魏澤元，陸靜金，金傳山，夏宏*

(1.安徽醫(yī)科大學(xué) 附屬省立醫(yī)院，安徽 合肥 230001； 2.安徽中醫(yī)藥大學(xué)，安徽 合肥 230031)

鐵皮石斛莖乙醇提取物正丁醇溶性部分化學(xué)成分研究

魏澤元1，陸靜金2，金傳山2，夏宏1*

(1.安徽醫(yī)科大學(xué) 附屬省立醫(yī)院，安徽 合肥 230001； 2.安徽中醫(yī)藥大學(xué)，安徽 合肥 230031)

目的：研究鐵皮石斛莖乙醇提取物的正丁醇溶性部分的化學(xué)成分。方法：利用硅膠、凝膠及反相硅膠等色譜方法對正丁醇溶性部分進行分離，根據(jù)質(zhì)譜、核磁共振等波譜技術(shù)對分離的單體化合物進行結(jié)構(gòu)鑒定。結(jié)果：從鐵皮石斛的正丁醇部位分離得到7個糖苷類化合物，分別鑒定為：芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷(1)，枸櫞苦素C(2)，3，5-二甲氧基-4-羥基苯基-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(3)，7-甲氧基香豆素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)，淫羊藿醇A2-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)，燈盞花素2(6)，(+)-丁香脂素-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(7)。結(jié)論：化合物1，2，4均為首次從鐵皮石斛中分離得到。

鐵皮石斛；正丁醇部分；化學(xué)成分；結(jié)構(gòu)鑒定

鐵皮石斛DendrobiumofficinaleKimura et Migo為蘭科石斛屬名貴藥用植物，具有很高的藥用價值，為《中國藥典》2010年版收載品種，具有益胃生津，滋陰清熱功能。用于熱病津傷，口干煩渴，胃陰不足，食少干嘔，病后虛熱不退，陰虛火旺，骨蒸勞熱，目暗不明，筋骨痿軟。現(xiàn)代藥理活性研究表明其具有增強人體免疫力、抗氧化、抑制腫瘤細胞增殖等活性[1]。野生鐵皮石斛生于海拔100～3 000 m的山地半陰濕巖石、樹皮上，喜溫暖濕潤氣候和半陰濕的環(huán)境，不耐寒[2]。由于鐵皮石斛生長條件的特殊性和分布的局限性，又經(jīng)長期采挖，自然資源瀕臨枯竭，市場供應(yīng)緊缺，價格昂貴。目前，國內(nèi)評定鐵皮石斛質(zhì)量的指標(biāo)主要以性狀和粗多糖為標(biāo)準(zhǔn)[3]，然而這種質(zhì)量控制方法不完善，迄今仍沒有確定一個化學(xué)成分作為鐵皮石斛的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。筆者通過初步的提取分離，發(fā)現(xiàn)鐵皮石斛的正丁醇部分浸膏含量遠高于乙酸乙酯溶性部分。為探明鐵皮石斛的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，并為其質(zhì)量控制提供依據(jù)，開展了鐵皮石斛正丁醇部分的化學(xué)成分研究。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Brucker AM-400型超導(dǎo)核磁共振儀，四甲基硅烷為內(nèi)標(biāo)；Xevo TQ-S超高壓液相色譜三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀。

1.2 材料

柱色譜硅膠(青島海洋化工廠，100～200目，200～300目)；薄層色譜硅膠(煙臺匯友硅膠開發(fā)有限公司，GF254型)；反相材料RP-18(Merck公司)；Sephadex LH-20(北京化工廠)。顯色劑為10%濃H2SO4-乙醇溶液。

1.3 藥材來源

新鮮的鐵皮石斛莖，購自浙江省中藥材市場，自然風(fēng)干，由安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院副院長金傳山副教授鑒定為鐵皮石斛DendrobiumofficinaleKimura et Migo的干燥莖。

2 提取與分離

取鐵皮石斛干燥莖3 kg，粉碎后用80%乙醇回流提取，回收乙醇得浸膏289 g。加適量水形成混懸物，依次按極性從小到大的順序，采用乙酸乙酯、水飽和正丁醇分步萃取，分別合并萃取液，減壓濃縮得到各個萃取部分，分為乙酸乙酯萃取部分、正丁醇萃取部分和水溶性部分。

將正丁醇萃取部分193 g與0.4 kg硅膠(100～200目)拌樣，1.9 kg硅膠干法裝柱，三氯甲烷-甲醇(15∶1～1∶1)梯度洗脫，得到7個組分，組分1同乙酸乙酯萃取部分(留樣)進行TLC對照，多個點重疊，故未進一步分離。組分2經(jīng)硅膠柱色譜，三氯甲烷-甲醇(20∶1～1∶1)梯度洗脫，經(jīng)Sephadex LH-20柱再純化，得到化合物1(23 mg)和5(8 mg)。組分3經(jīng)硅膠柱色譜，三氯甲烷-甲醇(15∶1～1∶1)梯度洗脫，再經(jīng)RP-18(40%甲醇水梯度洗脫)和Sephadex LH-20柱色譜再純化，得到化合物3(10 mg)。組分4經(jīng)硅膠柱色譜，三氯甲烷-甲醇(15∶1)等度洗脫，再經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜純化，得到化合物4(7 mg)。組分5經(jīng)硅膠柱色譜，三氯甲烷-甲醇(20∶1～1∶1)梯度洗脫，再依次經(jīng)RP-18柱色譜(30%～100%甲醇水梯度洗脫)、硅膠制備薄層色譜和Sephadex LH-20柱色譜純化，得到化合物2(5 mg)和6(8 mg)。組分6經(jīng)硅膠柱色譜，三氯甲烷-甲醇(15∶1)等度洗脫，再經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜純化，得到化合物7(16 mg)。最后1個組分經(jīng)TLC顯色，呈灰色和淺黃色條帶，成點性差，未進行進一步分離。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：黃色粉末；C21H20O10，ESI-MS顯示準(zhǔn)分子離子峰m/z：431[M-H]-；1H-NMR (500 MHz，CD3OD)δ：7.79 (2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′)，7.52 (2H，d，J=8.5 Hz，H-3′，5′)，7.02 (1H，s，H-6)，6.98 (1H，s，H-3)，6.87 (1H，s，H-8)，5.86 (1H，d，J=6.9 GlcH-1″)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD) δ：182.3 (s，C-4)，164.7 (s，C-9)，164.0 (s，C-7)，163.0 (s，C-5)，162.5 (s，C-4′)，158.0 (s，C-10)，129.0 (d，C-2′，6′)，122.4 (s，C-1′)，116.0 (d，C-3′，5′)，106.6 (s，C-2)，104.1 (d，C-6)，100.7 (d，C-8)，95.4 (d，C-3)，102.0 (d，C-1″)，79.0 (d，C-3″)，78.7 (d，C-5″)，75.0 (d，C-2″)，71.3 (d，C-4″)，62.5 (t，C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道相符[4]，故鑒定化合物1為芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷，首次從鐵皮石斛中分離得到?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。

化合物2：白色粉末；C16H22O7，ESI-MS顯示準(zhǔn)分子離子峰m/z：327[M-H]-；1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：7.10 (1H，d，J=8.0 Hz，H-6)，6.85 (1H，s，H-2)，6，77 (1H，d，J=8.0 Hz，H-5)，5.98 (1H，m，H-8)，5.10 (2H，m，H-9)，4.87 (1H，d，J=7.0 Hz，H-1′)，3.90 (3H，s，H-3-OMe)，3.50 (2H，brd，J=7.6 Hz，H-7)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD) δ：150.8 (s，C-3)，146.3 (s，C-4)，138.9 (d，C-8)，136.7 (s，C-4)，122.0 (d，C-5)，118.3 (d，C-6)，116.0 (t，C-9)，114.4 (d，C-2)，102.3 (d，C-1′)，78.2 (d，C-3′)，77.8 (d，C-5′)，75.1 (d，C-2′)，71.3 (d，C-4′)，62.5 (t，C-6′)，56.9 (q，C-OMe)，41.0 (t，C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道相符[5]，故鑒定化合物2為枸櫞苦素C，首次從鐵皮石斛中分離得到?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。

化合物3：白色粉末；C14H20O9，ESI-MS 顯示準(zhǔn)分子離子峰m/z：355[M+Na]+；1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：6.12(2H，s，H-3，5)，4.83(1H，d，J=6.9 Hz，H-1′)，3.86(6H，s，H-2，6-OMe)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD) δ：150.0(s，C-4)，148.2(s，C-2，6)，130.0(s，C-1)，94，7(s，C-3，5)，102.0 (d，C-1′)，78.2 (d，C-3′)，77.8 (d，C-5′)，75.7 (d，C-2′)，71.4 (d，C-4′)，62.7 (t，C-6′)，56.8(q，C-2，6-OMe)，40.7 (t，C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道相符[6]，故鑒定化合物3為3，5-二甲氧基-4-羥基苯基-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。

化合物4：白色粉末；C16H18O9，ESI-MS 顯示準(zhǔn)分子離子峰m/z：377[M+Na]+;1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：7.90(1H，d，J=9.6 Hz，H-4)，7.20 (1H，s，H-8)，7.17 (1H，s，H-5)， 6.30 (1H，d，J=9.6 Hz，H-3)，5.07 (2H，d，J=7.8 Hz，H-1′)，3.89 (3H，s，H-7-OMe)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD) δ：162.9 (s，C-2)，151.8 (s，C-7)，150.6 (s，C-9)，148.3 (s，C-6)，145.6 (d，C-4)，114.1 (d，C-3)，112.8 (s，C-10)，110.0 (d，C-5)，102.0 (d，C-8)，105.1 (d，C-1′)，78.7 (d，C-3′)，77.8 (d，C-5′)，75.0 (d，C-2′)，71.7 (d，C-4′)，62.8 (t，C-6′)，56.7 (q，C-OMe)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道相符[7]，故鑒定化合物4為7-甲氧基香豆素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，首次從鐵皮石斛中分離得到。化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。

化合物5：白色粉末；C28H38O14，ESI-MS 顯示準(zhǔn)分子離子峰m/z：621[M+Na]+；1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：6.79 (2H，s，H-2，6)，6.70 (2H，s，H-2′，6′)，4.96 (1H，d，J=7.6 Hz，H-7)，4.93 (1H，d，J=8.0 Hz，H-7′)，4.82 (1H，d，J=7.8 Hz，H-1″)，3.83 (6H，s，H-3′，5′-OMe)，3.82 (6H，s，H-3，5-OMe)，2.24(2H，m，H-8，8′)。以上數(shù)據(jù)與文獻[8]報道相符，故鑒定化合物5為淫羊藿醇A2-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。

化合物6：白色粉末；C17H24O8，ESI-MS顯示準(zhǔn)分子離子峰m/z：379[M+Na]+；1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：6.52 (2H，s，H-2，6)，5.94 (1H，m，H-8)，5.11 (2H，m，H-9)，4.81 (1H，d，J=7.6 Hz，H-1′)，3.82 (6H，s，H-3，5-OMe)，3.48 (2H，d，J=7.5 Hz，H-7)；13C-NMR (100 MHz，CD3OD) δ：154.1 (s，C-3，5)，138.6 (s，C-1)，138.3 (d，C-8)，116.0 (t，C-9)，107.4 (d，C-2，6)，105.5 (s，C-1′)，78.2 (d，C-3′)，77.8 (d，C-5′)，75.7 (d，C-2′)，71.3 (d，C-4′)，62.8 (t，C-6′)，56.9 (q，C-OMe)，41.5 (t，C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道相符[9]，故鑒定化合物6為燈盞花素2?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。

化合物7：白色粉末；C28H36O13，ESI-MS 顯示準(zhǔn)分子離子峰m/z：603[M+Na]+；1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ：6.67(2H，s，H-2，6)，6.61 (2H，s，H-2′，6′)，4.84 (1H，d，J=7.8 Hz，H-1″)，4.73 (1H，d，J=4.2 Hz，H-7)，4.66 (1H，d，J=4.1 Hz，H-7′)，4.23 (2H，m，Ha-9，9′)，3.87 (2H，m，Hb-9，9′)，3.79，3.72 (各6H，s，H-3，3′，5，5′-OMe)，3.07 (2H，m，H-8，8′)；13C-NMR (100 MHz，CD3OD) δ：154.3 (s，C-3，5)，149.3 (s，C-3′，5′)，139.6 (s，C-4)，136.1 (s，C-4′)，132.9 (s，C-1′)，104.7 (d，C-2，6)，104.5 (d，C-2′，6′)，87.5 (d，C-7)，87.3 (d，C-7′)，105.3 (s，C-1″)，78.3 (d，C-3″)，77.8 (d，C-5″)，75.6 (d，C-2″)，71.2 (d，C-4″)，62.5 (t，C-6″)，56.9，56.7 (q，C-3，3′，5，5′-OMe)，55.5，55.4 (d，C-8，8′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道相符[10]，故鑒定化合物7為(+)-丁香脂素-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。

圖1 化合物1～7化學(xué)結(jié)構(gòu)

[1] 屠國昌.鐵皮石斛的化學(xué)成分、藥理作用和臨床應(yīng)用[J].海峽藥學(xué)，2010，22 (2)：70-71.

[2] 中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會.中國植物志[M].第19卷.北京：科學(xué)出版社，1999：117.

[3] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：265-266.

[4] 范明松，葉冠，黃成剛.山萵苣化學(xué)成分研究[J].中國中藥雜志，2004，29(12)：1146-1148.

[5] Toshihiro Murata，Toshio Miyase，F(xiàn)umihiko Yoshizaki.New phenolic compounds fromMeehaniaurticifolia[J].J Nat Med，2011，65：385-390.

[6] 李燕，王春蘭，肖培根，等.鐵皮石斛中的酚酸類及二氫黃酮類成分[J].中國藥學(xué)雜志，2010，45(13)：975-979.

[7] Xi Feiding，Xu Feng，Yun Fadong，et al.A new angelol-type coumarin glucoside fromAngelicapubescens[J].Chinese Chemical Letters，2008，19：1237-1239.

[8] Gongora Luis，Manez Salavor，Giner Rosa M，et al.Phenolic glycosides fromPhagnalonrupestre[J].Phytochemistry，2002，59(8)：857-860.

[9] Chen Bin，Li Bo-Gang，Zhang Guo-Lin.Glycoside from Erigeron brevscapus[J].Acta Botanica Sinica，2002，44(3)：344-348.

[10] 王芳菲，李艷，郭順星，等.鐵皮石斛中的一個新化合物[J].中國藥學(xué)雜志，2010，45(12)：898-902.

ChemicalConstituentsfromn-butanolExtractsofDendrobiumofficinale

WEI Ze-yuan1，LU Jing-jin2，JIN Chuanshan2，XIA Hong1*

(AnhuiMedicalUniversityAffiliatedProvincialHospital，Hefei230001，China； 2.AnhuiUniversityofChinesemedicine，Hefei230031，China)

Objective：To study the chemical constituents from n-butanol extracts ofDendrobumofficinale.Methods：A variety of chromatographic methods such as silica gel，Sephadex LH-20 and Pre PC18column were used.Compounds structures were determined by mass spectrometry and nuclear magnetic resonance(NMR)techniques.Results：Seven compounds of glycosides were isolated fromD.officinaleand identified as follows：apigenin-7-O-β-D-glucopyranoside(1)，citrusin C(2)，3，5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl-1-O-β-D-glucopyranoside(3)，7- methoxy-coumarin-6-O-β-D-glucopyranoside(4)，icariol A2-4-O-β-D-glucopyranoside(5)，erigeside 2(6)，(+)syringaresinol- 4-O-β-D-monoglucoside(7).Conclusion：Compound1，2and4were isolated fromD.officinalefor the first time.

Dendrobiumofficinale；n-butanol extracts；Chemical constituents；Structural elucidation

2013-07-11)

*

夏宏，副主任藥師，研究方向：醫(yī)院藥學(xué)；E-mail：bhxhong@sina.com