朱麗紅，賀文娟，白璐，唐志書

(陜西中醫(yī)學(xué)院，陜西 咸陽(yáng) 712046)

花生衣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的初步研究

朱麗紅，賀文娟，白璐，唐志書*

(陜西中醫(yī)學(xué)院，陜西 咸陽(yáng) 712046)

目的：擬制定花生衣的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)并對(duì)其進(jìn)行薄層鑒別和含量測(cè)定，為藥用植物資源的開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。方法：測(cè)定8批花生衣的水分，灰分，酸不溶性灰分，水浸出物，醇浸出物；用薄層色譜法進(jìn)行定性鑒別；用高效液相法測(cè)定其兒茶素含量。結(jié)果：花生衣中水分不得超過(guò)(9.492 5±0.148 0)%，灰分不得超過(guò)(2.397 5±0.078 4)%，酸不溶性灰分不得超過(guò)(0.257 5±0.016 6)%，水浸出物不得超過(guò)(11.85±0.057 9)%，醇浸出物不得超過(guò)(25.43±0.234 5)%，薄層色譜法可用于鑒別花生衣，高效液相色譜法測(cè)定的兒茶素含量穩(wěn)定。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，為建立花生衣藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了依據(jù)。

花生衣；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；兒茶素；薄層鑒別；高效液相色譜法

花生衣來(lái)源于豆科落花生屬植物落花生ArachishypogaeaL.的種皮，味甘、微苦、澀，性平，有養(yǎng)血止血，散瘀消腫之功效[1]?；ㄉ录仁鞘称罚质侵兴?。歷版《中國(guó)藥典》均未收載花生衣，為了制訂花生衣藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，更好地開發(fā)和利用我國(guó)豐富的花生衣資源，筆者就花生衣樣品的水分、灰分、酸不溶灰分、水浸出物、醇浸出物進(jìn)行測(cè)定。臨床報(bào)道花生衣對(duì)多種出血癥有明顯的止血效果，有藥廠以花生衣作為原料，提取凝血粉、止血注射液和凝血糖漿等[2]。其中止血機(jī)理及有效成分并不十分清楚，但文獻(xiàn)報(bào)道花生衣中含有大量黃酮類成分，而有藥理實(shí)驗(yàn)表明其中的兒茶素可使離體兔耳血管收縮，能減低毛細(xì)血管通透性及脆性等[3]，這與花生衣的止血作用是一致的，所以筆者認(rèn)為兒茶素為花生衣止血有效成分。為此實(shí)驗(yàn)以兒茶素為對(duì)照品，開展薄層色譜定性鑒別和HPLC含量測(cè)定。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Waters2600高效液相測(cè)譜儀；電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)；電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司)；電熱套；索氏提取器；水浴鍋。

1.2 試藥

8批花生衣購(gòu)于陜西省藥材市場(chǎng)，產(chǎn)地信息見表1。兒茶素對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110877-201102)。甲醇、乙腈為色譜純(Fisher公司)；其余試劑均為分析純；水為超純水。

表1 花生衣藥材樣品產(chǎn)地信息

2 方法與結(jié)果

2.1 水分測(cè)定

取花生衣粉末(過(guò)二號(hào)篩)約2 g，精密稱定，按照2010年版《中國(guó)藥典》一部附錄IX H項(xiàng)下水分測(cè)定第一法測(cè)定，結(jié)果見表2。

2.2 灰分測(cè)定

2.2.1 總灰分測(cè)定 取花生衣藥材粉末(過(guò)二號(hào)篩)約3 g，精密稱定，按照2010年版《中國(guó)藥典》一部附錄IX K項(xiàng)下總灰分法測(cè)定,結(jié)果見表2。

2.2.2 酸不溶性灰分測(cè)定 取2.2.1項(xiàng)下所得灰分，按照2010年版《中國(guó)藥典》一部附錄IXK項(xiàng)下酸不溶性灰分測(cè)定，結(jié)果見表2。

2.3 水浸出物測(cè)定

按照2010年版《中國(guó)藥典》一部附錄水溶性浸出物測(cè)定法項(xiàng)下的冷浸法測(cè)定，結(jié)果見表2。

2.4 醇浸出物測(cè)定

照水溶性浸出物測(cè)定法測(cè)定，結(jié)果見表2。

表2 花生衣水分、灰分、酸不溶性灰分、浸出物含量測(cè)定 /%

2.5 薄層色譜的定性鑒別

2.5.1 供試品溶液的制備 取上述8批藥材粉末(過(guò)二號(hào)篩)各1 g，加甲醇30 mL，精密稱重，超聲處理30 min放冷至室溫，用甲醇補(bǔ)足減失重量，濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為供試品溶液[4]。

2.5.2 對(duì)照品溶液的制備 取兒茶素對(duì)照品加甲醇制成0.1 mg·mL-1的對(duì)照品溶液。

2.5.3 薄層鑒別 吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液各3 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑制成的硅膠G板上，以二氯甲烷-甲醇-甲酸(4∶1∶1)[5]為展開劑，預(yù)飽和15 min，展開，取出晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，于105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。可見供試品與對(duì)照品在同一位置顯相同顏色的斑點(diǎn)，結(jié)果見圖1。

1.兒茶素對(duì)照品；2～9.1～8號(hào)供試品圖1 花生衣薄層鑒別圖

2.6 兒茶素含量測(cè)定

2.6.1 兒茶素對(duì)照品溶液的制備 精密稱取兒茶素對(duì)照品10 mg，置于50 mL量瓶中，加入50%甲醇溶解并定容至刻度，即得濃度為0.2 mg·mL-1的對(duì)照品溶液[6]。

2.6.2 供試品溶液的制備 稱取花生衣粉末(過(guò)三號(hào)篩)1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入50%甲醇15 mL，稱定重量，于80 ℃水浴加熱回流2次，每次1 h，濾過(guò)，合并濾液。將濾液于水浴上蒸干，用50%甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，定容至刻度，0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為供試品溶液[4]。

2.6.3 色譜條件 色譜柱：Thermo BDS Hypersil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-水(10∶90)；檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm；流速：1 mL·min-1；柱溫：30 ℃。精密吸取對(duì)照品及供試品溶液各10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，見圖2。花生衣中的樣品峰與兒茶素中的峰出峰時(shí)間一致，都在17 min左右出峰。

A.兒茶素對(duì)照品 B.花生衣樣品圖2 花生衣樣品與對(duì)照品HPLC圖

2.6.4 方法學(xué)考察

2.6.4.1 線性關(guān)系考察 精密量取兒茶素對(duì)照品溶液，分別加50%甲醇稀釋成30，90，120，150,180，210 μg·mL-1的對(duì)照品溶液。分別精密吸取上述溶液各10 μL注入液相色譜儀測(cè)定，以兒茶素進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，測(cè)得的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?；貧w方程為Y=550 085X+2 085.9(r=0.999 6)，結(jié)果表明兒茶素在0.3～2.8 μg呈良好線性關(guān)系。

2.6.4.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取濃度為0.2 mg·mL-1的兒茶素對(duì)照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，結(jié)果RSD=1.23%，表明儀器精密度良好。

2.6.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液，分別于0，3，6，12，18 h時(shí)進(jìn)樣10 μL，測(cè)定峰面積，結(jié)果RSD=0.94%，表明樣品溶液在18 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.6.4.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取花生衣粉末6份，按供試品溶液的制備方法制備，測(cè)定樣品峰面積，結(jié)果兒茶素RSD=0.81%，表明重復(fù)性良好。

2.6.4.5 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的樣品(兒茶素含量：0.99 mg·g-1)6份，分別加入兒茶素對(duì)照品溶液(0.2 mg·mL-1)1，3，5，7，9 mL，按樣品測(cè)定方法測(cè)定兒茶素含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表3。

表3 兒茶素加樣回收率測(cè)定

2.6.5 樣品含量測(cè)定 分別精密稱取8份花生衣粗粉各1 g，精密稱定，按2.6.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依2.6.3項(xiàng)下色譜條件及系統(tǒng)適用性，精密吸取對(duì)照品溶液及供試品溶液各10μL注入液相色譜儀，記錄峰面積，計(jì)算兒茶素的含量，結(jié)果見表4。

表4 8份花生衣中兒茶素含量測(cè)定

3 小結(jié)

花生衣8批樣品中水分含量最高的為(9.66±0.145 2)%，最低的為(8.18±0.134 5)%；總灰分量最高的為(3.40±0.065 4)%，最低的為(1.93±0.078 4)%。酸不溶性灰分最高的為(0.32±0.008 7)%，最低的為(0.21±0.123 0)%；水浸出物含量最高為(12.92±0.063 0)%，最低為(10.78±0.891 0)%，醇浸出物含量最高為(26.98±0.212 2)%，最低為(23.21±0.240 1)%。

含量測(cè)定中所采用的色譜條件，能較好地分離花生衣中的各色譜峰，且基線平穩(wěn)，峰型尖銳，故可用于花生衣中兒茶素含量測(cè)定的色譜條件。

4 討論

花生衣樣品的水分、灰分和浸出物含量測(cè)定結(jié)果有一定的差異，這與樣品的栽種、采收、加工、貯藏條件有一定的關(guān)系。根據(jù)表1結(jié)果，建議花生衣藥材的各項(xiàng)指標(biāo)范圍可控制在：水分不超過(guò)10%，總灰分不得超過(guò)4.0%，酸不溶性灰分不得超過(guò)0.3%，水溶性浸出物量不低于13.0%，醇溶性浸出物量不低于27.0%，此結(jié)論可作為制訂花生衣藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的參考依據(jù)。

薄層色譜鑒別表明8批花生衣樣品中，供試品與對(duì)照品所顯斑點(diǎn)一致，該法專屬性強(qiáng)，且多次重復(fù)效果較好，故此法可作為花生衣藥材的定性鑒別標(biāo)準(zhǔn)。

8批的花生衣藥材兒茶素含量在0.878～1.183 mg·g-1，建議花生衣藥材兒茶素含量以不低于0.8 mg·g-1為宜。實(shí)驗(yàn)首次探討了花生衣中兒茶素含量的測(cè)定方法，為合理開發(fā)利用花生衣資源提供了科學(xué)依據(jù)。

[1] 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典[M].下冊(cè).上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1975：2322.

[2] 朱立波,戴榮興.血寧糖漿質(zhì)量控制研究[J].中成藥,2003,25(11)：934-936.

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[5] 曹丹,楊莉，侴桂新，等.苦楝皮藥材薄層色譜鑒別[J].中藥材,2010,33(6)：887-888.

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StudyonQualitySpecificationofPeanutSkin

ZHU Li-hong，HE Wen-juan，BAI Lu，TANG Zhi-shu*

(ShaanxiUniversityoftraditionalChinesemedicine，xianyang712046China)

Objective：To provide scientific basis for the utilization and development of Peanut Skin by setting up the quality control specification.Methods：The extract of Peanut Skin was examined，ash was determined，and the bioactive constituents were analyzed by TLC and HPLC analysis was applied for catechin quatitative determination.Results：10 batches of peanut skin moisture，water extract，alcohol extract，total ash and acid-insoluble ash were determined；the active ingredient catechin were qualitatively identified by TLC，and quantitative dtermined by HPLC.Conclusion：The established method can be used for the quality control of Peanut Skin.

Peanut Skin；Quality specification；Catechin；TLC；HPLC

2013-03-12)

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唐志書，Tel：(029)38183513，E-mail：tzs6565@163.com