陳錦龍 白少偉 胡 娟,2 龐文生
1.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,福建 福州 350122;2.福建中醫(yī)藥研究院,福建 福州 350003
太子參多糖具有增強(qiáng)機(jī)體免疫、潤(rùn)肺鎮(zhèn)咳、降低血糖、改善胰島素抵抗等作用,是太子參重要的一類活性成分[1-3]。通過(guò)考察閩產(chǎn)柘榮“柘參2號(hào)”太子參總多糖含量,為開(kāi)發(fā)閩產(chǎn)柘榮太子參多糖有效部位積累科學(xué)數(shù)據(jù)。
中藥材提取罐中試設(shè)備 (武漢中大制藥設(shè)備有限公司);冷凍干燥儀 (德國(guó)CHRIST公司);TU-1800PC紫外可見(jiàn)分光光度計(jì) (北京普析通用儀器有限公司)。
無(wú)水葡萄糖對(duì)照品 (中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào)110833-200302);濃硫酸、苯酚等試劑均為分析純;水為超純水;“柘參2號(hào)”太子參,由福建省閩東力捷迅藥業(yè)有限公司GAP種植基地提供。
2.1 太子參多糖提取與精制 將太子參粉碎 (20目),置于中藥提取罐中,按料液比1∶5,加85%乙醇溶液,室溫下浸泡1h,加熱提取2次,1.5h/次,過(guò)濾,殘?jiān)鼡]干乙醇,按料液比1:5加入水,浸泡1h;100℃加熱,提取2次,2h/次,過(guò)濾,合并濾液,減壓濃縮至為0.5g/ml生藥量。用Sevage法除去蛋白,離心,上清液用終濃度90%乙醇沉淀,靜置24h,4000r/min離心15min,沉淀用無(wú)水乙醇,丙酮,乙醚依次洗滌多次,冷凍干燥,即得精制太子參多糖。
2.2 樣品供試液的制備 精密稱取太子參粉末0.10g,置于100ml圓底燒瓶中,加85%乙醇100ml于100℃溫度回流提取1.5h,過(guò)濾,藥渣加入100ml蒸餾水100℃溫浸提取2h,趁熱過(guò)濾,藥渣加熱蒸餾水洗滌數(shù)次,洗液并入濾液,冷卻后移入100ml容量瓶中,蒸餾水定容備用。
2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線 精密稱取10mg經(jīng)過(guò)105℃減壓干燥至恒重的D-無(wú)水葡萄糖,加水溶解,定容至100ml量瓶中,作為對(duì)照品貯備液。采用苯酚硫酸法[4],以葡萄糖濃度(μg/ml)為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程 y=0.019x+0.0272,r=0.9991,在10~50μg/ml線性關(guān)系良好。
2.4 換算因子測(cè)定 精密稱取干燥至恒重的精制太子參多糖10mg,加蒸餾水溶解,定容至100ml量瓶中,搖勻,精密吸取溶液1.0ml,照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法,測(cè)定多糖供試液中葡萄糖的濃度,按f=W/(C×D)計(jì)算換算因子。式中W為多糖的重量 (μg),C為多糖溶液中葡萄糖濃度 (μg/ml)測(cè)定值,D為稀釋后多糖溶液體積 (ml);測(cè)得換算因子f=1.692。
2.5 樣品多糖含量測(cè)定 精密吸取10個(gè)批次太子參供試液各0.5ml于具塞試管中,按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下方法操作,測(cè)定葡萄糖的含量。按下式計(jì)算多糖含量:多糖含量=為樣品溶液中葡萄糖濃度測(cè)定值 (μg/ml);D為稀釋后樣品溶液體積,f為換算因子,W為樣品溶液中太子參重量。
表1 10個(gè)批次閩產(chǎn)柘榮太子參多糖含量測(cè)定結(jié)果
據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,江蘇產(chǎn)的太子參多糖含量在3.69%~24.47%,貴州產(chǎn)的太子參多糖含量在7.83%~22.39%,福建產(chǎn)的太子參多糖在10.50% ~23.93%[4-9];本文測(cè)定10個(gè)批次“柘參2號(hào)”太子參多糖含量在18.67%~25.43%之間,平均含量為21.76%。柘榮縣太子參種植面積3.2萬(wàn)畝,年產(chǎn)量4900多噸,產(chǎn)銷量占全國(guó)三分之二,2005年太子參GAP基地通過(guò)認(rèn)證。閩產(chǎn)柘榮太子參多糖含量較高并相對(duì)穩(wěn)定,對(duì)其研究及開(kāi)發(fā)具有廣闊的前景。
[1]Wong CK,Leung KN,F(xiàn)ung KP,Choy YM.The immunostimulating activities of anti-tumor polysaccharides from Pseudostellaria heterophylla[J].Immunopharmacology,1994,28(1):47 -54.
[2]Wensheng Pang,Siding Lin,Qiwen Dai,Hongcheng Zhang and Juan Hu*.Antitussive Activity of Pseudostellaria heterophylla(Miq.)Pax Extracts and Improvement in Lung Function via Adjustment of Multi- Cytokine Levels[J].Molecules 2011,16:3360-3370.
[3]倪受東,夏倫祝,徐先祥,張睿.太子參多糖對(duì)四氧嘧啶糖尿病小鼠的治療作用[J].安徽醫(yī)藥,2010,14(5):521-522.
[4]劉訓(xùn)紅,談獻(xiàn)和,曾艷萍等.不同產(chǎn)地太子參的質(zhì)量比較研究[J].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐,2007,21(2):36-38.
[5]馬興田,劉偉祥,段啟等.不同產(chǎn)地太子參多糖含量測(cè)定[C].中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)四大懷藥與地道藥材研究論壇暨中藥炮制分會(huì)第二屆第五次學(xué)術(shù)會(huì)議與第三屆會(huì)員代表大會(huì)論文集.2007:220-222.
[6]秦民堅(jiān),余永邦,黃文哲等.不同產(chǎn)地太子參的品質(zhì)分析[J].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐,2005,19(5):29-32.
[7]韓邦興,朱志祥,等.不同產(chǎn)地太子參多糖、氨基酸含量比較分析[J]中成藥,2010,3,32(3):513-514.
[8]羅國(guó)海,盛柳青,等.太子參藥材主根與參尾的多糖含量比較[J].中藥研究與開(kāi)發(fā),2006,13(11):50-51.
[9]晏春耕,曹瑞芳.太子參藥材性狀與多糖含量的研究[J].安徽農(nóng)學(xué)通報(bào),2009,15(11):81-82.