臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 井文倩 張寧波
山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院 李福昌
本文主要研究能量水平對(duì)妊娠期新西蘭兔血清生化指標(biāo)和生殖激素水平的影響,從內(nèi)分泌機(jī)制上探討能量與母兔繁殖關(guān)系的可能機(jī)理,為母兔飼養(yǎng)的營(yíng)養(yǎng)調(diào)控技術(shù)和營(yíng)養(yǎng)與繁殖關(guān)系的基礎(chǔ)研究提供理論參考。
1.1 試驗(yàn)日糧 依據(jù)NRC(1977)兔飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制能量含量分別為 9.44、10.47、12.02 MJ/kg的試驗(yàn)日糧,日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。試驗(yàn)日糧全部加工成直徑4~6 mm的顆粒飼料。
1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與飼養(yǎng)管理 采用單因素有重復(fù)試驗(yàn)設(shè)計(jì),選用體重接近、健康狀況良好、血緣相近、胎次和配種日期基本一致的經(jīng)產(chǎn)新西蘭兔,發(fā)情期前15 d開(kāi)始預(yù)飼,在發(fā)情期集中配種,淘汰空懷者,母兔按試驗(yàn)要求隨機(jī)分為3組,每組20只,每個(gè)重復(fù)1只。
試驗(yàn)前對(duì)兔舍、兔籠、料槽和水槽進(jìn)行清洗、消毒。試驗(yàn)期間人工喂料,不限量,自由飲水,自然光照,自然通風(fēng),3~5 d消毒兔舍一次。嚴(yán)格執(zhí)行母兔妊娠期飼養(yǎng)管理要求,期間密切觀(guān)察母兔情況,做好試驗(yàn)記錄。
表1 試驗(yàn)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平
1.3 血清樣品的收集和保存 在妊娠末期每組隨機(jī)選取8只試驗(yàn)兔,連續(xù)2 d早晨空腹耳靜脈采血10 mL,室溫避光靜置30 min后,3000 r/min離心10 min,分離所得血清并分裝于Eppendorf管中,-20℃冷凍保存待測(cè)。
1.4 指標(biāo)測(cè)定
1.4.1 血清常規(guī)指標(biāo)的測(cè)定 血清中胰島素(Ins)、膽固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDLC)、低密度脂蛋白(LDLC)和極低密度脂蛋白(VLDLC)的測(cè)定采用日本和光提供的試劑盒,按說(shuō)明書(shū)操作,在日立7020型全自動(dòng)分析儀上進(jìn)行測(cè)定。
1.4.2 生殖激素水平的測(cè)定 血清中胰島素(Ins)、膽固醇(CHO)和促黃體生成激素(LH)、孕酮(P)、雌二醇(E2)、泌乳素(PRL)、促卵泡生成激素(FSH)的測(cè)定采用放射免疫法(RIA),試劑盒均由天津九鼎醫(yī)藥生物工程有限公司提供。低溫保存的血清樣品室溫下解凍,按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行前處理后測(cè)定,放射性強(qiáng)度計(jì)數(shù)使用γ計(jì)數(shù)器(DPM-96型)。
1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析 試驗(yàn)結(jié)果用 “平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示,采用SAS(1985)GLM程序?qū)Ω黜?xiàng)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析,差異顯著時(shí)用Duncan’s法對(duì)各組間平均數(shù)進(jìn)行多重比較。
2.1 日糧能量水平對(duì)妊娠母兔血清胰島素水平和膽固醇含量的影響 由表2可知,處理Ⅰ組血清Ins水平顯著低于處理Ⅱ、Ⅲ組(P<0.05),而CHO含量顯著高于處理Ⅱ、Ⅲ組(P<0.05)。處理Ⅱ和Ⅲ組間血清Ins水平和CHO含量均無(wú)顯著差異(P>0.05)。其中,處理Ⅱ組和處理Ⅲ組血清Ins水平較處理Ⅰ組提高45.98%和50.02%;而血清CHO含量較處理Ⅰ組降低34.88%和39.53%。
表2 日糧能量水平對(duì)妊娠母兔血清胰島素水平和膽固醇含量的影響
2.2 日糧能量水平對(duì)妊娠母兔血脂四項(xiàng)的影響由表3可知,日糧能量水平對(duì)妊娠期母兔血脂四項(xiàng)無(wú)顯著影響(P>0.05)。
表3 日糧能量水平對(duì)妊娠母兔血脂四項(xiàng)的影響 mmol/L
2.3 日糧能量水平對(duì)妊娠母兔生殖激素水平的影響 由表4可知,日糧能量水平顯著影響妊娠期母兔血液P、E2和LH水平(P<0.05),對(duì)血液PRL和FSH水平無(wú)顯著影響(P>0.05)。其中,處理Ⅱ、Ⅲ組血清P水平較處理Ⅰ組降低14.69%和38.85%;而處理Ⅱ組和處理Ⅲ組血清E2和LH含量較處理Ⅰ組分別提高54.74%、149.86%和71.19%、115.54%。處理Ⅱ組和處理Ⅲ組間血清P、E2和LH水平均無(wú)顯著差異(P>0.05)。
表4 日糧能量水平對(duì)妊娠母兔生殖激素水平的影響
血液P水平與日糧能量水平呈負(fù)相關(guān),以能量狀水平為自變量,激素水平為因變量,回歸方程為:Y=-11.33X+69.353(n=6,R2=0.9779)。血液E2和LH水平與日糧能量水平均呈正相關(guān),回歸方 程 分 別 為 :Y=626.53X+153.34 (n=6,R2=0.9764);Y=2.045X+1.6533(n=6,R2=0.9823)。
日糧營(yíng)養(yǎng)是生殖細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育和合成生殖激素的物質(zhì)基礎(chǔ),因此營(yíng)養(yǎng)供給是否充足直接影響生殖細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育和激素的合成與分泌,從而影響動(dòng)物的繁殖性能(唐臻欽,1993)。能量是制約大多數(shù)動(dòng)物生產(chǎn)性能的首要營(yíng)養(yǎng)因素,可通過(guò)作用于機(jī)體的代謝過(guò)程來(lái)影響母畜的繁殖效率。
胰島素是調(diào)節(jié)糖、脂肪和蛋白質(zhì)代謝的重要激素,使血糖維持穩(wěn)定狀態(tài)。胰島素濃度受能量狀況影響較大,是反映體內(nèi)能量狀況的一種激素(張拴林等,2007)。本試驗(yàn)中,妊娠肉兔血清胰島素含量隨日糧能量水平的升高而增加,但中、高能量組間無(wú)顯著差異(P>0.05)。
膽固醇是構(gòu)成細(xì)胞膜的重要成分,也是合成膽汁、維生素D和激素的原料,可在一定程度上反映體內(nèi)脂肪代謝狀況。研究表明,家兔血清膽固醇含量易受飼糧營(yíng)養(yǎng)水平的影響 (黃錫全等,2001)。本試驗(yàn)結(jié)果表明,日糧能量水平顯著影響了妊娠肉兔血清膽固醇含量。這與麻名文等(2012)對(duì)妊娠獺兔的研究結(jié)果相一致。
血清甘油三酯也是反映機(jī)體脂代謝的一個(gè)指標(biāo)。脂肪組織的發(fā)育和體脂的沉積主要取決于血漿甘油三酯水平。目前妊娠導(dǎo)致甘油三酯和脂蛋白變化的原因尚有爭(zhēng)議,多數(shù)研究認(rèn)為妊娠后體內(nèi)多種激素水平的改變,明顯影響著血脂及脂蛋白的代謝(周琴,2005)。但在本試驗(yàn)中,血清脂肪代謝指標(biāo)組間差異均不顯著。這與麻名文等(2012)在妊娠獺兔上的研究結(jié)果一致。周東勝(2009)在后備母豬的研究中也指出日糧能量水平對(duì)后備母豬血液中代謝產(chǎn)物無(wú)顯著影響,認(rèn)為動(dòng)物機(jī)體具有維持血液中代謝產(chǎn)物處于生理水平范圍的能力,當(dāng)血液中能量代謝產(chǎn)物超出生理水平時(shí)便轉(zhuǎn)化為脂肪或糖原儲(chǔ)存。
血清 LH、P、E2、PRL和 FSH水平基本可以反映出動(dòng)物體內(nèi)的生殖激素情況,進(jìn)而反映了其繁殖能力的高低。本試驗(yàn)表明,日糧能量水平對(duì)妊娠肉兔血清P、E2和LH水平影響顯著,其中P水平與能量水平呈負(fù)相關(guān),而E2和LH水平與能量水平呈正相關(guān)。日糧能量水平對(duì)妊娠肉兔血清PRL和FSH水平無(wú)顯著影響,這與麻名文等(2012)對(duì)妊娠獺兔的研究結(jié)果不同。
在關(guān)于多浪羊的研究中,提高日糧能量水平會(huì)使血清中E2含量降低,P含量與FSH水平提高,但是LH水平并未提升(景煒,2010)。王玉琴(2007)研究表明,妊娠綿羊E2水平與日糧能量水平呈負(fù)相關(guān)。張拴林等(2006)試驗(yàn)結(jié)果表明,高能量水平下,綿羊血清P水平顯著高于中、低能量水平。周東勝等(2009)研究得出提高日糧能量水平可促進(jìn)后備母豬血液中LH的分泌的結(jié)論。鄭家三等(2011)試驗(yàn)證明奶牛血漿 LH、FSH、E2水平隨日糧能量攝入增加而升高。
上述結(jié)論不盡相同的可能原因有:一方面畜禽的血液激素含量會(huì)受到日糧營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)水平和來(lái)源、動(dòng)物狀況、試驗(yàn)期、采樣時(shí)間等因素的影響;另一方面,針對(duì)能量和血清生殖激素含量關(guān)聯(lián)的復(fù)雜性,更需要深入開(kāi)展相關(guān)研究。
本試驗(yàn)結(jié)果表明,日糧能量水平在9.44~12.07 MJ/kg,能量水平對(duì)妊娠母兔血清胰島素水平和膽固醇含量影響顯著;妊娠母兔血清P含量與日糧能量水平呈負(fù)相關(guān),血清E2和LH水平與日糧能量水平均呈正相關(guān)。
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