凍去甘油紅細胞各項檢測指標均達到國家標準, 與添加羥乙基淀粉130氯化鈉的洗滌液制備冰凍解凍去甘油紅細胞檢測結果無顯著差異。這樣既可節(jié)約有耗材成本, 又能方便快捷, 為搶救患者生命爭取了寶貴時間, 值得推廣應用。

［1］ 王培華.輸血技術學.北京：人民衛(wèi)生出版社, 2002.

［2］ 邱艷.全血成分務質量要求與血液標準華.北京：中國標準出版社, 2003.

［3］ 中華人民共和國國家標準 全血成分血質量要求GB18469-2001.

［4］ 袁連根、李延成、張志勇 .冰凍紅細胞解凍條件的改進.中國生物制品學雜志, 2007,20(11):861-862.

130033 長春市中心血站