魯 偉，葉桂存，費毅琴

(1.黃岡職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)藥衛(wèi)生學(xué)院，湖北黃岡438002;2.湖北省食品藥品監(jiān)督檢驗研究院，湖北武漢430064)

三參四黃膠囊由太子參、丹參、黃芪、紅花等中藥組成。具有益氣養(yǎng)血、活血化瘀的功效，用于治療以多尿、多飲、多食、消瘦為主要表現(xiàn)的糖尿病。方中的紅花和丹參均具有活血通經(jīng)、散瘀止痛的作用，是處方中的君藥。為控制和提高該藥品質(zhì)量，筆者以紅花為對照品，用薄層色譜法進行定性鑒別;以丹參中所含丹酚酸B為對照品，用高效液相色譜法進行定量分析。

1 儀器與試藥

Agilent1100 Series高相液相色譜儀、MS204S/Z、AG135電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)、LC-350A型超聲液中藥處理機(濟寧市中區(qū)魯超儀器廠)。紅花(中國食品藥品檢定研究院，批號為120907-200609)、丹酚酸B(中國食品藥品檢定研究院，批號為111562-201009，供含量測定用，冷藏保存，含量以96.0%計);三參四黃膠囊樣 品 (批 號 分 別 為 20110608、20110609、20110610);甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜 ［1，2，3］

分別取批號 20110608、20110609、20110610的三參四黃膠囊內(nèi)容物各10g，80%丙酮溶液5ml，依法超聲處理15分鐘，提取液濾過，濾液作(樣品)供試液②、④、⑤。另取對照藥材紅花粗粉0.5g，同法提取，濾液作(對照)供試液③;再取缺紅花的其他中藥混合粉末10g，同法提取，濾液作(陰性對照)供試液①。依照中國藥典2010年版一部附錄VIB項下薄層色譜法試驗。

分別吸取上述供試液10μl，點于硅膠薄層板(105℃活化0.5h)上，用乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇(7:2:2:0.4)作展開劑，自然光定位。色譜結(jié)果見圖1。

圖1 薄層色譜

2.2 丹酚酸 B 的含量測定 ［4，5，6，7?］

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:COSMOSIL C18-MS-II柱(250×4.6mm，5μm);流動相:甲醇-乙腈-甲酸-水(30:9:1:60)。

檢測波長:286nm;柱溫:30℃;進樣量:10μL;理論板數(shù):按丹酚酸B計算應(yīng)不低于4000。

測定結(jié)果見圖2。

圖2 高效液相色譜

2.2.2 溶液制備

精密稱取丹酚酸B對照品適量，精密稱定，加75%甲醇制成每1ml含20μg的溶液，即得丹酚酸B對照品溶液A。另取三參四黃膠囊內(nèi)容物，研細，取約0.2g，精密稱定，置25ml量瓶中，加75%甲醇約20ml，密塞，超聲處理(功率300W，頻率50kHz)30分鐘，放冷，加75%甲醇至刻度，搖勻，濾過，取濾液，得樣品溶液B。再取缺丹參其他組分粉末，按三參四黃膠囊樣品溶液同法制得陰性對照液C。

2.2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗 取陰性對照溶液10μL，注入液相色譜儀測定。結(jié)果見圖2。

線性關(guān)系考察 精密稱取丹酚酸B對照品9.97mg，置50ml容量瓶中，加75%甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。自上述對照品貯備液中精密量取2ml置10ml容量瓶中，用75%甲醇稀釋至刻度。分別吸取上述溶液3μl、5μl、10μl、15μl、20μl，注入液相色譜儀，記錄各色譜峰峰面積，以丹酚酸B峰面積均值為縱坐標、進樣量為橫坐標，繪制標準曲線。得線性回歸方程:Y=1219.3X+8.565，r=0.9999(n=5)。表明丹酚酸B在0.1149～0.7657μg之間呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗精密吸取同一對照品溶液，重復(fù)進樣5次(每次10μL)，測定峰面積。結(jié)果RSD為0.25%。

重復(fù)性試驗按擬定的含量測定方法，取同一樣品(批號為20110608)6份，分別按供試品溶液制備方法制備，測定其丹酚酸B的含量。結(jié)果平均含量為0.94 mg·粒-1，RSD為1.45%。

穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液，分別于0、2、5、8、10、14h時進樣測定丹酚酸B的峰面積。結(jié)果平均峰面積為316.3，RSD為0.88%。結(jié)果表明供試品溶液在14h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗精密稱取已知含量的樣品(批號為20110608)6份，分別精密加入一定量丹酚酸B對照品溶液，按供試品溶液制備方法處理、含量測定項下方法測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 丹酚酸B回收率試驗結(jié)果(n=6)

2.2.4 樣品含量測定

取樣品3批，依法制備供試品溶液，分別精密吸取對照品與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定。測得批號為 20110608、20110609、20110610的3批樣品中丹酚酸B含量為別為 0.94、0.90、0.95 mg·粒-1。

3 討論

提取條件的選擇 參考2010年版《中國藥典》一部丹參項下丹酚酸B的含量測定，選擇75%甲醇為提取溶劑。取批號為20110608的樣品，考察超聲和回流兩種提取方式，結(jié)果差異不大，因此選擇較簡便的超聲提取方式。取批號為20110608的樣品的供試品2份，對超聲時間作考察，結(jié)果表明:超聲提取30分鐘即可提取完全。

本實驗所采用的方法穩(wěn)定，專屬性強，重現(xiàn)性好，可用于三參四黃膠囊的質(zhì)量控制，作為該制劑質(zhì)量標準制定參考。

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