臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 井文倩 張寧波

山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院 李福昌

本文主要研究能量水平對(duì)妊娠期新西蘭兔血清生化指標(biāo)和生殖激素水平的影響，從內(nèi)分泌機(jī)制上探討能量與母兔繁殖關(guān)系的可能機(jī)理，為母兔飼養(yǎng)的營(yíng)養(yǎng)調(diào)控技術(shù)和營(yíng)養(yǎng)與繁殖關(guān)系的基礎(chǔ)研究提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)日糧 依據(jù)NRC（1977）兔飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制能量含量分別為 9.44、10.47、12.02 MJ/kg的試驗(yàn)日糧，日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。試驗(yàn)日糧全部加工成直徑4～6 mm的顆粒飼料。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與飼養(yǎng)管理 采用單因素有重復(fù)試驗(yàn)設(shè)計(jì)，選用體重接近、健康狀況良好、血緣相近、胎次和配種日期基本一致的經(jīng)產(chǎn)新西蘭兔，發(fā)情期前15 d開(kāi)始預(yù)飼，在發(fā)情期集中配種，淘汰空懷者，母兔按試驗(yàn)要求隨機(jī)分為3組，每組20只，每個(gè)重復(fù)1只。

試驗(yàn)前對(duì)兔舍、兔籠、料槽和水槽進(jìn)行清洗、消毒。試驗(yàn)期間人工喂料，不限量，自由飲水，自然光照，自然通風(fēng)，3～5 d消毒兔舍一次。嚴(yán)格執(zhí)行母兔妊娠期飼養(yǎng)管理要求，期間密切觀(guān)察母兔情況，做好試驗(yàn)記錄。

表1 試驗(yàn)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

1.3 血清樣品的收集和保存 在妊娠末期每組隨機(jī)選取8只試驗(yàn)兔，連續(xù)2 d早晨空腹耳靜脈采血10 mL，室溫避光靜置30 min后，3000 r/min離心10 min，分離所得血清并分裝于Eppendorf管中，-20℃冷凍保存待測(cè)。

1.4 指標(biāo)測(cè)定

1.4.1 血清常規(guī)指標(biāo)的測(cè)定 血清中胰島素（Ins）、膽固醇（CHO）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDLC）、低密度脂蛋白（LDLC）和極低密度脂蛋白（VLDLC）的測(cè)定采用日本和光提供的試劑盒，按說(shuō)明書(shū)操作，在日立7020型全自動(dòng)分析儀上進(jìn)行測(cè)定。

1.4.2 生殖激素水平的測(cè)定 血清中胰島素（Ins）、膽固醇（CHO）和促黃體生成激素（LH）、孕酮（P）、雌二醇（E2）、泌乳素（PRL）、促卵泡生成激素（FSH）的測(cè)定采用放射免疫法（RIA），試劑盒均由天津九鼎醫(yī)藥生物工程有限公司提供。低溫保存的血清樣品室溫下解凍，按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行前處理后測(cè)定，放射性強(qiáng)度計(jì)數(shù)使用γ計(jì)數(shù)器（DPM-96型）。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析 試驗(yàn)結(jié)果用 “平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，采用SAS（1985）GLM程序?qū)Ω黜?xiàng)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，差異顯著時(shí)用Duncan’s法對(duì)各組間平均數(shù)進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 日糧能量水平對(duì)妊娠母兔血清胰島素水平和膽固醇含量的影響 由表2可知，處理Ⅰ組血清Ins水平顯著低于處理Ⅱ、Ⅲ組（P＜0.05），而CHO含量顯著高于處理Ⅱ、Ⅲ組（P＜0.05）。處理Ⅱ和Ⅲ組間血清Ins水平和CHO含量均無(wú)顯著差異（P＞0.05）。其中，處理Ⅱ組和處理Ⅲ組血清Ins水平較處理Ⅰ組提高45.98%和50.02%；而血清CHO含量較處理Ⅰ組降低34.88%和39.53%。

表2 日糧能量水平對(duì)妊娠母兔血清胰島素水平和膽固醇含量的影響

2.2 日糧能量水平對(duì)妊娠母兔血脂四項(xiàng)的影響由表3可知，日糧能量水平對(duì)妊娠期母兔血脂四項(xiàng)無(wú)顯著影響（P＞0.05）。

表3 日糧能量水平對(duì)妊娠母兔血脂四項(xiàng)的影響 mmol/L

2.3 日糧能量水平對(duì)妊娠母兔生殖激素水平的影響 由表4可知，日糧能量水平顯著影響妊娠期母兔血液P、E2和LH水平（P＜0.05），對(duì)血液PRL和FSH水平無(wú)顯著影響（P＞0.05）。其中，處理Ⅱ、Ⅲ組血清P水平較處理Ⅰ組降低14.69%和38.85%；而處理Ⅱ組和處理Ⅲ組血清E2和LH含量較處理Ⅰ組分別提高54.74%、149.86%和71.19%、115.54%。處理Ⅱ組和處理Ⅲ組間血清P、E2和LH水平均無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

表4 日糧能量水平對(duì)妊娠母兔生殖激素水平的影響

血液P水平與日糧能量水平呈負(fù)相關(guān)，以能量狀水平為自變量，激素水平為因變量，回歸方程為：Y=-11.33X+69.353（n=6，R2=0.9779）。血液E2和LH水平與日糧能量水平均呈正相關(guān)，回歸方 程 分 別 為 ：Y=626.53X+153.34 （n=6，R2=0.9764）；Y=2.045X+1.6533（n=6，R2=0.9823）。

3 討論

日糧營(yíng)養(yǎng)是生殖細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育和合成生殖激素的物質(zhì)基礎(chǔ)，因此營(yíng)養(yǎng)供給是否充足直接影響生殖細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育和激素的合成與分泌，從而影響動(dòng)物的繁殖性能（唐臻欽，1993）。能量是制約大多數(shù)動(dòng)物生產(chǎn)性能的首要營(yíng)養(yǎng)因素，可通過(guò)作用于機(jī)體的代謝過(guò)程來(lái)影響母畜的繁殖效率。

胰島素是調(diào)節(jié)糖、脂肪和蛋白質(zhì)代謝的重要激素，使血糖維持穩(wěn)定狀態(tài)。胰島素濃度受能量狀況影響較大，是反映體內(nèi)能量狀況的一種激素（張拴林等，2007）。本試驗(yàn)中，妊娠肉兔血清胰島素含量隨日糧能量水平的升高而增加，但中、高能量組間無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

膽固醇是構(gòu)成細(xì)胞膜的重要成分，也是合成膽汁、維生素D和激素的原料，可在一定程度上反映體內(nèi)脂肪代謝狀況。研究表明，家兔血清膽固醇含量易受飼糧營(yíng)養(yǎng)水平的影響 （黃錫全等，2001）。本試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧能量水平顯著影響了妊娠肉兔血清膽固醇含量。這與麻名文等（2012）對(duì)妊娠獺兔的研究結(jié)果相一致。

血清甘油三酯也是反映機(jī)體脂代謝的一個(gè)指標(biāo)。脂肪組織的發(fā)育和體脂的沉積主要取決于血漿甘油三酯水平。目前妊娠導(dǎo)致甘油三酯和脂蛋白變化的原因尚有爭(zhēng)議，多數(shù)研究認(rèn)為妊娠后體內(nèi)多種激素水平的改變，明顯影響著血脂及脂蛋白的代謝（周琴，2005）。但在本試驗(yàn)中，血清脂肪代謝指標(biāo)組間差異均不顯著。這與麻名文等（2012）在妊娠獺兔上的研究結(jié)果一致。周東勝（2009）在后備母豬的研究中也指出日糧能量水平對(duì)后備母豬血液中代謝產(chǎn)物無(wú)顯著影響，認(rèn)為動(dòng)物機(jī)體具有維持血液中代謝產(chǎn)物處于生理水平范圍的能力，當(dāng)血液中能量代謝產(chǎn)物超出生理水平時(shí)便轉(zhuǎn)化為脂肪或糖原儲(chǔ)存。

血清 LH、P、E2、PRL和 FSH水平基本可以反映出動(dòng)物體內(nèi)的生殖激素情況，進(jìn)而反映了其繁殖能力的高低。本試驗(yàn)表明，日糧能量水平對(duì)妊娠肉兔血清P、E2和LH水平影響顯著，其中P水平與能量水平呈負(fù)相關(guān)，而E2和LH水平與能量水平呈正相關(guān)。日糧能量水平對(duì)妊娠肉兔血清PRL和FSH水平無(wú)顯著影響，這與麻名文等（2012）對(duì)妊娠獺兔的研究結(jié)果不同。

在關(guān)于多浪羊的研究中，提高日糧能量水平會(huì)使血清中E2含量降低，P含量與FSH水平提高，但是LH水平并未提升（景煒，2010）。王玉琴（2007）研究表明，妊娠綿羊E2水平與日糧能量水平呈負(fù)相關(guān)。張拴林等（2006）試驗(yàn)結(jié)果表明，高能量水平下，綿羊血清P水平顯著高于中、低能量水平。周東勝等（2009）研究得出提高日糧能量水平可促進(jìn)后備母豬血液中LH的分泌的結(jié)論。鄭家三等（2011）試驗(yàn)證明奶牛血漿 LH、FSH、E2水平隨日糧能量攝入增加而升高。

上述結(jié)論不盡相同的可能原因有：一方面畜禽的血液激素含量會(huì)受到日糧營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)水平和來(lái)源、動(dòng)物狀況、試驗(yàn)期、采樣時(shí)間等因素的影響；另一方面，針對(duì)能量和血清生殖激素含量關(guān)聯(lián)的復(fù)雜性，更需要深入開(kāi)展相關(guān)研究。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧能量水平在9.44～12.07 MJ/kg，能量水平對(duì)妊娠母兔血清胰島素水平和膽固醇含量影響顯著；妊娠母兔血清P含量與日糧能量水平呈負(fù)相關(guān)，血清E2和LH水平與日糧能量水平均呈正相關(guān)。

[1]黃錫全，吳志勇，孫惠華，等.L.SP.HXQ001菌對(duì)家兔血清膽固醇的影響[J].中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志，2001，2：55 ～ 56.

[2]景煒.日糧不同能量和蛋白水平對(duì)多浪羊母羊繁殖性能、血清生化指標(biāo)及生殖激素的影響：[碩士學(xué)位論文][D].烏魯木齊：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)，2010.

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