王惟 柴婷婷 李丹

不同洗滌液制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞的檢測結(jié)果分析

王惟 柴婷婷 李丹

目的 通過用兩種洗滌溶液制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量分析, 來比較應(yīng)用不同洗滌溶液, 一類是9%氯化鈉、羥乙基淀粉130氯化鈉注射液、0.9%氯化鈉；一類是9%氯化鈉、0.9%氯化鈉分別進(jìn)行解凍紅細(xì)胞洗滌, 選擇合適制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞的洗滌方法。方法 隨機(jī)抽取2010年采血6 d之內(nèi)新鮮全血32份, 通過手工制備冰凍紅細(xì)胞：6 d之內(nèi)(2～6℃保存)新鮮全血經(jīng)過25 min, 2300轉(zhuǎn), 離心后去除血漿, 將血液倒入三珠空袋內(nèi), 用無菌接駁機(jī)連接輸血器, 應(yīng)用甘油160 ml, 25 min加入振蕩器60次/min, 室溫沉淀30 min后放入-80℃冰箱速凍, 1個(gè)月后進(jìn)行解凍。隨機(jī)分為A、B兩組, 每組16袋, 應(yīng)用ACP215血液處理儀進(jìn)行解凍紅細(xì)胞。A組洗滌液包括9%氯化鈉、羥乙基淀粉130氯化鈉、0.9%氯化鈉這三種溶液；B組洗滌液包括9%氯化鈉、0.9%氯化鈉這兩種溶液。用兩種不同洗滌溶液進(jìn)行冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞洗滌, 通過檢測項(xiàng)目為紅細(xì)胞回收率%, 白細(xì)胞殘留率%, 血小板殘留率%, 甘油含量, 血漿游離血紅蛋白含量, 體外溶血等指標(biāo)進(jìn)行檢測分析。結(jié)果 A組解凍紅細(xì)胞：紅細(xì)胞回收率81.0%±2.6%, 白細(xì)胞殘留率0.67%±0.14%, 血小板殘留率0.00%, 甘油含量4.8±0.43 g/L, 血漿游離血紅蛋白含量0.62±0.11 g/L, 體外溶血13%±5%。B組解凍紅細(xì)胞：紅細(xì)胞回收率82.0%±2.3%, 白細(xì)胞殘留率0.61%±0.26%, 血小板殘留率0.42%±0.1%, 甘油含量(5.1±0.13)g/L,血漿游離血紅蛋白含量(0.53±0.12) g/L, 體外溶血12%±4%。兩組結(jié)果均符合國家標(biāo)準(zhǔn), 且無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 通過手工制備冰凍紅細(xì)胞后, 應(yīng)用ACP215血液處理儀制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞分別使用A、B兩種洗滌液, 根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析洗滌效果無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義, 檢測結(jié)果均達(dá)到國家標(biāo)準(zhǔn), 可以確定在洗滌中不加入羥乙基淀粉130氯化鈉注射液, 檢測結(jié)果也能達(dá)到國家標(biāo)準(zhǔn)。

冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞；洗滌液；羥乙基淀粉；130氯化鈉注射液

冰凍紅細(xì)胞在國內(nèi)外已普遍在臨床應(yīng)用, 超低溫甘油化冰凍保存紅細(xì)胞, 可大幅度延長紅細(xì)胞在體外存活時(shí)間, 平時(shí)貯備, 一旦臨床需要可立即進(jìn)行解凍洗滌。在制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞必須用一定的洗滌和程序, 去除高濃度甘油,使高滲狀態(tài)下的紅細(xì)胞, 通過洗滌過渡到生理等滲狀態(tài)紅細(xì)胞懸液, 并去除了絕大部分白細(xì)胞、血小板、血漿蛋白, 減少了輸血副反應(yīng), 是臨床患者理想、安全、可靠的成分制品。2010年以前長春市中心血站使用ACP215血液處理儀制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞應(yīng)用9%氯化鈉, 羥乙基淀粉130氯化鈉注射液, 0.9%氯化鈉洗滌液進(jìn)行血液洗滌；2010年5月以來進(jìn)行A、B兩種洗滌液洗滌試驗(yàn), 為評價(jià)這2種洗滌液洗滌的冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞質(zhì)量狀況, 經(jīng)檢測得出2種洗滌液制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞中各項(xiàng)指標(biāo)并計(jì)算, 并比較2種洗滌液洗滌的冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞合格率, 來確認(rèn)羥乙基淀粉130氯化鈉注射液撤出對洗滌效果的影響。

1 材料與方法

1.1 儀器設(shè)備 ACP215血液處理儀(ACP215型、美國Haemonetics公司)賀利氏(6000型、德國)電熱恒溫水浴箱(HHW21－600型、天津), 無菌接駁機(jī)(SC-201型、日本),血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀(KX－21型、日本), 半自動(dòng)生化分析儀(MF－6.24型、德國)調(diào)速多用振蕩器(HY－4型、金壇市)-80℃速凍冰箱(MDF－U32V型、日本)。

1.2 試劑與材料 復(fù)方甘油試劑(北京博德桑特、080915)三珠袋(北京博德桑特、080904)ACP215紅細(xì)胞洗滌耗材(美國血技、G09120)9%氯化鈉(北京博德桑特、091221)羥乙基淀粉130氯化鈉注射液(山東長富、10020183)0.9%氯化鈉(山東威高、0809081)輸血器(江西洪達(dá)、080903)鎢酸鈉(天津化學(xué)試劑四廠、20090316)氫氧化鈉(天津博迪化工、20100307)乙二醇(天津富宇精細(xì)化工、090919)無水乙醇(沈陽華東試劑廠、20100307)稀釋液(希森美康醫(yī)用電子有限公司、G9142)酚酞(沈陽華東試劑廠、20091112)高碘酸鈉(天津福晨化學(xué)試劑廠、20080620)血漿游離血紅蛋白試劑盒(北京瑞爾達(dá)生物科技、C1005016)溶血?jiǎng)?希森美康醫(yī)用電子有限公司、R9059)

1.3 冰凍紅細(xì)胞制備 取32袋距采用日期6 d之內(nèi)新鮮全血200ml/袋, 用賀利氏6000, 2200轉(zhuǎn)25 min離心, 用分漿夾去除上層血漿, 采用人工手法, 把濃縮紅細(xì)胞用無菌接駁機(jī)接駁并轉(zhuǎn)移到三珠袋, 用調(diào)速多用振蕩器和輸血器加入160ml復(fù)方甘油溶液, 室溫靜止30 min后, 裝盒, 送入-80℃冰箱速凍。

1.4 冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞制備 將保存30 d的冰凍紅細(xì)胞32袋隨機(jī)分為兩組, A組用洗滌液為9%氯化鈉注射液、羥乙基淀粉130氯化鈉、0.9%氯化鈉；B組用洗滌液為9%氯化鈉、0.9%氯化鈉。在37℃電熱恒溫水浴箱內(nèi)4-6 min,使冰凍紅細(xì)胞融解, 確認(rèn)無滲漏后, 用ACP215血液處理儀、無菌接駁機(jī)接駁進(jìn)行洗滌, 使用去甘油化洗滌程序進(jìn)行解凍洗滌。

1.5 檢測項(xiàng)目數(shù)據(jù) 分別計(jì)算兩組紅細(xì)胞回收率(%), 白細(xì)胞殘留率(%), 血小板殘留率(%), 甘油含量, 血漿游離血紅蛋白含量, 體外溶血等指標(biāo)。

1.6 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 紅細(xì)胞回收率≥80%, 白細(xì)胞殘留率≤1%,血小板殘留率≤1%, 甘油含量<10g/L, 血漿游離血紅蛋白含量≤1g/L, 體外溶血≤50%

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS11軟件進(jìn)行檢查

2 結(jié)果

兩組洗滌液, A組(9%氯化鈉溶液, 羥乙基淀粉130氯化鈉注射液, 0.9%氯化鈉溶液)、B組(9%氯化鈉溶液, 0.9%氯化鈉溶液)制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞, 檢測數(shù)據(jù)及比較,兩組檢測數(shù)據(jù)之間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)

組別 洗滌液 n(份)體外溶血(%)A組 9%氯化鈉溶液，羥乙基淀粉130氯化鈉注射液0.9%氯化鈉溶液 16 81.0±2.6% 0.67±0.14% 0.00% 4.8±0.43 0.62±0.11 13±5 B組 9%氯化鈉溶液 0.9%氯化鈉溶液 16 82.0±2.3% 0.61±0.26% 0.00% 5.1±0.13 0.53±0.12 12±4紅細(xì)胞回收率(%)白細(xì)胞殘留率(%)血小板殘留率(%)甘油含量(g/L)血漿游離血紅蛋白(g/L)

3 討論

冰凍紅細(xì)胞制備基本有兩種方法：高濃度甘油保存法和低濃度甘油保存法。高濃度甘油保存法：終濃度為40%, 儲(chǔ)存在-65℃或-65℃以下冰箱中；中濃度甘油保存法：終濃度為20%, 儲(chǔ)存在-120℃以下液氧中；低濃度甘油保存法：終濃度14%, 采用快速冷凍, 儲(chǔ)存在-150℃液氧氣箱或液氧中。制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞方法可分為慢速糖液聚集洗滌制備法, 由美國人哈斯(Huggins)發(fā)明, 加等體積的50%葡萄糖和10%蔗糖與0.9%氯化鈉溶液, 先用高滲逐漸過度到等滲, 洗滌液為9%氯化鈉、0.9%氯化鈉組合, 目前我國一般采用9%氯化鈉、羥乙基淀粉130氯化鈉、0.9%氯化鈉組合進(jìn)行冰凍解凍紅細(xì)胞洗滌, 但是本站發(fā)生6例在洗滌過程中發(fā)生機(jī)器堵塞現(xiàn)象, 既影響機(jī)器使用壽命, 又延誤制備時(shí)間。用ACP215血液處理儀洗滌冰凍紅細(xì)胞時(shí), 在洗滌液中不添加羥乙基淀粉130氯化鈉制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞各項(xiàng)檢測指標(biāo)均達(dá)到國家標(biāo)準(zhǔn), 與添加羥乙基淀粉130氯化鈉的洗滌液制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞檢測結(jié)果無顯著差異。這樣既可節(jié)約有耗材成本, 又能方便快捷, 為搶救患者生命爭取了寶貴時(shí)間, 值得推廣應(yīng)用。

［1］ 王培華.輸血技術(shù)學(xué).北京：人民衛(wèi)生出版社, 2002.

［2］ 邱艷.全血成分務(wù)質(zhì)量要求與血液標(biāo)準(zhǔn)華.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社, 2003.

［3］ 中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn) 全血成分血質(zhì)量要求GB18469-2001.

［4］ 袁連根、李延成、張志勇 .冰凍紅細(xì)胞解凍條件的改進(jìn).中國生物制品學(xué)雜志, 2007,20(11):861-862.

130033 長春市中心血站