首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京兒童醫(yī)院（100045）沙燕

呼吸道感染分為上呼吸道感染和下呼吸道感染，上呼吸道感染90%左右由病毒引起，細(xì)菌感染常繼發(fā)于病毒感染之后。細(xì)菌性病原體感染會(huì)引起下呼吸道感染。作為兒科的常見病、多發(fā)病，呼吸道感染是引起世界范圍內(nèi)5歲以下兒童死亡的首位原因，其臨床表現(xiàn)易被認(rèn)識(shí)，但引起呼吸道感染的病因卻很難明確，給臨床診斷、疾病的治療和防控帶來很大困難。及時(shí)、準(zhǔn)確的鑒別診斷、快速識(shí)別病原體，對(duì)預(yù)防策略的制定、臨床診斷、治療起重要作用。為此，本文選取2012年9月～2013年4月期間1377份經(jīng)間接免疫熒光法IgM抗體檢測(cè)為陽性的患兒血清進(jìn)行分析。

附表 2012年9月～2013年4月對(duì)5種病原體調(diào)查的檢出情況

1 材料來源與采集方法

1.1 材料與方法 選取北京兒童醫(yī)院2012年9月～2013年4月病房送檢的1377例患兒血清樣本，年齡在7天～16歲之間，伴有咳嗽、咽痛、流鼻涕或不明原因發(fā)熱等癥狀。專業(yè)人員無菌靜脈穿刺采集血液，血清樣本采集后如不在8h內(nèi)檢測(cè)則應(yīng)2～8℃冷藏。免疫熒光顯微鏡。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 原理 間接免疫熒光法（IFA）是基于待測(cè)樣本中的抗體與吸附在載玻片上的抗原發(fā)生反應(yīng)。樣本中存在的特異性抗體和抗原反應(yīng)，未與抗原結(jié)合的免疫球蛋白在洗滌步驟中除去，之后，抗原—抗體復(fù)合物與熒光素標(biāo)記的抗人球蛋白反應(yīng)。用免疫熒光顯微鏡觀察結(jié)果。

1.2.2 方法 ①將無菌靜脈穿刺采集到的血液3000rpm離心5min后取血清1∶1稀釋。②稀釋后的血清與羊抗人IgG吸附劑混勻，10000rpm離心10min去除沉淀，以防干擾檢測(cè)。③在試劑孔內(nèi)加入吸附劑處理后的血清，放入濕盒孵育90min。④洗滌后自然晾干加入羊抗人IgM FITC結(jié)合物孵育30min。⑤洗滌后加入封閉介質(zhì)蓋上蓋玻片，熒光顯微鏡400倍放大率下觀察結(jié)果。

1.2.3 結(jié)果觀察 顯微鏡下觀察，陰性細(xì)胞為紅色，陽性細(xì)胞為胞膜明亮的蘋果綠熒光。

2 結(jié)果

2.1 標(biāo)本陽性情況 1377份檢測(cè)標(biāo)本中，檢出577份陽性標(biāo)本，因?yàn)闄z測(cè)出的陽性標(biāo)本中有混合感染標(biāo)本，所以共檢出陽性標(biāo)本466份，檢出率為33.84%，其中肺炎支原體檢出率最高，陽性率為23.17%，乙型流感病毒其次，為 9.80%，腺病毒3.05%、呼吸道合胞病毒0.65%、副流感病毒為5.23%。

2.2 病毒檢出情況 2012年9月～2013年4月期間，5種檢測(cè)病原體中肺炎支原體的檢出率最高，平均檢出率為24.72%，從10月份開始升高，在2013年2月達(dá)到一個(gè)峰值；肺炎支原體、腺病毒和乙型流感病毒在2013年2月份檢出率最高，分別為33.83%、7.52%、19.00%；呼吸道合胞病毒在9月份檢出率最高為2.19%；副流感病毒在9月份檢出率最高15.33%。

3 討論

急性上呼吸道感染可由多種病原體引起，包括細(xì)菌、病毒、支原體、衣原體等，以病毒感染為主。檢測(cè)病毒感染常見方法有病毒培養(yǎng)、免疫熒光、血清學(xué)診斷及分子生物學(xué)方法[1]。由于病毒培養(yǎng)需較長時(shí)間，無法滿足快速診斷的需要，PCR實(shí)驗(yàn)復(fù)雜要求條件較高，血清學(xué)實(shí)驗(yàn)敏感度、特異度較差，因此特異性好、靈敏度高、操作簡便、快速的間接免疫熒光法（IFA）逐步被廣泛接受。

樣本檢測(cè)均為北京兒童醫(yī)院采集，結(jié)果表明在呼吸道疾病流行季節(jié)中，北京地區(qū)急性上呼吸道感染患兒病原體除肺炎支原體為主要感染外，乙型流感病毒、腺病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒感染率在秋冬季節(jié)有所上升[2][3]。這種流行趨勢(shì)是否為北京地區(qū)流行特點(diǎn)尚需進(jìn)一步考證。1377份標(biāo)本中檢出陽性標(biāo)本577份，其中111份有兩種以上感染。由此看出兒童急性上呼吸道感染中存在多種混合感染。急性呼吸道感染是導(dǎo)致發(fā)展中國家兒童患病及死亡的常見疾病，研究認(rèn)為其致病原80%為流感病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒等各種病毒。由于病毒易變異，個(gè)別病毒容易引起爆發(fā)流行，且病情兇險(xiǎn)病死率高，給臨床診斷和治療及疾病的防控帶來很大困難。

本文通過小兒易感的5種呼吸道病原體的調(diào)查統(tǒng)計(jì)了解現(xiàn)階段兒童呼吸道感染病原體的種類和分布情況，及時(shí)、準(zhǔn)確的鑒別診斷，快速識(shí)別病原體，對(duì)預(yù)防策略制定、臨床診斷、治療起到至關(guān)重要的作用。