王庭欣，王光沖

（河北大學(xué)質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督學(xué)院，河北保定 071000）

腐竹營養(yǎng)豐富并且口感清爽，是百姓桌上的家常菜.但是近期總有關(guān)于“不腐的腐竹”的相關(guān)報道，廠家在腐竹中非法添加了違禁添加劑烏洛托品等化工原料，其作用和雕白粉有些相似［1］，這將嚴重影響群眾的健康.在國外有專門的檢測食品接觸材料的烏洛托品含量的標準［2］，中國也明確禁止烏洛托品添加到食品當中或在加工食品過程中使用.現(xiàn)在國內(nèi)已有一些分析烏洛托品的方法［3－8］，但腐竹中的烏洛托品的標準檢測方法仍在探討研究當中.本文依據(jù)高效氣相色譜檢測技術(shù)具有高靈敏度、高選擇性、高效能、準確性好、所需試樣少、應(yīng)用范圍廣、快速方便等優(yōu)點，選擇使用高效氣相色譜法來檢測腐竹中烏洛托品的含量，通過本課題研究為腐竹中烏洛托品的含量檢測提供判別方法，同時為腐竹生產(chǎn)和流通環(huán)節(jié)的質(zhì)量控制提供切實有效的可操作性判定依據(jù).

1 材料與方法

1.1 儀器

高效氣相色譜儀，GC－2014型，日本島津公司，配有氫火焰離子化探測器（FID）；數(shù)控微波萃取儀，南京貝帝實驗儀器有限公司；數(shù)控超聲波清洗儀，KQ－500DE型，昆山市超聲儀器有限公司；電子天平，AR1140型，梅特勒－托利多儀器（上海）有限公司；樣品粉碎機，ZN系列微型高速粉碎機，中南制藥機械廠；恒溫水浴鍋，上海比朗儀器有限公司；高速離心機，中國亞榮有限公司.

1.2 樣品與試劑

樣品：腐竹，河南省內(nèi)黃縣萬利豆業(yè)有限公司提供.

試劑：烏洛托品標準品為質(zhì)量分數(shù)大于99%的優(yōu)級純；三氯甲烷為色譜純；無水乙醇為分析純；石油醚為分析純.所有試劑均由保定市博愛欣試劑公司提供.

1.3 色譜條件

色譜柱：HP－5MS型毛細管柱30m×0.32mm，0.32μm；柱溫條件為200℃；載氣：氮氣，體積分數(shù)大于99.995%，流速為1.0mL／min；進樣方式：分流（分流體積比30∶1），進樣量為1.0μL；汽化室：溫度控制為200℃；

柱溫程序：初始溫度80℃，保持2min，以10℃／min的速率升溫至185℃，保持10min.

1.4 標準溶液配制

配制烏洛托品標準儲備液：準確稱取烏洛托品標準品0.250 0g，以三氯甲烷定容至250mL的容量瓶中，配制成1.000 0g／L的標準儲備液.

配制烏洛托品標準溶液：吸取1.000 0g／L標準儲備液5mL于50mL容量瓶中用三氯甲烷定容，配制成100mg／L的標準溶液，再分別吸取100mg／L的標準溶液1，2，3，4，5mL于5個10mL容量瓶中用三氯甲烷定容，配制成10，20，30，40，50，100mg／L的烏洛托品標準系列溶液.

1.5 樣品的前處理

將腐竹樣品置于粉碎機中充分粉碎，然后用電子天平準確稱取5g樣品，將稱取的樣品倒入具塞錐形瓶中.用量筒量取30mL石油醚倒入加有腐竹樣品的具塞錐形瓶，將塞子塞上放入數(shù)控超聲波清洗機中超聲30min，然后靜止15min后棄去上層清液，再重復(fù)超聲1次棄去上層清液.將殘渣于60℃恒溫水浴鍋中蒸去石油醚，蒸干后在錐形瓶中準確加入60mL三氯甲烷，將其轉(zhuǎn)入數(shù)控微波萃取儀中震蕩30min后過濾，取其濾液30mL于150mL雞心瓶中濃縮近干，然后用三氯甲烷將其移入5mL離心管中并定容，搖勻之后，放入離心機以4 000r／min的轉(zhuǎn)速離心10min，取其上清液進樣.

1.6 回收率和精密度的測定

選取腐竹樣品2份，其中一份加入烏洛托品標準溶液，另一份作為對照.按1.5的方法將腐竹樣品前處理后，在高效氣相色譜儀上測烏洛托品的濃度，再通過公式計算該實驗的回收率和變異系數(shù).

回收率＝（加標樣品質(zhì)量濃度－樣品質(zhì)量濃度）／加入標品的換算質(zhì)量濃度×100%；變異系數(shù)RSD＝標準差／樣品質(zhì)量濃度均值×100%.

2 結(jié)果

2.1 溶劑的選擇和保留時間的測定

由烏洛托品的性質(zhì)可知，烏洛托品極易溶于水、無水乙醇、三氯甲烷等溶劑.但哪種溶劑效果較好，是需要從實驗中鑒別的，因此本實驗先對烏洛托品的溶劑進行了選擇，以水、無水乙醇、三氯甲烷分別做溶劑，所得色譜見圖1～3.

圖1 水為溶劑的烏洛托品色譜Fig.1 Labeling chromatogram of methenamine in water

圖2 無水乙醇為溶劑的烏洛托品色譜Fig.2 Labeling chromatogram of methenamine in anhydrous ethanol

圖3 三氯甲烷為溶劑的烏洛托品色譜Fig.3 Labeling chromatogram of methenamine in chloroform

從實驗所得色譜圖的峰型及實際實驗的檢出限角度考慮，可以看出以三氯甲烷為溶劑的色譜效果較好，因此該實驗采用三氯甲烷為溶劑.且從以三氯甲烷為溶劑的色譜圖（圖3）中可以看出烏洛托品的保留時間為8.920min.

2.2 標準曲線

按標準溶液配制方法配制一系列標準溶液，然后在1.3所述色譜條件下進樣分析，以X軸為濃度，Y軸為峰面積做標準曲線，得到烏洛托品的標準范圍和相關(guān)系數(shù)等指標.所得數(shù)據(jù)如表1，標準曲線如圖4.

表1 烏洛托品的標準曲線實驗數(shù)據(jù)Tab.1 Methenamine experimental data of the standard curve

圖4 烏洛托品的標準曲線Fig.4 Standard curve of methenamine

對表1中實驗數(shù)據(jù)進行處理得烏洛托品標液的線性方程、測試范圍及相關(guān)系數(shù)（表2）.

表2 烏洛托品標液的線性范圍和相關(guān)系數(shù)Tab.2 Linear ranges and correlation coefficient of the standard solution of methenamine

如表2所示，烏洛托品在其測試范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.997 7，標準溶液的色譜圖見圖5.

圖5 烏洛托品標準色譜Fig.5 Labeling chromatogram of the standard methenamine

2.3 回收率

選用腐竹樣品為空白樣品，加入一定量標準溶液，充分混勻，按照本實驗方法進行測定，所得腐竹樣品色譜圖如圖6，加標樣品色譜圖如圖7所示，測得烏洛托品的回收率如表3所示.

圖6 腐竹樣品色譜Fig.6 Labeling chromatogram of the methenamine in samples of Yuba

圖7 加標腐竹樣品色譜Fig.7 Labeling chromatogram of the samples of Yuba add standard substance

表3 測得的腐竹樣品回收率數(shù)據(jù)Tab.3 Recovery rate of methenamine in samples of Yuba

由表3中腐竹樣品所測得的回收率數(shù)據(jù)，可知此樣品前處理及測定方法是準確可行的，依據(jù)此種方法可以對腐竹中的烏洛托品含量進行準確的定量分析.

2.4 精密度

取腐竹樣品按照本實驗方法對其烏洛托品含量進行測定，所測得數(shù)據(jù)如表4所示.

表4 測得的腐竹樣品變異度Tab.4 RSD of methenamine in Yuba samples

由表4腐竹樣品所測得變異度（RSD%）數(shù)據(jù)可知該方法測得腐竹樣品中烏洛托品的含量的變異度為5.00%，其變異度小于10%.說明該方法精密度較好，符合實驗的分析要求.

3 討論

本文對腐竹中烏洛托品的含量檢測技術(shù)進行了研究.該文所示方法的檢出限以3倍信噪比計算為1mg／L.在其線性范圍內(nèi)相關(guān)性可達到0.997 7，回收率為104.02%，變異系數(shù)為5.00%.上述指標均滿足實驗分析要求，因此可認為本文所述方法是準確可靠的，可應(yīng)用于腐竹中烏洛托品的含量檢測.

鑒于對腐竹等食品中烏洛托品的檢測并無國家標準，許多學(xué)者對此進行了探討研究，有關(guān)于腐竹中烏洛托品的檢測論文發(fā)表［9－10］，其樣品前處理中同時用到了三氯甲烷和無水乙醇做烏洛托品的溶劑.本文通過對樣品的前處理的多次研究，對烏洛托品的萃取劑和溶劑做了選擇.本文曾先后用水、無水乙醇、三氯甲烷分別做萃取劑及溶劑來萃取檢測腐竹中的烏洛托品，以保留時間和峰面積等為指標，得出的結(jié)果是用三氯甲烷為萃取劑及溶劑效果最佳.同時與其他所述檢測方法相比，該種方法實驗中只用了三氯甲烷一種溶劑同時作為萃取劑和溶劑，從而有效避免了因更換溶劑所帶來的不必要誤差.本方法具有方法簡便、準確、成本低的優(yōu)點，可以滿足對腐竹中烏洛托品含量的準確檢測，適合于中國質(zhì)監(jiān)部門及食品監(jiān)管的相關(guān)部門對腐竹中是否添加違禁添加劑烏洛托品的鑒別工作，同時也為腐竹生產(chǎn)與流通中的質(zhì)量控制提供了比較準確可靠的判定依據(jù).

［1] 徐建華.專家?guī)阏J識烏洛托品：不腐的腐竹更可怕［N］.中國質(zhì)量報，2011－08－05.

［2] BS DD CEN／TS 13130－21－2005.Materials and articles in contact with foodstuffs－Plastics substances subject to limitation－Determination of ethylenediamine and hexamethylenediamine in food simulants［S］.

［3] 中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局.SN／T 2226—2008進出口動物源性食品中烏洛托品殘留量的檢測方法液相色譜－質(zhì)譜／質(zhì)譜法［S］.北京：中國標準出版社，2009.AQSIQ.SN／T 2226—2008Determination of urotropine residue in foodstuffs of animal origin for import and export.LCMS／MS method［S］.Beijing：Standards Press of China，2009.

［4] 冼燕萍，陳立偉，羅東輝，等.UPLC－MS／MS測定腐竹和米粉中的烏洛托品［J］.江南大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2012，11（1）：78－82.XIAN Yanping，CHEN Liwei，LUO Donghui，et al.Determination of urotropine residue in dried beancurd stick and rice flour by ultra performance liquid chromatography－electrospray ionization tandem mass spectrometry［J］.Journal of Southern Yangtze University：Natural Science Edition，2012，11（1）：78－82.

［5] 陳方平，張銀中，陳金生，等.離子電極法測定烏洛托品的新方法［J］.鄭州工業(yè)高等?？茖W(xué)校學(xué)報，2001，17（4）：21－22.CHEN Fangping，ZHANG Yinzhong，CHEN Jinshen，et al.New method on measuring the content of urotropine by electrolyticion electrode method［J］.Journal of Zhengzhou College，2001，17（4）：21－22.

［6] 辛志偉，臧志和，趙小玉，等.分光光度法測定烏洛托品的含量研究［J］.數(shù)理醫(yī)藥學(xué)雜志，2001，14（6）：569.XIN Zhiwei，ZANG Zhihe，ZHAO Xiaoyu，et al.Spectrophotometric determination of methenamine content［J］.Journal of Mathematical Medicine，2001，14（6）：569.

［7] 李東剛，鞠福龍，劉曉玲，等.氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法測定飼料級氯化膽堿中六次甲基四胺［J］.理化檢驗：化學(xué)分冊，2009，45（10）：1235－1236.LI Donggang，JU Fulong，LIU Xiaoling，et al.Determination of methenamine in feed grade choline chloride by GC－MS method［J］.Physical Testing and Chemical Analysis Part B：Chemical Analgsis，2009，45（10）：1235－1236.

［8] 魏小平.一種檢測微量烏洛托品的新方法［J］.桂林工學(xué)院學(xué)報，2005，25（4）：556－558.WEI Xiaoping.New method for polarographic determination of micro amount of methenamine based on nitrosation reaction［J］.Journal of Guilin University of technology，2005，25（4）：556－558.

［9] 黃國春.氣相色譜法測定腐竹中烏洛托品含量的研究［J］.廣西輕工業(yè)，2008（6）：26－27.HUANG Guochun.Research of the methenamine content in yuba by GC［J］.Guangxi Journal of Light Industry，2008（6）：26－27.

［10] 李薇，陳天科，徐暉，等.烏洛托品的氣相色譜分析［J］.分析儀器，2007（3）：29－31.LI WEI，CHEN Tianke，XU Hui，et al.Gas chromatographic analysis of urotropine［J］.Analtical Instrumentation，2007（3）：29－31.