張穎 張古林 胡建功

胃癌是人類最常見的惡性腫瘤之一，位居癌癥死因的第二位［1］。胃癌的發(fā)生涉及腫瘤細胞與宿主之間復(fù)雜的相互作用，多個基因及其產(chǎn)物參與了過程的調(diào)控?；|(zhì)金屬蛋白酶(matrix m etalloproteinases，MMPs)是一類結(jié)構(gòu)中含有Zn2+的肽鏈內(nèi)切酶家族，是腫瘤細胞突破基底膜屏障的主要執(zhí)行者。其中MMP-9為明膠酶，可選擇性降解ECM和基底膜的主要成分O型膠原和明膠，為腫瘤細胞浸潤和轉(zhuǎn)移創(chuàng)造必需條件，并同時促進腫瘤中新生血管的形成［2］。本研究通過檢測胃癌組織中MMP-9蛋白的表達及其與胃癌臨床病理學(xué)特征之間的相關(guān)性，旨在探討其在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用，為胃癌預(yù)后的判斷及臨床治療提供一定的理論參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取手術(shù)切除標本60例(胃癌組)及其癌旁組織(距離癌組織5 cm處)20例(癌旁組)和10例胃鏡下取的正常黏膜(對照組)。胃癌組中男33例，女27例;＜50歲18例，≥50歲42例;中分化16例，低分化44例;浸潤黏膜下層6例，肌層11例，漿膜層33例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移42例，無轉(zhuǎn)移18例。所有病例均經(jīng)病理診斷證實，資料完整，且均未做過放化療。

1.2 檢測方法 兔抗人MMP-9單克隆抗體，稀釋濃度為1∶50，即用型免疫組化試劑盒，均購自福州邁新生物技術(shù)有限公司。所有標本均經(jīng)10%中性甲醛溶液固定。采用免疫組化S-P法，DAB顯色，具體操作按說明書進行。以PBS代替一抗作為陰性對照，以已知喉癌陽性切片作為陽性對照。

1.3 結(jié)果判定 以特定著色部位出現(xiàn)棕黃色顆粒視為陽性著色，MMP-9染色陽性物質(zhì)位于細胞質(zhì)。以表達陽性率的形式表示染色陽性率。選取細胞分布均勻的視野，計數(shù)每個視野中陽性腫瘤細胞數(shù)與細胞總數(shù)，每例計數(shù)10個視野，計算其中平均陽性細胞數(shù)，以百分數(shù)表示。即表達陽性率=(陽性細胞數(shù)/瘤細胞總數(shù))×100%。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析應(yīng)用SPSS11.0統(tǒng)計軟件，計量資料以±s表示，采用方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MMP-9在胃癌中的表達 MMP-9的表達陽性率在胃腺癌組顯著高于對照組及癌旁組(P＜0.01)，在癌旁組中顯著高于對照組(P＜0.05)。見表1。

表1 CD147、MMP-9在胃癌中的表達率%，±s

表1 CD147、MMP-9在胃癌中的表達率%，±s

注：與對照組比較，*P＜0.05;與癌旁組織比較，#P＜0.05

癌旁組(n=20)胃腺癌組(n=60) 72.6±8.1*#

2.2 MMP-9表達與胃癌臨床病理特征的關(guān)系 MMP-9表達陽性率低分化癌組顯著高于中分化癌組(P＜0.05)，浸潤肌層及浸潤漿膜層組顯著高于浸潤黏膜下層組(P＜0.05)，浸潤肌層及浸潤漿膜層組差異無統(tǒng)計學(xué)習(xí)意義(P＞0.05);在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P＜0.05)。MMP-9的表達陽性率與患者性別、年齡、腫瘤體積等無關(guān)(P＞0.05)。見表2。

3 討論

MMP-9可由腫瘤細胞及間質(zhì)細胞以酶原的形式分泌，被激活后形成Ⅳ型膠原酶，降解、破壞靠近腫瘤表面的膠原和明膠，導(dǎo)致腫瘤細胞沿著破損的基底膜向周圍組織浸潤轉(zhuǎn)移［2］。腫瘤細胞對細胞外基質(zhì)成分及基底膜的降解是腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟，MMP-9能降解包括Ⅳ型膠原在內(nèi)的多種基質(zhì)成分。

研究顯示，MMP-9在多種腫瘤中表達增強，并與腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移及患者的預(yù)后有關(guān)。茍小霞等［3］檢測發(fā)現(xiàn)，MMP-9在喉鱗癌的陽性表達率明顯高于喉炎組，與喉癌臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。MMP-9表達陰性組5年生存率明顯高于MMP-9表達陽性組。提示其表達增強與喉癌侵襲、轉(zhuǎn)移有關(guān)，MMP-9是喉癌預(yù)后的危險因子。Tamamura等［4］發(fā)現(xiàn)，MMP-9在正常及增生口腔黏膜缺乏表達，原位癌呈弱表達，浸潤癌表達陽性率明顯增高，差異有顯著性。提示MMP-9與口腔鱗癌的發(fā)生及演進有關(guān)。Yang等［5］檢測發(fā)現(xiàn)，MMP-9在胃腺癌中表達陽性率明顯高于正常黏膜中，并與腫瘤體積、組織學(xué)分級、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分期有關(guān)，與患者性別、年齡無關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，MMP-9表達陽性率在胃腺癌組織中顯著高于正常胃黏膜上皮及癌旁組織中;MMP-9表達陽性率在低分化癌組織中顯著高于中分化癌組織中，在浸潤肌層及浸潤漿膜層組織中顯著高于浸潤黏膜下層組織中，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。MMP-9的表達陽性率與患者性別、年齡、腫瘤體積等無關(guān)。本研究與Yang等［5］研究結(jié)果一致。提示MMP-9促進了胃癌的侵襲、轉(zhuǎn)移，與胃癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。故推測MMP-9可能促進了胃癌的演進與發(fā)展。同時也表明，針對MMP-9靶向治療可能對胃癌的臨床治療具有重要意義。

表2 MMP-9表達胃癌臨床病理特征的關(guān)系%，±s

表2 MMP-9表達胃癌臨床病理特征的關(guān)系%，±s

注：與黏膜下層比較，*P ＜0.05;與肌層比較，#P ＜0.05

≥50(n=42) 72±9＜50(n=18) 75±10 1.000腫瘤直徑(cm)≥5(n=43) 70±10＜5(n=17) 79±9 1.000分化程度中(n=16) 62±10低(n=44) 77±10 0.025浸潤深度黏膜下層(n=6) 55±9肌層(n=11) 71±9* 0.033漿膜層(n=43) 76±7*# *0.019，△1.000淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(n=18) 62±8有(n=42)77±8 0.022

1 徐飚，王建明.胃癌流行病學(xué)研究.中華腫瘤防治雜志，2006，13：1-7.

2 Groblewska M，Siewko M，Mroczko B，etal.The role of matrix metalloproteinases(MMPs)and their inhibitors(TIMPs)in the development of esophageal cancer.Folia Histochem Cytobiol，2012，50：12-19.

3 茍小霞，金鳳，陳海霞，等.喉癌中細胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子和基質(zhì)金屬蛋白酶2、9的表達及其臨床意義.中華醫(yī)學(xué)雜志，2010，90：1264-1265.

4 Tamamura R，Nagatsuka H，Siar CH，etal.Comparative analysis of basal lamina type IV collagen α chains，matrix metalloproteinases-2 and-9 expressions in oral dysplasia and invasive carcinoma.Acta Histochem，2012，Epub ahead of print.

5 Yang S，Zhao Z，Wu R，Expression and biological relationship of vascular endothelial growth factor-A and matrix metalloproteinase-9 in gastric carcinoma.JInt Med Res，2011，39：2076-2085.