程運(yùn)斌 劉育清

（1.湖北省農(nóng)藥及農(nóng)產(chǎn)品安全質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)站 武漢 430064； 2.湖北省農(nóng)藥檢定管理所 武漢 430070）

1 前言

三環(huán)唑的化學(xué)名稱:5-甲基一1，2，4一三唑并（3，4-b）苯并噻唑。是一種具有較強(qiáng)內(nèi)吸性的保護(hù)性三唑類(lèi)殺菌劑。殺菌作用機(jī)理主要是抑制附著孢黑色素的形成，從而抑制孢子萌發(fā)和附著孢形成，阻止病菌侵人和病菌孢子的產(chǎn)生。三環(huán)唑具有較強(qiáng)的內(nèi)吸性，能迅速被水稻根莖葉吸收，并輸送到稻株各部，一般在噴灑后2小時(shí)稻株內(nèi)吸收藥量可達(dá)飽和。對(duì)銹病和白粉病具有預(yù)防、鏟除、治療、熏蒸等作用。丙環(huán)唑的化學(xué)名稱:1-[2-（2，4-二氯苯基）-4-丙基-1，3-二氧戊環(huán)-2-甲基]-1氫-1，2，4三唑，是一種具有保護(hù)和治療作用的三唑類(lèi)殺菌劑，內(nèi)吸性強(qiáng)，具有雙向傳導(dǎo)性能，可被根、莖、葉部吸收，并能很快地在植物株體內(nèi)向上傳導(dǎo)，施藥2小時(shí)即可將入侵的病原體殺死，1d～2d控制病 情擴(kuò)展，阻止病害的流行發(fā)生，滲透力及附著力極強(qiáng)，特別適合在雨季使用；防治子囊菌，擔(dān)子菌和半知菌引起的病害，特別是對(duì)小麥全蝕病、白粉病、銹病、根腐病，水稻惡菌病，香蕉葉斑病具有較好的防治效果。目前，三環(huán)唑和丙環(huán)唑單劑產(chǎn)品均國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)[1-2]，二者與其它有效成分的混配產(chǎn)品分析方法亦有報(bào)道[3-8]，二者混配的分析方法未見(jiàn)報(bào)道。該文介紹了利用氣相色譜法在同柱同條件下對(duì)三環(huán)·丙環(huán)唑525g/L懸乳劑中三環(huán)唑和丙環(huán)唑兩組分的有效分離、測(cè)定方法。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 儀器與試劑

氣相色譜儀：Agilent6890N，帶FID檢測(cè)器，HP化學(xué)工作站；

色譜柱：1m×3mm（i.d），內(nèi)填5%OV-101/ChromosorbWAW-DMCS（150-180m）；

微量進(jìn)樣器：10L；

XH-C型旋渦混勻器,AnkeTDL-40B離心機(jī)；

圖1 標(biāo)樣色譜圖

圖2 試樣色譜圖

三環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)品：99.5%（農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所）；

丙環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)品：98.6%（國(guó)家農(nóng)藥質(zhì)檢中心）；

三環(huán)·丙環(huán)唑525g/L懸乳劑（浙江世佳科技有限公司）；

內(nèi)標(biāo)物：鄰苯二甲酸正丁酯，應(yīng)不含有干擾色譜分析的雜質(zhì)。

溶劑：丙酮（分析純）；

2.2 色譜條件

溫度：柱溫 225℃保持 5.5min，20℃/min程序升溫至260℃保持6min，進(jìn)樣口230℃，檢測(cè)器280℃；

流速（mL/min）：載氣 25，氫氣 30，空氣 300；進(jìn)樣量：1L；

保留時(shí)間：鄰苯二甲酸正丁酯約2.7min；三環(huán)唑約4.7min；丙唑約7.3min；

2.3 溶液配制

2.3.1 內(nèi)標(biāo)溶液的配制

稱取鄰苯二甲酸正丁酯2.5g于100mL容量瓶中，用丙酮稀釋至刻度，于XH-C型旋渦混勻器上搖勻靜置備用。

2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

分別稱取三環(huán)唑、丙環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)品0.09g、0.03g（精確至0.0002g）于10mL容量瓶中，準(zhǔn)確加入內(nèi)標(biāo)溶液2.0mL，用丙酮稀釋至刻度，于XH-C型旋渦混勻器上充分振搖靜置備用。

2.3.3 試樣溶液的配制

稱取三環(huán)·丙環(huán)唑525g/L懸乳劑0.22g（精確至0.0002g）于10mL容量瓶中，加入丙酮直至樣品被浸泡溶解，準(zhǔn)確加入內(nèi)標(biāo)溶液2.0mL，再用丙酮稀釋至刻度，于XH-C型旋渦混勻器上充分振搖后，于AnkeTDL-40B離心機(jī)上離心，靜置備用。

2.4 測(cè)定方法

在上述色譜條件下，待儀器穩(wěn)定后，連續(xù)進(jìn)數(shù)針標(biāo)準(zhǔn)溶液，待相鄰兩針的相對(duì)響應(yīng)值變化<1.5%時(shí)，按照標(biāo)樣、試樣、試樣、標(biāo)樣的順序進(jìn)行測(cè)定，色譜圖見(jiàn)圖1、圖2。

三環(huán)·丙環(huán)唑 20%可濕性粉劑有效成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)%按下式計(jì)算：

式中：A1——標(biāo)樣中三環(huán)唑（丙環(huán)唑）與內(nèi)標(biāo)物峰面積比的平均值；

A2——試樣中三環(huán)唑（丙環(huán)唑）與內(nèi)標(biāo)物峰面積比的平均值；

m1——標(biāo)準(zhǔn)品三環(huán)唑（丙環(huán)唑）的質(zhì)量（g）；

m2——試樣三環(huán)唑（丙環(huán)唑）的質(zhì)量（g）；

P——標(biāo)準(zhǔn)品三環(huán)唑（丙環(huán)唑）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）

3 結(jié)果與分析

3.1 分析條件的選擇

為使試樣中的兩組分在同柱同條件下得到有效分離并能準(zhǔn)確定量測(cè)定，分別選用了幾種內(nèi)標(biāo)物進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果表明，在一定的柱箱溫度和載氣流量條件下，鄰苯二甲酸正戊酯與三環(huán)唑不能完全分離，在二者之間或之前沒(méi)有合適的內(nèi)標(biāo)物可選。所以選用更為合適的鄰苯二甲酸正丁酯作為內(nèi)標(biāo)物。

分別試用1m的SE-30、2m的OV-17和不同長(zhǎng)度（0.5、1m）的OV-101填充柱對(duì)試樣進(jìn)行分離測(cè)定，在分離程度基本相同的情況下，三環(huán)唑在OV-17上峰型拖尾現(xiàn)象明顯，而丙環(huán)唑出峰時(shí)間偏長(zhǎng)；三環(huán)唑在0.5m的OV-101和1m的SE-30柱上出峰太快，且峰型對(duì)稱性不好。若降低初始溫度而提高升溫速率，則基線飄移，峰型不好，定量不準(zhǔn)確。通過(guò)試驗(yàn)，用一階程序升溫，試樣在1m的OV-101柱上能好地分離，峰型對(duì)稱性好，且10分鐘便可完成一次測(cè)定。

3.2 分析方法的線性相關(guān)性測(cè)定

稱取標(biāo)準(zhǔn)品三環(huán)唑0.8051g、丙環(huán)唑0.2525g（精確至0.0002g）于同一25容量瓶中，用丙酮稀釋至刻度，配制成標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。用移液管分別準(zhǔn)確移取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液 0.5、1.0、2.0、3.0、5.0mL于5個(gè)10mL容量瓶中,分別加入內(nèi)標(biāo)溶液2.0mL用丙酮稀釋至刻度，配成5組不同濃度的溶液。按前述規(guī)定的色譜條件測(cè)定，以標(biāo)準(zhǔn)品與內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量比為橫坐標(biāo)，以其峰面積比為縱坐標(biāo)作圖3、圖4。其線性方程分別為Y三環(huán)唑=1.0042X-0.0353，Y丙環(huán)唑=2.9186X-0.0069；相關(guān)系數(shù)分別為 r三環(huán)唑=0.9997，r丙環(huán)唑=0.9996（表1）。

表1 分析方法的線性相關(guān)性試驗(yàn)數(shù)

圖3 三環(huán)唑的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

圖4 丙環(huán)唑的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

3.3 分析方法精密度測(cè)定

對(duì)同一試樣分別稱取5份，在上述色譜條件下，進(jìn)行平行測(cè)定。檢測(cè)結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)，該方法的標(biāo)準(zhǔn)偏差、變異系數(shù)三環(huán)唑?yàn)?.639和0.16%，為丙環(huán)唑0.328和0.26%（表2）。

表2 分析方法的精密度試驗(yàn)數(shù)據(jù)

3.4 分析方法的準(zhǔn)確度測(cè)定

稱取已知含量的試樣5份，加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)品，進(jìn)行回收率測(cè)定，得出三環(huán)唑的回收率為98.95%～102.21%，丙環(huán)唑的回收率為 98.66%～101.89%（表3）。

表3 分析方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn)數(shù)據(jù)

3.5 結(jié)論

試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法測(cè)定三環(huán)·丙環(huán)唑525g/L懸乳劑兩種有效成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，分離效果好，準(zhǔn)確度、精密度高，線性關(guān)系好，符合定量分析要求。對(duì)不同配方規(guī)格的復(fù)配制劑，只需調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品和試樣的稱取量，此方法同樣適用，而且操作簡(jiǎn)便易行，分析時(shí)間短、成本低廉，適用于企業(yè)生產(chǎn)的質(zhì)量控制及質(zhì)檢機(jī)構(gòu)農(nóng)藥產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)。

[1]沈陽(yáng)化工研究院有限公司.GB20701-2006.三環(huán)唑可濕性粉劑[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2007.

[2]沈陽(yáng)化工研究院有限公司.GB23549-2009.丙環(huán)唑乳油[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2010.

[3]周衛(wèi)群，胡昌弟，吳志華，等.20%三環(huán)唑·異稻瘟凈的氣相色譜法分析[J].農(nóng)藥,1996（02）：27-28.

[4]程運(yùn)斌，劉育清.異稻·三環(huán)唑20%可濕性粉劑的氣相色譜分析[J]農(nóng)藥科學(xué)與管理，2008，29（9）：18-20.

[5]程運(yùn)斌，劉育清.30%苯醚甲·丙環(huán)唑乳油的氣相色譜分析[J]農(nóng)藥，2007,46（9）：612-613.

[6]程運(yùn)斌，劉育清.唑酮·三環(huán)唑20%可濕性粉劑氣相色譜分析方法研究[J]甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，46（6）：73-76.

[7]黃映君，多菌靈與三環(huán)唑的HPLC分析[J]農(nóng)藥，2005（01）：23-24.

[8]周寧，三環(huán)唑-異稻瘟凈復(fù)合乳性懸浮劑氣相色譜分析[J]農(nóng)藥，1990,29（5）：20-22.