王麗 翟麗萍 葛麗平 林涵淼 趙繼波 邢珍

地佐辛是一種新型阿片受體激動-拮抗藥，其主要對κ受體產(chǎn)生激動作用，對μ受體有部分激動作用，同時還有一定的拮抗作用，但其不會產(chǎn)生典型的μ受體依賴［1］。此藥有較強的鎮(zhèn)痛作用，不良反應少，對循環(huán)和呼吸抑制輕，精神依賴性極低。臨床研究發(fā)現(xiàn)地佐辛經(jīng)靜脈注射后15 min便達到鎮(zhèn)痛效果［2］。地佐辛是一種理想的術(shù)中和術(shù)后鎮(zhèn)痛藥物，目前已廣泛應用于臨床［3，4］，主要用于急性疼痛、術(shù)中輔助鎮(zhèn)痛、癌性疼痛及術(shù)后鎮(zhèn)痛。本實驗采用腹腔注射地佐辛的方法，觀察地佐辛不同時間給藥對大鼠血液中NO和P物質(zhì)濃度的影響以及與鎮(zhèn)痛效果的關(guān)系，探討地佐辛超前鎮(zhèn)痛的作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組 成年健康雄性Wistar大鼠24只(河北北方學院提供)，體重250～300 g，按隨機數(shù)字表法分為3組，每組8只。0.9%氯化鈉溶液組(A組)：切口疼痛模型前30 min腹腔注射0.9%氯化鈉溶液2 ml，大鼠平均體重為(276±16)g;地佐辛術(shù)前組(B組)：切口疼痛模型前30 min腹腔注射地佐辛0.1 mg/kg 2 ml，大鼠平均體重為(268±21)g;地佐辛術(shù)后組(C組)：切口疼痛模型后30 min腹腔注射地佐辛0.1 mg/kg 2 ml，大鼠平均體重為(278±13)g。3組大鼠的體重差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

1.2 藥品與儀器 地佐辛注射液(揚子江藥業(yè)集團有限公司，批號：蘇 2007001)，七氟醚(上海恒瑞藥業(yè)集團，批號：20071002)，EDTA-Na2試劑和抑肽酶(北京?？其J生物技術(shù)中心)，P物質(zhì)試劑盒(北京奇松生物科技有限公司 QS41985)，NO試劑盒(上海雅吉生物科技有限公司 YSO1893B)，離心機(臺式TG18G湖南凱達科學儀器有限公司)。

1.3 切口疼痛模型的建立 將實驗大鼠置于自制的鐵絲編織的小籠子中，先稱量籠子和大鼠的重量，取出大鼠后再稱量籠子的重量，兩者相差即為大鼠的體重。取出大鼠后用自制的頭套(一端留有可系帶一端有供大鼠呼吸的通氣口)將其前半身套住并盡量固定大鼠使其通過通氣口吸入七氟烷，3～5 min后待大鼠麻醉(即大鼠對疼痛刺激沒有體動反應)后，用安爾碘對大鼠后肢進行常規(guī)消毒，按Brennan法制作大鼠切口疼痛模型：在距大鼠足跟近端0.6 cm處進行操作，向大鼠趾部方向做一長約1.2 cm的縱形切口，逐層切開大鼠趾部的皮膚及皮下筋膜后，遂可暴露肌肉，然后用鑷子挑起暴露的足底肌肉并小心縱向分離切割，操作時要盡量保持肌肉的起止和附著完整，操作完畢后用棉簽按壓止血，然后用0號細線縫合皮膚共2針即完成切口痛模型的制作。術(shù)后將大鼠置于自制的40 cm×40 cm×40 cm的加蓋玻璃容器中，并要保持環(huán)境的安靜和衛(wèi)生，室溫保持在25℃左右，同時要避免強光和噪音的刺激。

1.4 累積疼痛評分 在大鼠趾部術(shù)后30 min后，參照Brennan法［12］待大鼠麻醉藥代謝完全大鼠清醒后觀察其術(shù)側(cè)后爪著地和負重情況，術(shù)側(cè)后爪著地并且被壓迫致發(fā)白表示負重;術(shù)側(cè)后爪因為疼痛而翹起不著地計2分;術(shù)側(cè)后爪著地但不負重(即后爪不致發(fā)白)計1分;術(shù)側(cè)后爪著地并負重計0分。非手術(shù)側(cè)足的觀察評分同術(shù)側(cè)足。實驗設(shè)計每5分鐘觀察1次大鼠的行為變化，每次觀察1 min，在觀察的1 min內(nèi)大鼠最常采用的站立姿勢作為疼痛評分記錄，共觀察1 h(0～24分)，每只切口疼痛模型大鼠都用術(shù)側(cè)足評分減去對側(cè)足評分即為其累積疼痛評分值。以上觀察記錄均是將大鼠置于自制的40 cm×40 cm×40 cm加蓋玻璃容器中進行，容器底部為透明玻璃方便實驗者觀察和記錄，所有操作觀察和記錄由實驗者自己完成。

1.5 標本采集和檢測 制造大鼠趾部切口痛模型后1 h，用5 ml的無菌注射器采取大鼠尾部靜脈血2 ml，將采取的2 ml靜脈血注入事先在冰箱預冷過的含有EDTA-Na250 ml和抑肽酶1 000 U的試管內(nèi)，然后將其充分混勻，在4℃的低溫下以3 000 r/min速度離心10 min，將其上層血漿分離后置于-70℃的冰箱中保存以待測。用P物質(zhì)試劑盒測定大鼠血液中P物質(zhì)的濃度，其采用的是放射免疫技術(shù)。制造大鼠趾部切口痛模型后1 h，用5 ml的無菌注射器采取大鼠尾部靜脈血2 ml，將2 ml靜脈血置于空試管中在4℃下以3 000 r/min速度離心10 min，分離上層血清，后將分離出的血清置入-20℃冰箱中待測，用硝酸還原酶法測定血清中NO濃度。

1.6 統(tǒng)計學分析應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件，計量資料以±s表示，3組大鼠累積疼痛評分的比較以及每組大鼠的免疫組織化學實驗結(jié)果，均采用單因素方差分析，每組實驗組間的比較先進行方差齊性檢驗，方差齊采用最小顯著差法，方差不齊采用秩和檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 累積疼痛評分 A組與B組和C組比較，累積疼痛評分值明顯高(P＜0.01)，B組與C組累積疼痛評分值比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表2。

表2 3組累積疼痛評分比較n=8，±s

表2 3組累積疼痛評分比較n=8，±s

注：與A組比較，*P ＜0.05;與B組比較，#P ＜0.01

B組 6.15±0.33 0 6.15±0.33 C組 9.98±0.24 0 9.98±0.24*#

2.2 大鼠血液中NO與P物質(zhì)的濃度比較 B組、C組與A組比較，NO和P物質(zhì)(SP)含量顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。B組與C組比較，NO和P物質(zhì)(SP)含量差異也有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表3。

表3 3組大鼠血液中NO和P物質(zhì)濃度比較n=8，±s

表3 3組大鼠血液中NO和P物質(zhì)濃度比較n=8，±s

注：與A組比較，*P ＜0.05;與B組比較，#P ＜0.01

SP(ng/L) 165±10 76±8# 100±10*#

3 討論

鎮(zhèn)痛機制為：痛覺信息向中樞神經(jīng)系統(tǒng)的傳導過程中，會刺激感覺神經(jīng)末梢并促使其釋放葡萄糖(Glu)和P物質(zhì)(SP)，Glu和SP作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)中相應的受體從而完成痛覺沖動向中樞的傳遞過程，進而引起疼痛［5］。內(nèi)源性阿片肽物質(zhì)由特定的神經(jīng)元釋放后，可以激動感覺神經(jīng)突觸前后膜上的阿片類受體，然后通過G-蛋白偶聯(lián)機制，抑制腺苷酸環(huán)化酶的合成、促進鉀離子(K+)的外流、減少鈣離子內(nèi)流，使突觸前膜釋放遞質(zhì)減少、突觸后膜發(fā)生超機化，最終會減弱或阻滯痛覺信號在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的傳遞，從而產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用。

近年大量研究證實P物質(zhì)是一種由初級感覺神經(jīng)元末梢釋放的可以傳遞痛覺信息的神經(jīng)遞質(zhì)。傷害性信息由傳入感覺神經(jīng)纖維傳遞到脊髓中樞，引起背根神經(jīng)細胞釋放P物質(zhì)，SP作用于細胞的突觸后膜，使突觸后膜的離子通透性發(fā)生改變，進而引起突觸后膜電位發(fā)生改變，最終使突觸后神經(jīng)細胞的機能狀態(tài)發(fā)生改變，傷害性感受神經(jīng)元被激活，完成了傷害性信息在中樞的傳遞［6］。

研究顯示，NO不僅是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中一種神經(jīng)信號的傳遞分子而且在外周神經(jīng)系統(tǒng)痛覺信息的傳遞和調(diào)制中起著促進的作用［7］。

本實驗運用趾部切口痛大鼠模型，采用腹腔注射地佐辛給藥途徑，實驗結(jié)果證明：術(shù)前和術(shù)后腹腔注射地佐辛均可減少大鼠血液中NO及P物質(zhì)的濃度。測得血液中NO及P物質(zhì)濃度的表達與外周給予的傷害性刺激程度呈明顯的相關(guān)性，并且與大鼠行為學的疼痛累積評分呈一致性，這說明地佐辛可能通過作用于脊髓中相應的阿片受體從而阻滯和減弱了痛覺信息向脊髓中樞的傳導和調(diào)制，大量實驗研究已證實NO及P物質(zhì)與傷害性信息在中樞的傳導和調(diào)制有關(guān)，本實驗中通過腹腔注射地佐辛產(chǎn)生脊髓鎮(zhèn)痛作用，阻止了痛信號在脊髓內(nèi)的傳導，產(chǎn)生抗傷害的作用。

許多研究證實P物質(zhì)和H、5-HT、BK是術(shù)后組織發(fā)生炎性反應形成“炎性湯”的重要物質(zhì)，他們之間的惡性循環(huán)一旦形成便會建立一個級聯(lián)放大的炎性反應，使機體的炎性反應加劇，而這一網(wǎng)絡(luò)反應很難被阻斷。如果在惡性循環(huán)形成之前被地佐辛的鎮(zhèn)痛作用所打破，那么就會減少P物質(zhì)的釋放，阻滯了P物質(zhì)介導的外周和中樞敏感化，減弱了痛覺信息在中樞的傳導，減輕了炎癥所致的疼痛反應，發(fā)揮了地佐辛的超前鎮(zhèn)痛作用。

1 閆軍峰，郭麗霞，浦從義，等.不同劑量地佐辛復合異丙酚在無痛人工流產(chǎn)術(shù)中的應用.河北醫(yī)藥，2011，33：1363-1364.

2 齊萬紅，陳暉，徐萍，等.地佐辛用于甲狀腺癌根治術(shù)的超前鎮(zhèn)痛.中國實用醫(yī)藥，2011，6：137-138.

3 江明性主編.藥理學.第3版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1989.134-140.

4 Gharagozlou P，Hashemi E，DeLorey TM，etal.Pharmacological pro-files of opioid ligands at kappa opioid receptors.BMC Pharma-col，2006，6：3.

5 黃鐵花.地佐辛鎮(zhèn)痛作用與安全性研究.醫(yī)藥導報，2010，8(29增)：3-4.

6 Wu ZZ，Guan BC，Li ZW，etal.Sustained potentiation by sub-stance P of NMDA-activated current in rat primary sensoryneurons.Brain Res，2004，10：117-126.

7 董錫臣，岳禮生，李文志.硬膜外腔嗎啡和氟呱利多超前鎮(zhèn)痛的臨床研究.臨床麻醉學雜志，2003，19：473.