林仙軍，穆 琳，呂偉軍，周芷錦

(浙江省獸藥監(jiān)察所，杭州 310020)

麻保沙星(Marbofloxacin，MBF)是一種動(dòng)物專用的新型氟喹諾酮類抗菌藥［1－2］，其化學(xué)名為9－氟－2，3－二氫－3－甲基－10－(4－甲基－1－哌嗪)－7 － 氧 －7H － 吡啶 －［3，2，1 －ij］［4，1，2］－苯并噁二嗪－6－羧酸，分子式為C17H19FN4O4，分子量362，為第三代喹諾酮類藥物，由瑞士羅氏公司研制，并于1995年首次在英國(guó)上市，目前僅批準(zhǔn)作為寵物藥使用于犬和貓。麻保沙星具有抗菌譜廣，抗菌活性強(qiáng)，體內(nèi)分布廣泛，耐受性好，與其他抗菌藥物無交叉耐藥性等特征，其生物利用度高，毒性低，較安全，被列為動(dòng)物專用藥。目前，測(cè)定麻保沙星含量的方法有高效毛細(xì)管電泳法［3］、HPLC/MS法［4］和梅雪珍等報(bào)道的麻保沙星在山羊體內(nèi)的藥物動(dòng)力學(xué)［5］以及黃顯會(huì)等報(bào)道的麻保沙星在雞體內(nèi)的生物利用度及藥物動(dòng)力學(xué)［6］，均為測(cè)定血漿中麻保沙星殘留的反相高效液相色譜法，未見使用HPLC法測(cè)定麻保沙星溶液的含量。為了制定科學(xué)合理的質(zhì)量控制方法，研究建立了HPLC法測(cè)定麻保沙星溶液含量的方法，為麻保沙星溶液的質(zhì)量監(jiān)控提供參考。

1 材料

1．1 主要儀器 Waters2695高效液相色譜儀，配Waters2487紫外檢測(cè)器(美國(guó)Waters公司);TU－1810紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司);XS－205電子天平(Mettler公司);SL502 N電子天平(上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司);DELTA 320酸度計(jì)(Mettler公司);KQ－500E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1．2 主要試劑 乙腈，甲醇均為色譜純，默克公司;磷酸為優(yōu)級(jí)純，浙江三鷹化學(xué)試劑有限公司;高氯酸鈉為分析純，上海市國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;醋酸銨為色譜純，SIGMA公司;水為超純水。

1．3 對(duì)照品和供試品 麻保沙星對(duì)照品，批號(hào)為R090501，含量為99．7%;麻保沙星溶液，規(guī)格為100mL:2．5 g，批號(hào)為090201、090202 和090203，均由浙江國(guó)邦制藥有限公司提供。

2 方法與結(jié)果

2．1 波長(zhǎng)的選擇 取麻保沙星適量，用甲醇溶解并稀釋制成5μg/mL的溶液，在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。結(jié)果麻保沙星在291 nm波長(zhǎng)處有最大吸收(圖1)，故檢測(cè)波長(zhǎng)選擇為291 nm。

圖1 濃度為5μg/m L麻保沙星對(duì)照品溶液紫外光吸收?qǐng)D譜

2．2 對(duì)照品溶液的制備 取麻保沙星對(duì)照品適量，用15%、23%、30%和40%甲醇溶液超聲溶解并稀釋制成每1 mL中含麻保沙星0．1 mg的溶液，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

2．3 麻保沙星供試品溶液的制備及稀釋溶液的確定 精密量取麻保沙星溶液適量，用15%、23%、30%和40%甲醇溶液超聲溶解并稀釋制成每1 mL中含麻保沙星0．1 mg的溶液，搖勻，作為供試品溶液。結(jié)果23%甲醇溶液峰形最好，故選擇23%甲醇溶液作為稀釋溶液。

2．4 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱(Waters symmetry C18，5μm，4．6 mm×250 mm)，以醋酸銨高氯酸鈉溶液(取醋酸銨4．0 g和高氯酸鈉7．0 g，加水1300 mL使溶解，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至2．2)－乙腈(85∶15，V/V)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)291 nm，流速1．0 mL/min，柱溫40℃，進(jìn)樣量10μL。照2．2項(xiàng)和2．3項(xiàng)下的方法分別制備供試品溶液和對(duì)照品溶液，進(jìn)樣分析，色譜圖見圖2。

圖2 麻保沙星色譜圖(a、對(duì)照品 b、樣品)

2．5 線性關(guān)系考察 取麻保沙星對(duì)照品適量，用23%甲醇溶液超聲溶解并稀釋制成每1 mL中含麻保沙星1 mg的溶液，搖勻，作為對(duì)照品貯備液。分別取貯備液0．25、0．5、1、2、5、10mL，置50mL 容量瓶，用23%甲醇溶液稀釋至刻度，濃度分別為5、10、20、40、100、200 μg/mL，依照濃度由小到大的次序，按上述色譜條件進(jìn)樣分析，以系列標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖3)，得線性方程 Y=4．68 ×104X+3．64 ×105，r=0．9998，結(jié)果表明麻保沙星在5～200μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖3 麻保沙星標(biāo)準(zhǔn)曲線

2．6 精密度試驗(yàn) 取麻保沙星對(duì)照品溶液，按上述色譜條件重復(fù)連續(xù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣量為10μL，測(cè)定 峰 面 積 分 別 為 2556256、2514556、2537886、2535446、2516895 和 2527081，RSD 為 0．6%，表明此方法的儀器精密度符合要求。

2．7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取批號(hào)為090201的麻保沙星溶液依法配制供試品溶液，分別于0、2、4、6、12和24 h進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果，麻保沙星溶液的含量分別為102．5%、102．3%、102．1%、102．0%、102．0% 和101．8%，RSD為0．2%，表明供試品溶液穩(wěn)定性良好。

2．8 加樣回收率試驗(yàn) 分別稱取麻保沙星原料0．5101 、1．2589和2．5145 g于50 mL 量瓶中，用二甲基甲酰胺溶解并稀釋至刻度，使成為10．20 mg/mL、25．18 mg/mL和50．29 mg/mL的加樣樣品，依法進(jìn)行測(cè)定。每個(gè)濃度連續(xù)3 d，每次做5份平行樣，計(jì)算測(cè)定濃度、批內(nèi)變異系數(shù)和批間變異系數(shù)。結(jié)果，方法的平均回收率為98．3% ～100．3%，批內(nèi)變異系數(shù)為0．4% ～1．0%，批間變異系數(shù)為0．4% ～0．9%。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

3 討論與小結(jié)

由于企業(yè)所提供的麻保沙星原料有粉末狀和顆粒狀兩種，檢測(cè)過程中發(fā)現(xiàn)，在稱樣量接近和溶劑相同的情況下，粉末狀的麻保沙星易溶解，而顆粒狀的麻保沙星很難溶解，甚至不能溶解，但是，當(dāng)把顆粒磨成粉末時(shí)，則易溶解。因此，在加樣回收率試驗(yàn)中所加的麻保沙星為粉末狀或顆粒磨成的粉狀，以確保試驗(yàn)準(zhǔn)確可靠。

本文建立了HPLC法測(cè)定麻保沙星溶液含量的方法，方法平均回收率為98．3% ～100．3%，批內(nèi)變異系數(shù)為0．4% ～1．0%，批間變異系數(shù)為0．4% ～0．9%。結(jié)果表明，該方法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，適用于麻保沙星溶液的含量測(cè)定。

［1］ 邱銀生，吳 佳．動(dòng)物專用氟喹諾酮類藥物研究進(jìn)展簡(jiǎn)介［J］．中國(guó)獸藥雜志，1998，32(3):46 －48．

［2］ 王志強(qiáng)，陳杖榴．動(dòng)物專用氟喹諾酮為抗菌新藥——麻保沙星［J］．中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2001，20(4):38 －41．

［3］ 李志偉，崔 哲，劉 波，等．高效毛細(xì)管電泳法用于麻保沙星的測(cè)定［J］．河北科技大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，32(1):75 －77，81．

［4］ 沈慧芳，張燕紅，蘭仁華，等．α－三連噻吩和麻保沙星的HPLC－MS分析［J］．華南理工大學(xué)學(xué)報(bào)，2001，29(11):48－49．

［5］ 梅雪珍，李引乾，龐利娜，等．麻保沙星在山羊體內(nèi)的藥物動(dòng)力學(xué)［J］．西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2009，18(3):38 －41．

［6］ 黃顯會(huì)，陳杖榴，張淑婷，等．麻保沙星在雞體內(nèi)的生物利用度及藥物動(dòng)力學(xué)［J］．中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2002，22(3):279 －281．