吳麗霞，梁翠霞，廖樂樂，吳鐵松

(1.深圳市龍華新區(qū)觀瀾人民醫(yī)院藥劑科;2.深圳流花醫(yī)院藥劑科，廣東深圳 518002)

三七 (Radix Notoginsen)又名田七，屬古熱帶殘遺植物，是我國珍貴的特產(chǎn)中藥，主產(chǎn)于云南、廣西等地。三七入藥歷史悠久，具有散瘀止血、消腫定痛之功效。三七中總皂苷是三七主要藥理活性成分［1］，現(xiàn)代醫(yī)藥研究表明三七總皂苷具有調(diào)血脂、降壓、增加心腦血流量、抗肝纖維化、保護心肌、抗心律失常、抗休克、抗血栓、改善微循環(huán)等多方面的藥理活性。加壓提取是一項新的提取技術，近年應用于中藥領域。在中藥有效成分的提取過程中，施加一定的壓力，可使溶劑在高于沸點時仍保持液體狀態(tài)，改善溶劑的溶解性，同時，使藥材的細胞壁破裂增多，有效成分的溶出速率加快，藥材有效成分的提取率明顯增加［2］。許多研究結(jié)果表明［3－4］，加壓提取技術適用用于大部分中藥材，是具有廣泛發(fā)展前途的中藥有效成分提取新工藝。本文采用香草醛－高氯酸比色法測定三七總皂苷含量，以三七總皂苷得率為指標設計正交試驗，確定其加壓提取法的最佳工藝參數(shù)。

1 材料與儀器

1.1 藥材 三七塊根，購自廣州市醫(yī)藥公司。

1.2 試劑 三七皂苷Rg1標準品由中國藥品生物制品檢定所提供，批號:1246－9705;香草醛、冰醋酸、高氯酸、乙醇、甲醇等均為分析純。

1.3 儀器 電子天平 (賽多利斯，型號:KY－GSA124S);紫外可見分光光度計 (北京普析通用，型號:TU－1800);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 (上海亞榮，型號:RE－3000);高速離心機(江蘇省金壇市環(huán)宇科學儀器廠，型號:YXJ－2);數(shù)控超聲波清洗器 (昆山市超聲儀器有限公司，型號:KQ－2200DB);高壓磁力攪拌反應釜 (煙臺科立化工設備有限公司，型號:PCF－1)。

2 方法與結(jié)果

2.1 三七總皂苷測定

2.1.1 對照品溶液的制備 精密稱取2.48 mg對照品三七皂苷Rg1，倒入25 mL量瓶中，加甲醇液至刻度，充分溶解即得對照品溶液 (每mL含對照品三七皂苷0.099 2 mg)。

2.1.2 供試品溶液的制備 精密稱取24.8 mg精制三七總皂苷樣品，倒入25 mL容量瓶中，加甲醇液至刻度，充分溶解即得即得供試品溶液 (每mL含樣品0.992 mg)。

2.1.3 檢測波長的確定 吸取標準液，按2.1.4項方法顯色，以紫外分光光度計掃描 (800 nm～200 nm)，最大吸收波長 (即檢測波長)為560 nm。

2.1.4 標準曲線的制備 分別精密吸取對照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL，倒入10 mL試管，揮干溶劑后加入0.2 mL 5%香草醛—冰醋酸溶液。取0.8 mL高氯酸水浴加熱 (水浴溫度60℃)，20 min后立即取出放入冷水中冷卻，加入5.0 mL冰醋酸，搖勻。相應試劑隨行空白對照，波長560 nm處測定吸收度A，以三七皂苷Rg1含量(mg)為橫坐標，吸收度為縱坐標，求回歸方程為:Y=5.270X+0.0511，r=0.999 5。結(jié)果表明三七皂苷Rg1在0.024 25～0.121 25 mg之間有良好線性關系。

2.2.1 回流法 稱取三七干燥粗粉20 g，加50%乙醇 (料液比1∶10)回流提取，共2次，1小時/次，合并2次濾液，濃縮，定容至500 mL備用。

2.2.2 滲漉法 稱取三七干燥粗粉20 g，加50%的乙醇(料液比1∶10)潤濕1 h后裝柱，繼續(xù)浸泡12 h后調(diào)整濾速為10 mL/min過濾，濃縮濾液，定容至500 mL備用。

2.2.3 超聲波提取法 稱取三七干燥粗粉20 g，加50%乙醇 (料液比1∶10)超聲提取，共2次，30分鐘/次，合并濾液，濃縮，定容至500 mL備用。

2.2.4 加壓提取法 稱取三七干燥粗粉20 g，置加壓提取器中，加50%乙醇 (料液比1∶10)，于60℃、4.5 kg/cm2壓力下密封加壓浸提1 h，濃縮，定容至500 mL備用。

4種提取法提取的三七總皂苷含量分別為:醇回流法7.45%、滲濾法7.89%、超聲波提取法7.92%、加壓提取法8.02%。加壓提取法所得含量最高，醇回流法最低。滲漉法和超聲波提取法所得含量與加壓提取法相當，但滲漉法周期長，消耗溶劑多，超聲波法不宜用于工業(yè)化生產(chǎn)，經(jīng)綜合比較后，確定加壓提取法作為三七總皂苷提取法。

2.3 正交試驗 根據(jù)預試驗，固定壓力為4.5 kg/cm2，粒徑為40目，選取乙醇濃度 (A)、固液比 (B)、提取時間(C)、提取溫度 (D)為影響因素，每個因素設定3個水平，以三七總皂苷提取得率為指標，按照L9(34)正交表進行試驗，因素、水平見表1。

表1 L9(34)正交因素水平表

極差分析結(jié)果顯示，影響三七總皂苷提取率的主次因素依次是D提取溫度、B料液比、C提取時間、A乙醇濃度，最佳組合為A2B2C3D2，即最佳提取條件為:提取液為70%乙醇，料液比為1∶10，提取時間為60 min，溫度為60℃。見表2。

2.4 驗證實驗 按優(yōu)選方案安排實驗，驗證3批，三七總皂苷的提取率分別為9.14%、9.07%、9.18%，均高于正交試驗的提取率。

表2 L9(34)提取工藝條件正交試驗結(jié)果

3 討 論

皂苷是極性較強的含糖基化合物，易溶于極性溶劑，化學性質(zhì)不穩(wěn)定，在酶、酸性條件下易水解。目前，提取三七中皂苷成分的方法有水煎煮法、醇回流法、大孔吸附樹脂法、微波提取法、超聲提取法、超臨界萃取等［5］。上述方法雖然技術較為成熟，但存在一定的缺點:水煎煮法、醇回流法存在流程長、提取率低的缺點，而且有機溶劑用量大，后處理困難，污染環(huán)境;超聲、微波提取法雖省時省力，但目前處于實驗室研究階段，不適宜較大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)。

加壓提取一項新興的提取技術，具有提取時間短、溶劑消耗少、提取效率高等優(yōu)點，已廣泛應用于中藥材提取、藥物分析、食品、環(huán)境等領域。本研究以不同提取方法提取三七總皂苷，結(jié)果加壓提取法提取的三七總皂苷含量最高，經(jīng)過綜合比較分析后，確定高壓提取法提取三七總皂苷優(yōu)于滲濾法、醇回流法、超聲波提取法。正交實驗結(jié)果表明，三七總皂苷高壓高壓提取的最佳工藝為:浸提壓力為4.5 kg/cm2，粒徑為40目，提取液為70%乙醇，料液比為1∶10，提取時間為60 min，溫度為60℃。

香草醛—高氯酸比色法，測定三七總皂苷含量，方法簡便，污染少，但該法顯色受溫度、時間等環(huán)境因素影響較大［6］。測定時，應注意控制加熱溫度和加熱時間。當溫度高于60℃長時間加熱，糖類吸收干擾顯著。總皂苷測定以60℃加熱15 min為宜。三七總皂苷顯色在1 h內(nèi)穩(wěn)定，故顯色后需在1 h內(nèi)測定。

［1］甘雨，徐惠波，孫曉波.三七總皂苷的藥理作用研究進展［J］.時珍國醫(yī)國藥，2007，18(5):1251－1252.

［2］李鵬，李紹平，付超美，等.加壓溶劑提取技術在中藥質(zhì)量控制中的應用 ［J］.中國中藥雜志，2004，29(8):723－726.

［3］Anekpankul T，Goto M，Sasaki M.Extraction ofanti－cancer damnacanthal from roots of Morinda citrifolia by subcritical water［J］.Separation and Purification Technology，2007，55:343－349.

［4］楊薇薇，張永忠，李成剛，等.加壓提取紅三葉草總異黃酮的研究 ［J］.中草藥，2009，40(9):1406－1407.

［5］黃鳳，向飛軍，伍杰雄.三七葉皂苷成分及其單體提取分離研究進展 ［J］.中藥材，2009，32(6):999－1005.

［6］謝茵，邢桂琴，劉秀芬.三七提取液中三七總皂苷的分離純化工藝研究［J］.山西醫(yī)科大學學報，2006，37(6):613－615.