北京市東城區(qū)藥品檢驗(yàn)所（100027）尤立華 葉萌 趙希賢 聶然

三黃片是常用中藥，具有清熱解毒，瀉火通便的功效，用于三焦熱盛，目赤腫痛，口鼻生瘡，咽喉腫痛，牙齦出血，心煩口渴，尿赤便秘；急性胃腸炎，痢疾等[1]。三黃片由東漢張仲景《金匱要略》瀉心湯方劑得來，由大黃、黃芩、黃連3味藥組成；后處方改為由大黃、鹽酸小糪堿和黃芩浸膏組成，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高后收載在《中國(guó)藥典》2010年版一部?！吨袊?guó)藥典》2010年版規(guī)定，對(duì)大黃素、大黃酚，鹽酸小糪堿、黃芩苷等多種有效成分進(jìn)行含量測(cè)定，以此作為三黃片的質(zhì)量控制指標(biāo)，較好地控制了三黃片的質(zhì)量。三黃片生產(chǎn)廠家眾多，實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，不同廠家生產(chǎn)的三黃片有效成分的含量存在一定差異，我所采用藥典方法進(jìn)行含量測(cè)定，對(duì)不同廠家7個(gè)批次的三黃片有效成分的含量進(jìn)行比較，評(píng)價(jià)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)藥品質(zhì)量保證的合理性和有效性。

1 儀器與試藥

島津LC2010液相色譜儀；大黃素對(duì)照品（批號(hào)：110736-201035，由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供）；大黃酚對(duì)照品（批號(hào)：110736-201035，由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供）；鹽酸小糪堿對(duì)照品（批號(hào)：110736-201035，由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供）；黃芩苷對(duì)照品（批號(hào)：110736-201035，由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供）；7個(gè)樣品分別為山東A廠（批號(hào)：120101；120302）、河北B廠（批號(hào)：D15051；D95033）和邯鄲C廠（批號(hào)：111172；111210；111138）提供；試劑為分析純；甲醇、乙腈為色譜純。

2 方法

2.1 色譜條件

2.1.1 大黃素、大黃酚 色譜柱：WAT045905 C18（150mm×4.6mm，5μm）；柱溫：30℃；流速：1.0 mL/min；以甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm。

2.1.2 鹽酸小糪堿 色譜柱：WAT045905 C18（150mm×4.6mm，5μm）；柱溫：3 0 ℃；流速：1.0 L/m i n；以乙腈-水（1∶1，每1000mL中加入磷酸二氫鉀3.4g和十二烷基硫酸鈉1.7g）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)：265nm。

2.1.3 黃芩苷 色譜柱：WAT045905 C18（150mm×4.6mm，5μm）；柱溫：30℃；流速：1.0mL/min；以甲醇-0.1%磷酸溶液（40∶60）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm。

2.2 對(duì)照品溶液制備

2.2.1 取大黃素和大黃酚對(duì)照品適量，精密稱定，加無水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）的混合溶液制成每1mL含大黃素10μg、大黃酚25μg的混合溶液，即得。

2.2.2 取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液即得。

2.2.3 取黃芩苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含25μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液制備

附表1 7個(gè)不同廠家三黃片樣品的測(cè)定結(jié)果

附表2 邯鄲C廠數(shù)據(jù)分析

2.3.1 大黃素、大黃酚含量 取本品20片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)（過三號(hào)篩），取約0.26g精密稱定，置錐形瓶中，精密加入乙醇25mL，稱定重量，加熱回流1h，放冷，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10mL，置燒瓶中，蒸干，加30%乙醇-鹽酸（10∶1）的混合溶液15mL，置水浴中加熱回流1h，立即冷卻，用三氯甲烷強(qiáng)力振搖提取4次，每次15mL，合并三氯甲烷液，蒸干，殘?jiān)脽o水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）的混合溶解，轉(zhuǎn)移至25mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3.2 鹽酸小糪堿含量 取本品10片，除去包衣，稱定重量，研細(xì)，取約0.1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇—鹽酸（500∶1）的混合溶液20mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率160W，頻率40kHz）30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，取續(xù)濾液，即得。

2.3.3 黃芩苷含量 取本品10片，除去包衣，稱定重量，研細(xì)，取約0.1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇—鹽酸（500∶1）的混合溶液20mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率160W，頻率40kHz）30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，取續(xù)濾液，即得。

2.4 樣品的測(cè)定 取7個(gè)不同廠家的三黃片，按2.3制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液各10μL，按2.1色譜條件，分別測(cè)定7個(gè)樣品中的大黃素、大黃酚，鹽酸小糪堿、黃芩苷，以外標(biāo)法計(jì)算含量，見附表1。

3 討論

3.1 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定每片含大黃以大黃素和大黃酚的總量計(jì)，不得少于1.55mg；含鹽酸小檗堿應(yīng)為4.0～5.8mg，黃芩浸膏以黃芩苷計(jì)，不得少于13.5mg。以上7個(gè)批次各成分含量測(cè)定結(jié)果均符合規(guī)定。其中鹽酸小檗堿的含量有上限，含量控制在一定的范圍，而大黃素和大黃酚的總量、黃芩苷的含量只有下限，沒有上限，表明質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)于以單一化學(xué)成分作為原料的處方中的成分控制嚴(yán)格。

3.2 比較不同有效成分含量測(cè)定的結(jié)果，從三個(gè)廠家的測(cè)定結(jié)果數(shù)據(jù)中，分析各有效成分批次間差異的多少，表明各有效成分在工藝控制過程中存在差異。以邯鄲 C廠為例，比較三個(gè)批次各成分含量結(jié)果的相對(duì)偏差，數(shù)據(jù)分析見附表2。其中三批次的大黃素與大黃酚總量的相對(duì)偏差最高，鹽酸小檗堿含量的相對(duì)偏差最低，表明鹽酸小檗堿的含量在有效成分的控制中，批次間重現(xiàn)性較好，說明其工藝控制的程度較高，而大黃素和大黃酚含量測(cè)定結(jié)果的重現(xiàn)性不如鹽酸小檗堿和黃芩苷，表明其工藝控制的程度較低，其結(jié)果與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的設(shè)計(jì)思路及要求相符，證實(shí)了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)于原處方改進(jìn)的必要性及制定的含量測(cè)定限度的合理性。

3.3 比較各廠家有效成分的含量測(cè)定結(jié)果，三廠家各成分間存在明顯的差異。分析原因應(yīng)主要?dú)w于原料的選取，生產(chǎn)工藝的控制兩方面。同一種藥材，產(chǎn)地不同[2][3]，儲(chǔ)存條件不同導(dǎo)致藥材含量的差異[4]；生產(chǎn)工藝控制點(diǎn)及控制量的差異，也會(huì)造成有效成分的含量的不同，因此，廠家應(yīng)嚴(yán)格把關(guān)原料尤其是原藥材的質(zhì)量，嚴(yán)格按照工藝規(guī)定操作控制，確保產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定可控，以保證藥品的臨床療效和安全。