吳梅青，陳丹

(湘潭職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖南 湘潭 411102)

HPLC測(cè)定湘蓮蓮子心中蓮心堿的含量△

吳梅青*，陳丹

(湘潭職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖南 湘潭 411102)

目的：采用HPLC測(cè)定了6個(gè)不同產(chǎn)地的湘蓮蓮子心中蓮心堿的含量。方法：色譜柱為ODS C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相為乙腈-0.015 mol·L-1十二烷基磺酸鈉-冰醋酸(56∶43∶1)；體積流量為1 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)為282 nm。結(jié)果：蓮心堿在質(zhì)量濃度0.011 0～0.121 0 mg·mL-1與峰面積呈良好的線性關(guān)系，平均回收率99.14%，RSD=1.85%。湖南6個(gè)不同產(chǎn)地的湘蓮蓮子心生物堿的含量均在0.21%～0.32%。結(jié)論：測(cè)定的6個(gè)產(chǎn)地湘蓮蓮子心中蓮心堿的含量均大于0.2%，符合《中國(guó)藥典》2010版規(guī)定的要求，以產(chǎn)自湘潭的蓮子心中蓮心堿的含量最高，為0.32%。

HPLC法；湘蓮；蓮子心；蓮心堿

蓮子心為睡蓮科植物蓮NelumbonuciferaGaerth.的成熟種子中的干燥幼葉及胚根，具有清心安神，交通心腎，澀精止血的功能。用于熱入心包，神昏譫語(yǔ)，心腎不交，失眠遺精，血熱吐血[1]。蓮子心中生物堿包括蓮心堿、甲基蓮心堿、異蓮心堿等，是蓮子心的主要藥效成分[2]，具有降血壓、抗心律失常、抗血小板聚集、抗脂質(zhì)過氧化及清除自由基、抗癌等藥理作用[3-5]?！跋嫔彙保址Q寸三蓮，在歷史上被稱為“貢蓮”，種植歷史悠久，產(chǎn)量高，質(zhì)量?jī)?yōu)良，馳名中外，飲譽(yù)古今。采用HPLC測(cè)定6個(gè)不同產(chǎn)地湘蓮蓮子心中蓮心堿的含量，對(duì)湘蓮蓮子心中蓮心堿的含量進(jìn)行了分析。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀(島津LC-10ATVP)；島津SPD210Avp紫外可見檢測(cè)器；分析天平(十萬(wàn)分之一，賽多利斯BP211D)。

1.2 試藥

蓮子心購(gòu)于湖南各地，經(jīng)鑒定為蓮NelumbonuciferaGaerth.種子干燥的幼葉和胚根；蓮心堿高氯酸鹽對(duì)照品(批號(hào)：111686-201101，購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院)；水為超純水；乙醇為95%醫(yī)用乙醇；甲醇、乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件[1]

色譜柱為ODS C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相為乙腈-0.015 mol·L-1十二烷基磺酸鈉-冰醋酸(56∶43∶1)；體積流量為1 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)為282 nm；溫度為室溫；進(jìn)樣量為10 μL。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液 精密稱取蓮心堿高氯酸鹽對(duì)照品11.000 0 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，制成0.220 0 mg·mL-1的對(duì)照品貯備溶液。精密吸取貯備溶液5 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，制成濃度為0.110 0 mg·mL-1的對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 取不同產(chǎn)地的蓮子心粉末(過四號(hào)篩)適量，精密稱定，精密加入2%鹽酸甲醇溶液25 mL，稱定重量，加熱回流30 min，放冷，再稱定重量，用2%鹽酸甲醇溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5 mL，置10 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，用0.22 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

分別吸取蓮心堿對(duì)照品溶液及供試品溶液各10 μL注入液相色譜儀。在此條件下，蓮心堿峰達(dá)到基線分離，理論板數(shù)以蓮心堿峰計(jì)不低于5 000，HPLC圖見圖1、2。

圖1 蓮心堿對(duì)照品的HPLC圖

圖2 蓮子心供試品溶液的HPLC圖

2.4 線性關(guān)系考察

分別精密吸取2.2.1項(xiàng)下對(duì)照品溶液1，3，5，7，9，11 μL進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。以峰面積Y為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量X為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程:Y=1.4×106X+1 339.3，r=0.999 5。結(jié)果表明蓮心堿在進(jìn)樣量范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取2.2.1項(xiàng)下蓮心堿對(duì)照品溶液10 μL，按2.1色譜條件下，連續(xù)進(jìn)樣6次并測(cè)定峰面積，蓮心堿的RSD=0.31%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取湘潭產(chǎn)寸三蓮蓮子心粉末6份，按2.2.2項(xiàng)下方法操作，在上述色譜條件下，各取10 μL進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。計(jì)算得蓮心堿的平均含量為0.32%，RSD=0.95%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液10 μL，按上述色譜條件，分別于制備后0，2，3，8，10，12 h進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。計(jì)算得蓮心堿RSD=1.04%，表明溶液中蓮心堿在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

稱取已知含量的蓮子心粉末(蓮心堿含量為0.32%)0.5 g，精密稱定，共6份，分別精密加入已知含量的蓮心堿對(duì)照品貯備溶液5 mL，每份按2.2.2項(xiàng)下方法操作，在上述色譜條件下，各取10 μL注入高效液相色譜儀，依法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

注：蓮心堿對(duì)照品加入量均為1.100 0 mg

2.9 樣品含量測(cè)定

分別精密吸取各供試品溶液10 μL注入高效液相色譜儀，記錄色譜峰面積，計(jì)算蓮子心中蓮心堿的含量。6個(gè)不同產(chǎn)地的蓮子心中蓮心堿的含量測(cè)定結(jié)果見表2。

3 討論

文中采用高效液相色譜法對(duì)湘蓮蓮子心中的蓮心堿堿含量進(jìn)行了測(cè)定。湘蓮品種主要有湘潭寸三蓮、雜交蓮，華容蔭白花，漢壽水魚蛋，耒陽(yáng)大葉帕，桃源九溪江、衡陽(yáng)的烏蓮等。經(jīng)測(cè)定，6個(gè)不同產(chǎn)地的湘蓮蓮子心中蓮心堿的含量均大于0.2%，符合《中國(guó)藥典》2010版規(guī)定的要求。6個(gè)產(chǎn)地的蓮子心中蓮心堿的含量相差不大，其中湘潭產(chǎn)蓮子心中蓮心堿的含量最高，為0.32%。

在對(duì)蓮子心進(jìn)行含量檢測(cè)時(shí)，《中國(guó)藥典》2010版規(guī)定是以蓮心堿含量作為蓮子心質(zhì)量控制的指標(biāo)，但是蓮子心異蓮心堿、甲基蓮心堿同樣具有明確的藥理作用[6-7]。從6個(gè)供試品的譜圖中可以看出蓮子心中異蓮心堿和甲基蓮心堿的峰面積都要大于蓮心堿的峰面積。如果能以蓮心堿、異蓮心堿、甲基蓮心堿的總含量共同評(píng)價(jià)蓮子心的質(zhì)量，將能更全面地評(píng)價(jià)蓮子心質(zhì)量。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].一部.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:256-257.

[2] 何曉娟，孫長(zhǎng)海，于江華，等.HPLC測(cè)定不同產(chǎn)地蓮子心中蓮心堿、異蓮心堿、甲基蓮心堿[J].中草藥，2010，41(5)：834-836.

[3] 張弦，潘揚(yáng).植物蓮中生物堿類成分的研究概況[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2002，18(6)：382-384.

[4] 謝綱，曾建國(guó).蓮子心的主要成分和藥理作用研究進(jìn)展[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，13(8)：384-386.

[5] 董蘭，鄭申聲，陳昌國(guó).蓮心總堿的提取分離及其抗氧化性研究[J].食品工業(yè)科技，2011，7(21)：329-331.

[6] 陳靈駿，羅順德.蓮心堿抗血小板聚集和抗凝血作用[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2011，31(15)：1257-1259.

[7] 唐小卿，曹建國(guó).甲基蓮心堿的藥理作用[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2004，20(1)：8.

DeterminationofLiensinineinPlumulaNelumbinisfromHunanProvincebyHPLC

WU Mei-qing*，CHEN Dan

(XiangtanPolytechnicalCollege，Xiangtan411102，China)

Objective:To determine Liensinine in Nelumbinis Plumula from six different areas of Hunan province by HPLC method.Methods：The ODS C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)column was used with the mobile phase of acetonitrile-0.015 mol·L-1Sodium dodecylsulphate-acetic acid(56∶43∶1)at detection wavelength of 282 nm.The flow rate is 1 mL·min-1.Results：The linear ranges of liensinine was 0.011 0 ～ 0.121 0 mg·mL-1.The average recovery was 99.65%，and RSD was 0.76%.The Liensinine content in Nelumbinis Plumula from six different areas were 0.21%～0.32%.Conclusion：The Liensinine content in Nelumbinis Plumula from six different areas were all > 0.2%，according with the regulation of Chinese Pharmacopoeia which was published in 2010.The liensinine in Nelumbinis Plumula from Xiangtan was 0.32% and it was the highest in the six samples.

HPLC； Hunan lotus； Plumula Nelumbinis； Liensinine

2013-02-15)

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湖南省教育廳基金研究項(xiàng)目(11C1256)

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吳梅青，E-mail:wmq0519@sina.com