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        丹鹿通督片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

        2013-09-26 02:35:44李海燕趙雪艷
        中醫(yī)研究 2013年6期
        關(guān)鍵詞:甲苷薄層丹參

        李海燕,趙雪艷

        (1.河南省食品藥品檢驗(yàn)所,河南鄭州450003;2.河南羚銳制藥股份有限公司,河南信陽(yáng)464000)

        丹鹿通督片由丹參、鹿角膠、黃芪、延胡索、杜仲等藥材組成,具有活血通督、益腎通絡(luò)的功效,用于腰椎管狹窄癥(黃韌帶增厚、椎體退行性改變、陳舊性椎間盤(pán)突出)屬瘀阻督脈型所致的間歇性跛行、腰腿疼痛、活動(dòng)受限、下肢酸脹疼痛、舌質(zhì)暗或有瘀斑等癥的治療。丹鹿通督片收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)》[1]第85冊(cè),原標(biāo)準(zhǔn)操作較繁瑣,且不能對(duì)藥品進(jìn)行有效質(zhì)量控制。筆者根據(jù)處方所含藥味的化學(xué)成分及劑型特點(diǎn),研究修訂了丹參、黃芪的薄層色譜鑒別,修訂了黃芪中黃芪甲苷[2]的含量測(cè)定方法,全面提高了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),以便更好地控制藥品質(zhì)量。

        1 藥品、試劑與儀器

        丹鹿通督片,河南羚銳制藥股份有限公司產(chǎn)品,批號(hào) 1202201,1202202,120214。丹參、黃芪、延胡索對(duì)照藥材(批號(hào)依次為 120923-200610,120974 -200609,120928-200604)及丹參酮ⅡA、延胡索乙素對(duì)照品(批號(hào)依次為110766-200518,110726-200610)、黃芪甲苷對(duì)照品(批號(hào)110781-200613,供含量測(cè)定用),均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供;甲醇、乙腈為色譜純;水為樂(lè)百氏純凈水;其他試劑均為分析純。Waters 2690高效液相色譜儀-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(Alltech ELSD 2000ES),產(chǎn)地美國(guó);硅膠G預(yù)制薄層板,青島海洋化工廠產(chǎn)品;KQ-300型超聲波清洗機(jī),功率 250 W,頻率40 kHz,昆山市超聲儀器有限公司產(chǎn)品。

        2 方法與結(jié)果

        2.1 薄層色譜鑒別

        2.1.1 丹 參

        方法參照文獻(xiàn)[3]。取本品研細(xì),稱取2 g,加乙醚20 mL,超聲提取20 min,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)蛹状? mL使溶解,作為供試品溶液。取處方中除丹參外的其他藥物,按丹鹿通督片制備工藝制備,制成缺丹參陰性對(duì)照藥,同法制成缺丹參陰性對(duì)照溶液。另取丹參對(duì)照藥材2 g,同法制成對(duì)照藥材溶液。再取丹參酮ⅡA對(duì)照品,加甲醇制成每1毫升含0.5 mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn),吸取上述3種溶液各5~10 μL,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以石油醚(60~90℃)—乙酸乙酯(10∶2)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干。供試品色譜中,在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn);缺丹參陰性對(duì)照品色譜中,在相對(duì)應(yīng)的位置無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。

        圖1 丹參薄層鑒別色譜圖

        2.1.2 黃 芪

        方法參照文獻(xiàn)[4]。取本品20片,除去包衣,研細(xì),稱取2 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中;精密加入甲醇50 mL,稱定質(zhì)量;加熱回流2 h,取出,放冷,再稱定質(zhì)量,用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量;搖勻,濾過(guò),精密量取續(xù)濾液25 mL,蒸干;殘?jiān)铀?0 mL微熱使溶解,用水飽和正丁醇振搖提取4次,每次30 mL,合并正丁醇液;用氨試液洗滌2次,每次50 mL;棄去氨液,正丁醇液蒸干,殘?jiān)蛹状既芙獠⒍ㄈ葜? mL,搖勻,作為供試品溶液。取處方中除黃芪外其他藥物,按丹鹿通督片制備工藝制成缺黃芪陰性對(duì)照藥,同法制成缺黃芪陰性對(duì)照溶液。另取黃芪對(duì)照藥材1 g,按供試品溶液制備方法制成對(duì)照藥材溶液。再取黃芪甲苷對(duì)照品,加甲醇制成每1毫升含0.5 mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn),吸取供試品溶液10 μL、對(duì)照藥材及對(duì)照品溶液各3 μL,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以乙酸乙酯-丙酮-水(5∶5∶1)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,噴以體積分?jǐn)?shù)10%硫酸乙醇溶液,置105℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中,在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn),缺黃芪陰性對(duì)照色譜中,在相對(duì)應(yīng)的位置無(wú)干擾。見(jiàn)圖2。

        圖2 黃芪薄層鑒別色譜圖

        2.2 含量測(cè)定

        2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

        色譜柱為 Phenomenex Luna C18柱(4.6 mm ×250 mm,5 μm),柱溫為 35 ℃,流動(dòng)相為乙腈 - 水(34∶66)[5],體積流量為 1 mL/min,載氣體積流量2.3 L/min,供試品進(jìn)樣體積 15 μL,對(duì)照品進(jìn)樣體積10 μL 及 20 μL,蒸發(fā)光散射檢測(cè)器漂移管溫度105℃。理論塔板數(shù)按黃芪甲苷峰計(jì)算應(yīng)不低于6 000。色譜見(jiàn)圖3。

        2.2.2 溶液的制備

        對(duì)照品溶液:取黃芪甲苷對(duì)照品適量,精密稱定,加甲醇制成每1毫升含0.2 mg的溶液,即得。供試品溶液:取2.1.2項(xiàng)下的供試品溶液作為供試品溶液。陰性溶液:按丹鹿通督片處方中比例稱取除黃芪外的其他藥物,按丹鹿通督片制備工藝制備缺黃芪陰性對(duì)照藥,按供試品溶液制備方法制得缺黃芪陰性對(duì)照品溶液。

        圖3 丹鹿通督片高效液相色譜圖

        2.2.3 線性關(guān)系考察

        精密吸取黃芪甲苷對(duì)照品溶液(0.195 5 g/L)5,7,10,15,25,30 μL,按上述色譜條件測(cè)定。以進(jìn)樣量(X,μg)為橫坐標(biāo),峰面積積分值(Y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程為Y=2 044 106.882X-1 305 814.604(r=0.999 3)。結(jié)果表明:黃芪甲苷在0.977 5 ~5.865 0 μg 線性良好。

        2.2.4 精密度試驗(yàn)

        精密吸取同一供試品溶液,進(jìn)樣10 μL,重復(fù)進(jìn)樣6次,結(jié)果黃芪甲苷峰面積的RSD為2.2%。

        2.2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

        取同一批樣品(批號(hào)為120214),平行制備6份供試品溶液,測(cè)定黃芪甲苷的含量,結(jié)果RSD為2.0%,表明重復(fù)性良好。

        2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

        取同一供試品溶液,按上述色譜條件分別于0,2,4,6,8,10 h 注入液相色譜儀,測(cè)定黃芪甲苷峰面積積分值。結(jié)果示峰面積的RSD為2.6%,表明供試品溶液在10 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

        2.2.7 加樣回收率試驗(yàn)

        精密稱取已知含量的本品(批號(hào)為120214,黃芪甲苷含量1.028 8 mg/g)約1 g,精密加入質(zhì)量濃度為0.977 4 g/L的黃芪甲苷對(duì)照品甲醇溶液1 mL,再精密加入甲醇溶液50 mL,按2.2.3項(xiàng)下方法制備加樣供試品溶液。精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液,分別注入液相色譜儀,測(cè)定黃芪甲苷含量,計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

        表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

        2.2.8 樣品含量測(cè)定

        按2.2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液,測(cè)定3批丹鹿通督片中黃芪甲苷的含量,平行測(cè)定2次,結(jié)果見(jiàn)下表2。

        表2 3批樣品黃芪甲苷含量測(cè)定結(jié)果

        3 討論

        驗(yàn)證原標(biāo)準(zhǔn)中的薄層色譜,結(jié)果發(fā)現(xiàn):丹參、杜仲[6]色譜效果不理想,黃芪薄層色譜操作復(fù)雜。筆者把丹參色譜中展開(kāi)劑改為石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯(10∶2),結(jié)果Rf值適中,薄層效果較好;把黃芪色譜中供試品溶液的制備方法改為與修訂后的含量測(cè)定方法一致,結(jié)果簡(jiǎn)化了操作過(guò)程且薄層效果較好;對(duì)杜仲[7]的薄層色譜進(jìn)行了多種提取方法的研究,結(jié)果均不理想,建議刪去杜仲的薄層色譜項(xiàng);驗(yàn)證了原標(biāo)準(zhǔn)中延胡索的薄層色譜檢查,原方法薄層效果較好,未改動(dòng)。采用HPLC-ELSD法進(jìn)行了黃芪中黃芪甲苷[8]的含量測(cè)定,豐富了藥品的定性定量指標(biāo),比較了原標(biāo)準(zhǔn)中TLCS法與HPLC-ELSD法測(cè)定黃芪甲苷的含量,結(jié)果HPLC-ELSD法測(cè)定的黃芪甲苷含量比TLCS法測(cè)定的含量高10%以上,提取較完全,提取方法簡(jiǎn)便可控,可確保藥品的安全有效性。

        在丹鹿通督片含量測(cè)定研究過(guò)程中,曾比較了超聲提取、加熱回流及索氏提取等不同方法制備供試品溶液,結(jié)果超聲提取不能提取完全,回收率不符合規(guī)定,而加熱回流比索氏提取操作簡(jiǎn)便,因此選用加熱回流的方法制備供試品溶液??疾炝斯┰嚻诽崛∵^(guò)程中氨試液洗滌的時(shí)間不同,黃芪甲苷含量差別較大的問(wèn)題,結(jié)果發(fā)現(xiàn)用氨試液洗滌,每次洗滌時(shí)間在2 h以上時(shí),黃芪甲苷提取完全且含量穩(wěn)定。

        [1]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn):第85冊(cè)[S].1997:92.

        [2]高建,夏泉,黃趙剛,等.HPLC-ELSD同時(shí)測(cè)定當(dāng)歸補(bǔ)血總苷中黃芪甲苷和黃芪皂苷Ⅱ[J].中成藥,2012,34(2):268.

        [3]鄭黎花,張慧,張利.川產(chǎn)丹參炒制工藝優(yōu)選及其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2012,5(3):20.

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