石曉明 吳勝春 楊永賓 唐雷 王躍欣 呂柏楠

結(jié)腸癌是我國常見的消化道惡性腫瘤，近年來發(fā)病率一直處于上升趨勢。但由于結(jié)腸癌早期臨床表現(xiàn)不典型，就診時多已處于進(jìn)展期，治療效果及預(yù)后都不理想。如能發(fā)現(xiàn)與結(jié)腸癌發(fā)生進(jìn)展關(guān)系密切的基因，則有可能作為腫瘤標(biāo)志物、預(yù)后因子，還有可能作為新的結(jié)腸癌生物治療靶點。關(guān)于結(jié)腸癌新基因的研究目前已成為熱點，但迄今尚未取得突破性進(jìn)展。新近研究發(fā)現(xiàn)，水通道蛋白家族(AQPs)的多個成員與許多惡性腫瘤關(guān)系密切［1-3］，已引起學(xué)者們的關(guān)注。其中水通道蛋白1(AQP1)在結(jié)腸癌等疾病中表達(dá)增高［4，5］，但有關(guān) AQP1在結(jié)腸癌中具體臨床意義的研究尚不多見。故本研究檢測了AQP1蛋白在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)，進(jìn)一步對AQP1與結(jié)腸癌臨床病理特征及腫瘤預(yù)后的關(guān)系進(jìn)行了分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2007年9月至2010年10月在我院普外科住院手術(shù)并術(shù)后病理確診的結(jié)腸原發(fā)癌石蠟標(biāo)本54例，并取其中40例的癌旁組織標(biāo)本。所有患者的臨床病理資料均記錄完整，術(shù)后均以月為單位進(jìn)行隨訪。患者中男40例，女14例;年齡38～74歲，中位年齡58歲。兔抗人AQP1多克隆抗體購自美國Santa Cruz公司，免疫組化試劑盒為福建邁新生物技術(shù)公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化染色：石蠟標(biāo)本連續(xù)4μm切片，脫蠟水化后3%過氧化氫孵育，蒸餾水沖凈后以PBS浸泡進(jìn)行抗原修復(fù)。嚴(yán)格按免疫組化試劑盒要求進(jìn)行操作：工作液封閉、加入一抗、孵育并沖洗后依次加二抗工作液、辣根酶標(biāo)記鏈酶卵白素工作液。DAB顯色，蘇木素復(fù)染后進(jìn)行脫水，最后中性樹脂封片，分別進(jìn)行HE和免疫組化染色。

1.2.2 結(jié)果判斷：免疫組化結(jié)果由2名病理專業(yè)醫(yī)師進(jìn)行雙盲閱片。每張切片隨機取5個高倍視野(×400)，每個視野均隨機計數(shù)100個細(xì)胞，計算陽性率。AQP1以黃色或棕黃色顆粒出現(xiàn)在細(xì)胞膜和細(xì)胞漿內(nèi)為結(jié)果陽性。AQP1陽性記分標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)胞內(nèi)無陽性表達(dá)為(-)，＜50%細(xì)胞陽性表達(dá)為(+)，≥50%細(xì)胞陽性表達(dá)為(++)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 應(yīng)用SAS8.0統(tǒng)計軟件，采用χ2檢驗、Kaplan-Meier生存分析檢驗等方法對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)腸癌與癌旁組織AQP1表達(dá)比較 結(jié)腸癌組織中AQP1表達(dá)陽性率為75.93%(41/54)，而癌旁組織AQP1陽性率為22.50%(9/40)。AQP1在結(jié)腸癌組織中表達(dá)明顯高于癌旁組織(χ2=26.34，P ＜0.05)。

2.2 AQP1表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理特征之間的關(guān)系 結(jié)果顯示，AQP1表達(dá)與結(jié)腸癌的浸潤深度、脈管瘤栓、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān)(P＜0.05)，AQP1陽性表達(dá)的患者腫瘤浸潤深度更深、脈管瘤栓和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的陽性率更高;而AQP1表達(dá)與結(jié)腸癌患者的性別、年齡、腫瘤長徑、腫瘤部位、分化程度、臨床分期、是否遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等特征無關(guān)(P＞0.05)。見表1。

2.3 AQP1表達(dá)與胃癌患者預(yù)后關(guān)系 54例患者中有47例得到隨訪數(shù)據(jù)，失訪率12.96%。對47例患者進(jìn)行Kaplan-Meier生存分析檢驗，AQP1陽性患者的平均生存期為(16±8)月，陰性患者平均生存期為(28±15)月，2組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.738，P=0.030)。見圖 1。

3 討論

結(jié)腸癌是我國常見的消化道惡性腫瘤，隨著生活水平的不斷提高，近年來該病的發(fā)生率在國內(nèi)外均處于上升趨勢，嚴(yán)重威脅人民健康。由于結(jié)腸癌起病比較隱匿、早期無明顯特異癥狀，患者就診時經(jīng)常已處于進(jìn)展期，甚至已無手術(shù)機會，預(yù)后很差。因此，確定影響結(jié)腸癌的基因并將這些基因作為腫瘤標(biāo)志物、預(yù)后判斷因子及生物治療的靶標(biāo)已成為當(dāng)前結(jié)腸癌研究的趨勢。水通道蛋白1(AQP1)即為目前受到關(guān)注的基因之一。迄今AQPs家族已發(fā)現(xiàn)13個家族成員(AQP0-AQP12)，可轉(zhuǎn)運水分子、甘油及其他小分子物質(zhì)。AQP1為水通道蛋白家族的成員之一，基因定位于染色體7p14，蛋白質(zhì)分子量為28kD，以四聚體形式存在于細(xì)胞膜上［6］。國內(nèi)外研究均有報告認(rèn)為AQP1可促進(jìn)腫瘤新生血管的形成，可以促進(jìn)腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移，在宮頸癌、結(jié)直腸癌、肺癌等多種惡性腫瘤中均存在高表達(dá)［2，4，5，7］。且體外實驗表明，抑制其表達(dá)可有效逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力［7，8］。說明AQP1與腫瘤發(fā)生進(jìn)展關(guān)系密切。

表1 結(jié)腸癌AQP1表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系例

圖1 AQP1表達(dá)與結(jié)腸癌患者預(yù)后關(guān)系的Kaplan-Meier生存分析結(jié)果

另有研究表明AQP1與膽道腫瘤、胸膜惡性間皮瘤、腎癌等惡性腫瘤的預(yù)后有關(guān)［9-11］，而關(guān)于AQP1與結(jié)腸癌臨床病理特征及預(yù)后關(guān)系的報道尚不多見。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，AQP1在結(jié)腸癌組織中表達(dá)明顯高于癌旁組織，提示AQP1表達(dá)與腫瘤發(fā)生、進(jìn)展有關(guān)，與其他研究結(jié)果類似［2-5］。AQP1與腫瘤的浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及脈管瘤栓情況有關(guān)，AQP1表達(dá)陽性的結(jié)腸癌患者腫瘤浸潤較深、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率較高、脈管瘤栓情況也更為嚴(yán)重，說明AQP1與結(jié)腸癌的侵襲轉(zhuǎn)移行為有關(guān)，與國內(nèi)孔斌等［12］研究的結(jié)果相似。但AQP1促進(jìn)結(jié)腸癌侵襲轉(zhuǎn)移的機制還不明確，有待進(jìn)一步深入研究。本研究進(jìn)行的預(yù)后分析顯示，AQP1表達(dá)陽性的患者生存期較陰性者短，預(yù)后較差。這些結(jié)果說明AQP1與結(jié)腸癌進(jìn)展、轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系，并可作為預(yù)后指標(biāo)。但本研究樣本量不大、隨訪時間也較短，還有待進(jìn)一步擴大研究規(guī)模、延長隨訪時間，對AQP1在結(jié)腸癌中的確切作用予以證實。

本研究發(fā)現(xiàn)AQP1與結(jié)腸癌的臨床病理特征有關(guān)，且對結(jié)腸癌預(yù)后有較好的預(yù)測作用。但本研究樣本量較小，且僅對一些臨床指標(biāo)進(jìn)行了分析，具體機制并不明確。因此，進(jìn)一步研究擴大樣本例數(shù)、延長隨訪時間，并對AQP1進(jìn)行功能和機制研究，對闡明AQP1在結(jié)腸癌中的具體作用、促進(jìn)結(jié)腸癌診治水平進(jìn)步具有重要意義。

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