李 理， 鄭少?gòu)?qiáng)， 袁偉鋒， 黃文杰△

(1廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院呼吸內(nèi)科，廣東 廣州 510010； 2南方醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科，廣東 廣州 510630)

腫瘤壞死因子受體基因單核苷酸多態(tài)性與肺炎嚴(yán)重程度的相關(guān)性*

李 理1， 鄭少?gòu)?qiáng)2， 袁偉鋒1， 黃文杰1△

(1廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院呼吸內(nèi)科，廣東 廣州 510010；2南方醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科，廣東 廣州 510630)

目的比較腫瘤壞死因子受體(tumor necrosis factor receptor,TNFR)基因多個(gè)等位基因在肺炎人群中的分布頻率，分析基因多態(tài)性與肺炎發(fā)病率和病情嚴(yán)重程度的相關(guān)性。方法納入66例肺炎患者與66例既往無(wú)肺炎的健康體檢者，抽提各研究對(duì)象外周血DNA，通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性或基因測(cè)序的方法檢測(cè)TNFR1+36A/G、TNFR1-609G/T、TNFR2+676T/G、TNFR2 +1663T/G、TNFR2 +1668A/G和TNFR2 +1690C/T各多態(tài)性位點(diǎn)在肺炎患者與健康體檢者、重癥肺炎與非重癥肺炎患者中的分布頻率，并統(tǒng)計(jì)分析各基因分布頻率與肺炎發(fā)生率和嚴(yán)重程度的相關(guān)性。結(jié)果TNFR1-609G與T等位基因在肺炎患者中分布頻率分別為40.9%與59.1%，在健康體檢者中的分布頻率分別為53.8%與46.2%；TNFR1-609T等位基因在肺炎患者中的分布頻率較高(P<0.05)。余基因的各等位基因在肺炎患者與健康體檢者中的分布頻率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。TNFR1-609G與T等位基因在重癥肺炎患者中分布頻率分別為25.0%與75.0%，在非重癥肺炎患者中的分布頻率分別為46.0%與54.0%，T等位基因在重癥肺炎患者中的分布頻率較高(P<0.05)。TNFR2 +1690C與T等位基因在重癥肺炎患者中分布頻率分別為81.1%與18.9%，在非重癥肺炎患者中的分布頻率分別為61.0%與39.0%，C等位基因在重癥肺炎患者中分布頻率較高(P<0.05)，余基因的各等位基因在重癥肺炎與非重癥肺炎患者中的分布頻率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論攜帶TNFR1-609T等位基因的個(gè)體更易罹患肺炎，而攜帶TNFR1-609T及TNFR2 +1690C等位基因的個(gè)體肺炎病情較嚴(yán)重，易進(jìn)展為重癥肺炎。

受體，腫瘤壞死因子； 多態(tài)性，單核苷酸； 肺炎

當(dāng)前眾多研究均顯示重癥肺炎的發(fā)病機(jī)制與肺局部炎癥反應(yīng)調(diào)節(jié)失衡有關(guān)，促炎反應(yīng)過(guò)度活化與抑炎反應(yīng)活化相對(duì)不足，導(dǎo)致機(jī)體正常組織與細(xì)胞的炎癥性破壞，損傷肺臟的通氣與換氣功能，在宏觀上表現(xiàn)為重癥肺炎。 本實(shí)驗(yàn)室前期研究已證實(shí)炎癥反應(yīng)通路中不同分子的基因多態(tài)性可能影響炎癥反應(yīng)強(qiáng)度，進(jìn)而影響機(jī)體對(duì)肺炎的易感性與罹患重癥肺炎的風(fēng)險(xiǎn)，如攜帶TNF-α-308A等位基因的患者在感染后體內(nèi)炎癥反應(yīng)水平較高，更容易發(fā)展成感染性休克[1]。

TNF-α與其受體TNFR結(jié)合將向細(xì)胞內(nèi)傳遞炎癥反應(yīng)活化的信號(hào)，二者質(zhì)或量的改變均將影響炎癥反應(yīng)強(qiáng)度。TNFR作為T(mén)NF-α的受體，是TNF-α/NF-κB/TNF-α炎癥反應(yīng)放大途徑的重要分子。但對(duì)于在感染性疾病TNFR基因多態(tài)性的研究不多，在肺炎中的研究?jī)H見(jiàn)個(gè)別報(bào)道。本研究為明確TNFR基因多態(tài)性與肺炎易感性、病情嚴(yán)重程度的相關(guān)性，通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(po-lymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)或基因測(cè)序的方法檢測(cè)肺炎患者與健康體檢者TNFR基因中多個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)不同等位基因的分布，并分析其分布規(guī)律與病情嚴(yán)重程度的相關(guān)性，為通過(guò)檢測(cè)TNFR基因多態(tài)性預(yù)測(cè)肺炎患者病情與預(yù)后提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

材 料 和 方 法

1研究對(duì)象

研究對(duì)象為2010年10月～2011年 6月就診于廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院呼吸科的66例成年肺炎患者(男性37名，女性29名，年齡60.59歲±14.67歲)及66例既往無(wú)肺炎病史的健康體檢者(男性31名，女性35名，平均年齡54.62歲±15.45歲)。各受試者之間無(wú)血緣關(guān)系。在肺炎患者中，16例診斷為重癥肺炎，死亡7例。

肺炎診斷標(biāo)準(zhǔn)：(1)新近出現(xiàn)的咳嗽、咳痰，或原有呼吸道疾病癥狀加重，并出現(xiàn)膿性痰；伴或不伴胸痛、氣急等癥狀；(2) 發(fā)熱；(3) 肺實(shí)變體征和(或) 濕性羅音；(4)白細(xì)胞>10×109/L 或<4×109/L，伴或不伴核左移；(5) 胸部X 線檢查顯示片狀、斑片狀浸潤(rùn)性陰影或間質(zhì)性改變，伴或不伴胸腔積液。以上1～4 項(xiàng)中任何1項(xiàng)加第5項(xiàng)，并排除肺結(jié)核、肺部腫瘤、非感染性肺間質(zhì)性疾病、肺水腫、肺不張、肺栓塞、肺嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)癥、肺血管炎外等,可建立肺炎臨床診斷。重癥肺炎診斷標(biāo)準(zhǔn)參照2007年IDSA/ATS關(guān)于成人社區(qū)獲得性肺炎的診治指南。主要標(biāo)準(zhǔn)：(1)需要機(jī)械通氣；(2)感染性休克或需要應(yīng)用血管活性物質(zhì)；次要標(biāo)準(zhǔn)(1)呼吸頻率≥30 min-1；(2)氧合指數(shù)(PaO2/FiO2)<250；(3)雙側(cè)或多葉性肺炎；(4)昏迷或定向力缺失；(5)尿毒癥(血尿素氮≥20 mg/dL)；(6)白細(xì)胞計(jì)數(shù)<4×109/L；(7)血小板計(jì)數(shù)<100×109/L；(8)低體溫<36 ℃；(9)低血壓需要液體復(fù)蘇。符合3條次要標(biāo)準(zhǔn)或1條主要標(biāo)準(zhǔn)[2]。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)伴有代謝性疾病，如糖尿病、甲狀腺功能亢進(jìn)、甲狀腺功能減低、原發(fā)性醛固酮增多癥等；(2)伴良性或惡性腫瘤；(3)伴自身免疫性疾??；(4)伴病毒感染。

本研究以肺炎患者為肺炎組(community-acquired pneumonia group, CAP組)，以健康體檢者為對(duì)照組(control group)；其中CAP組按病情嚴(yán)重程度分為重癥肺炎組(severe community-acquired pneumonia group, SCAP組)與非重癥肺炎組(non-severe community-acquired pneumonia group, NSCAP組)。

2TNFR的單核苷酸多態(tài)性(singlenucleotidepo-lymorphism,SNP)檢測(cè)

收集研究對(duì)象的外周血，EDTA抗凝，取200 μL提取外周血DNA，按照Fermentas公司DNA抽提試劑盒(Genomic DNA Purification Kit，#K0512)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

以抽提的DNA作為模板，使用PCR-RFLP或基因測(cè)序的方法對(duì)各研究對(duì)象的以下SNP進(jìn)行分析：TNFR1+36A/G、TNFR1-609G/T、TNFR2+676T/G、TNFR2+1663T/G、TNFR2+1668A/G與TNFR2+1690C/T。PCR試劑采用DreamTaqTMPCR Master Mix 2×(Fermentas，#K1071)。PCR體系：DreamTaqTMPCR Master Mix 10 μL，上游及下游引物各0.8 μL(濃度10 μmol/L，引物序列見(jiàn)表1)，DNA模板3 μL，去離子水5.4 μL。PCR條件：95 ℃預(yù)變性5 min，95 ℃變性、退火(溫度見(jiàn)表1)與72 ℃延伸各30 s，終延伸5 min。

以各PCR擴(kuò)增產(chǎn)物作為底物，采用限制性內(nèi)切酶進(jìn)行酶切反應(yīng)。攜帶TNFR1+36A/G、TNFR1 -609G/T與TNFR2+676T/G 這3個(gè)SNP的PCR產(chǎn)物酶切體系、條件、酶切產(chǎn)物片段大小與基因型判斷見(jiàn)表2。

TNFR2 +1663T/G、 +1668A/G和 +1690C/T這3個(gè)SNP在序列上位置接近，采用基因測(cè)序的方法共同對(duì)上述3個(gè)SNP進(jìn)行檢測(cè)。

表1 攜帶目標(biāo)SNP的DNA片段PCR擴(kuò)增

表2酶切反應(yīng)條件與基因型判斷

Table 2. Outline of genotypes ofTNFRand the reaction condition of restriction enzyme

LocusSubstrate(bp)EndonucleaseTemperature(℃)Allele(bp)TNFR1-609G/T360TaaI65GT:360+263+97TT:263+97GG:108+75TNFR1+36A/G183MspAII37GA:183+108+75AA:183TNFR2+676T/G242NlaIII37TT:109+133GT:242+109+133GG:242

3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

計(jì)量資料行正態(tài)性檢驗(yàn)，正態(tài)性分布資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，非正態(tài)資料以中位數(shù)表示。計(jì)數(shù)資料的組間比較采用2檢驗(yàn)。采用SPSS 11.5軟件完成,以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1TNFR基因各SNP檢測(cè)結(jié)果

在所有研究對(duì)象中，除TNFR1+36A/G未發(fā)現(xiàn)突變純合子外，TNFR1-609G/T、TNFR2+676T/G、TNFR2+1663T/G、TNFR2+1668A/G與TNFR2 +1690C/T均發(fā)現(xiàn)野生純合子與雜合子。TNFR1 -609G/T、TNFR1 +36A/G與TNFR2 +676T/G的基因型判斷參照表2，上述不同基因型所在PCR片段經(jīng)酶切后進(jìn)行瓊脂糖電泳分析，雜合子的基因型將被酶切為3段核苷酸片段，酶切產(chǎn)物電泳示意圖見(jiàn)圖1。TNFR2+1663、+1668和+1690基因測(cè)序結(jié)果示意圖見(jiàn)圖2。

Figure 1. Restriction enzyme analysis ofTNFR1-609(A),TNFR1+36 (B) andTNFR2+676 (C) PCR products.M: DNA marker;N:normal control (wild type).

圖1TNFR1-609、TNFR1+36與TNFR2+676的PCR片段酶切分析

2TNFR基因多態(tài)性在CAP組和對(duì)照組中的分布

TNFR1-609GG、GT與TT基因型在CAP組中分布頻率分別為18.2%、45.5%與36.3%，在對(duì)照組中的分布頻率分別為30.3%、47.0%與22.7%，上述3個(gè)基因型在兩組中的分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。TNFR1 -609G與T等位基因在CAP組中分布頻率分別為40.9%與59.1%，在對(duì)照組中的分布頻率分別為53.8%與46.2%，T等位基因在CAP組中的分布頻率較高，其差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表3。TNFR1+36、TNFR2+676、TNFR2 +1663、TNFR2+1668與TNFR2+1690的各基因型與等位基因在CAP組與對(duì)照組中的分布頻率差異差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表3。

Figure 2. The schematic diagrams of sequencing ofTNFR2 +1663, +1668 and +1690.

圖2TNFR2+1663、+1668和+1690基因測(cè)序結(jié)果示意圖

3TNFR基因多態(tài)性在SCAP組和NSCAP組中的分布

TNFR1-609GG、GT與TT基因型在SCAP組中分布頻率分別為0.0%、50.0%與50.0%，在NSCAP組中的分布頻率分別為24.0%、44.0%與32.0%，上述3個(gè)基因型在兩組中的分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。TNFR1-609G與T等位基因在SCAP組中分布頻率分別為25.0%與75.0%，在NSCAP組中的分布頻率分別為46.0%與54.0%，T等位基因在SCAP組中的分布頻率較高，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

TNFR2+1690CC、CT與TT基因型在SCAP組中分布頻率分別為62.5%、37.5%與0.0%，在NSCAP組中的分布頻率分別為40.0%、42.0%與18.0%，上述3個(gè)基因型在兩組中的分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。TNFR2+1690C與T等位基因在SCAP組中分布頻率分別為81.1%與18.9%，在NSCAP組中的分布頻率分別為61.0%與39.0%，C等位基因在SCAP組中分布頻率較高，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

TNFR1+36、TNFR2+676、TNFR2+1663與TNFR2+1668的各基因型與等位基因在SCAP組與NSCAP組中的分布頻率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表4。

表3TNFR基因多態(tài)性在CAP組和對(duì)照組中的分布

Table 3. Genotype and allele frequencies ofTNFRgene polymorphisms between CAP group and control group

LocusAlleleCAPControlPTNFR1-609GG12(18.2%)20(30.3%)>0.05GT30(45.5%)31(47.0%)TT24(36.3%)15(22.7%)G54(40.9%)71(53.8%)<0.05T78(59.1%)61(46.2%)TNFR1+36AA57(86.4%)58(87.9%)>0.05AG9(13.6%)8(12.1%)GG0(0.0%)0(0.0%)A123(93.2%)124(93.9%)>0.05G9(6.8%)8(6.1%)TNFR2+676GG5(7.6%)5(7.6%)>0.05GT15(22.7%)19(28.8%)TT46(69.7%)42(63.6%)G25(18.9%)29(22.0%)>0.05T107(81.1%)103(78.0%)TNFR2+1663GG22(33.3%)22(33.3%)>0.05AG32(48.5%)27(40.9%)AA12(18.2%)17(25.8%)A56(42.4%)61(46.2%)>0.05G76(57.6%)71(53.8%)TNFR2+1668TT66(100.0%)66(100.0%)NoneTG00GG00T132(100.0%)132(100.0%)NoneG00TNFR2+1690CC30(45.5%)33(50.0%)>0.05CT27(40.9%)27(40.9%)TT9(13.6%)6(9.1%)C87(65.9%)93(70.0%)>0.05T45(34.1%)39(30.0%)

表4TNFR基因多態(tài)性在SCAP組和NSCAP組中的分布

Table 4. Genotype and allele frequencies ofTNFRgene polymorphisms between SCAP group and NSCAP group

LocusAlleleSCAPNSCAPPTNFR1-609GG0(0.0%)12(24.0%)>0.05GT8(50.0%)22(44.0%)TT8(50.0%)16(32.0%)G8(25.0%)46(46.0%)<0.05T24(75.0%)54(54.0%)TNFR1+36AA14(87.5%)43(86.0%)>0.05AG2(12.5%)7(14.0%)GG0(0.0%)0(0.0%)A30(93.7%)93(93.0%)>0.05G2(6.3%)7(7.0%)TNFR2+676GG1(6.2%)4(8.0%)>0.05GT3(18.8%)12(24.0%)TT12(75.0%)34(68.0%)G5(15.6%)20(20.0%)>0.05T27(84.4%)80(80.0%)TNFR2+1663GG3(18.8%)9(18.0%)>0.05AG8(50.0%)24(48.0%)AA5(31.2%)17(34.0%)A14(43.7%)42(42.0%)>0.05G18(56.3%)58(58.0%)TNFR2+1690CC10(62.5%)20(40.0%)>0.05CT6(37.5%)21(42.0%)TT0(0.0%)9(18.0%)C26(81.1%)61(61.0%)<0.05T6(18.9%)39(39.0%)

討 論

多項(xiàng)研究已證實(shí)重癥肺炎患者體內(nèi)存在炎癥反應(yīng)失衡。本實(shí)驗(yàn)室既往的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已證實(shí)重癥肺炎大鼠體內(nèi)存在促炎細(xì)胞因子的過(guò)度釋放與抑炎細(xì)胞因子的表達(dá)不足[3-4]。后續(xù)研究證實(shí)TNF-α啟動(dòng)子區(qū)單核苷酸多態(tài)性與肺炎的易感性、重癥肺炎的發(fā)生率有關(guān)[5]。我們對(duì)TNF-α的后續(xù)擴(kuò)展研究發(fā)現(xiàn)，重癥肺炎時(shí)TNF-α/NF-κB形成正反饋環(huán)路，放大炎癥反應(yīng)，當(dāng)抑制TNF-α信號(hào)后，上述正反饋環(huán)路中斷，肺內(nèi)炎癥損傷減輕[6-7]。因此，TNF-α信號(hào)與肺內(nèi)炎癥反應(yīng)強(qiáng)度密切相關(guān)，并可能影響肺炎的進(jìn)一步惡化。

TNFR接受TNF-α的信號(hào)而啟動(dòng)細(xì)胞的炎癥反應(yīng)。TNF-α作為一種重要的炎癥介質(zhì)，與其受體TNFR結(jié)合，啟動(dòng)細(xì)胞內(nèi)的炎癥反應(yīng)，二者表達(dá)量或活化程度的改變均可影響炎癥反應(yīng)的強(qiáng)度。TNFR主要分兩型，TNFR1與TNFR2，前者由TNFRSF1A編碼，后者由TNFRSF1B編碼。TNFR1廣泛存在于有核細(xì)胞表面，其胞內(nèi)段具有死亡結(jié)構(gòu)域，可通過(guò)與TNF受體相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域(TNF receptor-associated death domain,TRADD)相結(jié)合，激活半胱天冬酶及活化NF-κB，引起炎性因子、趨化因子的轉(zhuǎn)錄[8]。TNFR2主要在淋巴細(xì)胞表達(dá)，其胞內(nèi)段無(wú)死亡結(jié)構(gòu)域，但可通過(guò)TNF受體相關(guān)因子2(TNF receptor-asso-ciated factor 2,TRAF2)介導(dǎo)細(xì)胞凋亡與NF-κB的激活。TNFR2與TNF-α的親合力較高，即使較低的濃度也可以與TNF-α結(jié)合[9]。

TNFR與炎癥反應(yīng)關(guān)系密切，其基因的改變也將從TNFR表達(dá)水平或功能上影響炎癥反應(yīng)強(qiáng)度。已知TNFRSF1A基因與TNFRSF1B基因均存在多個(gè)基因多態(tài)性位點(diǎn)。有研究表明在伴有血液疾病的侵襲性肺曲霉病患者中，如攜帶TNFRSF1A+36G或-609G等位基因則易于罹患侵襲性肺曲霉病[10]。Cipriano等[11]則發(fā)現(xiàn)在CAP患者中，攜帶TNFRSF1B+676TG基因型的患者比攜帶TT或GG基因型患者死亡率低。但Gordon等[12]的研究卻認(rèn)為T(mén)NFRSF1A-609G/T、+36A/G，TNFRSF1B+676T/G、+1663A/G基因多態(tài)性與膿毒癥的易感性、嚴(yán)重程度不相關(guān)。

TNFR基因的多態(tài)性是否影響炎癥反應(yīng)強(qiáng)度進(jìn)而影響肺炎的的嚴(yán)重性或機(jī)體對(duì)肺炎的易感性仍存爭(zhēng)論，探討TNFR基因多態(tài)性與肺炎的相關(guān)性，是更好地利用基因進(jìn)行疾病嚴(yán)重性與預(yù)后判斷的基礎(chǔ)。本研究通過(guò)PCR-RFLP及基因測(cè)序的方法檢測(cè)了66例成年肺炎患者與66例健康體檢者TNFR基因上多個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)的等位基因分布情況，并分析TNFR基因多態(tài)性與肺炎嚴(yán)重程度、肺炎易感性的相關(guān)性。

在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)TNFR1-609T等位基因在肺炎患者與重癥肺炎中的分布頻率較高，提示TNFR1-609T與肺炎的易感性、病情嚴(yán)重程度有關(guān)。目前已有研究證實(shí)TNFR1-609G/T多態(tài)性位點(diǎn)與侵襲性肺曲霉病有關(guān)，其機(jī)制是TNFR1-609位點(diǎn)G到T的變異將影響ICSBP等轉(zhuǎn)錄因子與TNFR基因的結(jié)合能力，進(jìn)而影響TNFR1的表達(dá)強(qiáng)度[10]。另有研究證實(shí)攜帶 TT 基因型患者的TNFR1 mRNA轉(zhuǎn)錄水平比攜帶GT、GG基因型高[13]。因此我們認(rèn)為攜帶TNFR1-609T等位基因的肺炎患者體內(nèi)表達(dá)更多的TNFR1，TNF-α的結(jié)合位點(diǎn)增多，炎癥信號(hào)相應(yīng)更易向細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)導(dǎo)，故此類(lèi)個(gè)體更易罹患肺炎，且當(dāng)此類(lèi)患者罹患肺炎后，體內(nèi)炎癥反應(yīng)強(qiáng)度也較劇烈，易進(jìn)展為重癥肺炎。

本研究還發(fā)現(xiàn)TNFR2 +1690C等位基因的分布頻率在肺炎患者與健康體檢者中的分布頻率無(wú)明顯差異，但在重癥肺炎患者中的分布頻率較高，提示TNFR2+1690C等位基因影響炎癥性疾病嚴(yán)重程度。而Puga等[14]的研究卻有不同結(jié)果，認(rèn)為T(mén)NFR2 +1690T/C多態(tài)性并不影響TNFR2的表達(dá)強(qiáng)度。我們已知膜蛋白的結(jié)構(gòu)將影響其下傳信號(hào)的強(qiáng)度，甚至不需結(jié)合配體即可啟動(dòng)下游的信號(hào)通路，因此我們推測(cè)編碼區(qū)中TNFR2 +1690T到C的變異通過(guò)影響TNFR的活性而使機(jī)體對(duì)TNF-α更“敏感”，從而加重炎癥性疾病的嚴(yán)重程度。此外，有研究認(rèn)為T(mén)NFR2 +1690T/C與TNFR mRNA的穩(wěn)定性有關(guān)，故攜帶TNFR2+1690C的肺炎患者炎癥反應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng)，這可能是導(dǎo)致病情加重、遷延的重要原因之一。

基因多態(tài)性伴隨機(jī)體的一生，不受機(jī)體生理與病理狀態(tài)影響。通過(guò)對(duì)穩(wěn)定的基因多態(tài)性進(jìn)行檢測(cè)以準(zhǔn)確評(píng)估機(jī)體對(duì)疾病的反應(yīng)性，而準(zhǔn)確地評(píng)估則建立在明確基因多態(tài)性與疾病相關(guān)性的基礎(chǔ)上。我們的研究發(fā)現(xiàn)攜帶TNFR1-609T等位基因的患者肺炎及重癥肺炎發(fā)病率高，攜帶TNFR2+1690C等位基因的肺炎患者易于發(fā)展為重癥肺炎，提示可通過(guò)對(duì)上述基因多態(tài)性的檢測(cè)判斷機(jī)體對(duì)肺炎易感性與嚴(yán)重程度進(jìn)行預(yù)測(cè)，以盡早干預(yù)，提高重癥病人救治成功率。

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RelationshipbetweenSNPofTNFRgeneandincidence/severityofpneumonia

LI Li1, ZHENG Shao-qiang2, YUAN Wei-feng1, HUANG Wen-jie1

(1DepartmentofRespiratoryMedicine,GuangzhouGeneralHospitalofGuangzhouMilitaryCommand,Guangzhou510010,China;2DepartmentofRespiratoryMedicine,theThirdAffiliatedHospitalofSouthernMedicalUniversity,Guangzhou510630,China.E-mail:huangyelu1029@vip.163.com)

AIM: To analyze the relationship between the single nucleotide polymorphism (SNP) of tumor necrosis factor receptor (TNFR) gene and the incidence and severity of pneumonia.METHODSTotal 132 Chinese individuals were enrolled in this study. There were 66 patients with pneumonia and 66 healthy subjects. The SNPs ofTNFRgene includingTNFR1+36A/G,TNFR1-609G/T,TNFR2+676T/G,TNFR2+1663T/G,TNFR2 +1668A/G andTNFR2 +1690C/T were genotyped by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism or gene sequencing for all subjects. Polymorphisms affecting pneumonia incidence and severity were calculated by SPSS.RESULTSThe frequencies ofTNFR1-609G and T alleles in pneumonia patients were 40.9% and 59.1%, while those in healthy subjects were 53.8% and 46.2%. The frequency ofTNFR1-609T in pneumonia patients was higher than that in healthy subjects (P<0.05). Besides, the frequencies ofTNFR1-609G and T alleles in severe pneumonia patients were 25.0% and 75.0%, while those were 46.0% and 54.0% in non-severe pneumonia patients. The frequencies ofTNFR2 +1690C and T alleles in severe pneumonia patients were 81.1% and 18.9%, while those were 61.0% and 39.0% in non-severe pneumonia patients. The frequencies ofTNFR1-609T andTNFR2 +1690C in severity pneumonia subjects were higher than those in mild subjects (P<0.05).CONCLUSIONIt appears thatTNFR1-609T is associated with high incidence of pneumonia.TNFR1-609T andTNFR2+1690C are the risk factors of severity in pneumonia in Chinese.

Receptors,tumor necrosis factor; Polymorphism,single nucleotide; Pneumonia

R363

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2013.04.021

1000- 4718(2013)04- 0695- 06

2012- 11- 16

2013- 02- 22

廣東省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.10151001002000005)

△通訊作者 Tel: 020-36653555; E-mail: huangyelu1029@vip.163.com