劉瑩，謝寧，徐麗，關(guān)慧波

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

地黃飲子出自宋代劉河間的《黃帝素問宣明論方》，具有滋腎陰，補腎陽，開竅化痰之功，主治瘖痱證。癥見舌強不能言，足廢不能用，口干不欲飲，苔浮膩，脈沉遲細弱。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，生、長、壯、老的生命過程，取決于腎中精氣的盛衰。高等生物活動能力受神經(jīng)系統(tǒng)支配，活動能力的強弱直接反應(yīng)了神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育程度。為探討地黃飲子對促進神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的作用，本研究觀察了地黃飲子對果蠅攀爬能力的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

黑腹果蠅(Drosophila Melanogaster)，野生型Canton special(CS)果蠅，由中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院生物化學(xué)與細胞生物學(xué)研究所果蠅資源與技術(shù)平臺提供。

地黃飲子飲片由松茂藥材公司提供。

基礎(chǔ)培養(yǎng)基(空白組)的制備:玉米粉42g，蔗糖31g，瓊脂3g，酵母粉3g加入460ml蒸餾水中，加熱，不斷攪拌，煮沸約4min，加入丙酸2.5g攪拌均勻，待涼后倒入經(jīng)高溫滅菌，高12cm，直徑3cm指管中，培養(yǎng)基厚度為1～1.5cm。

地黃飲子培養(yǎng)基的制備:在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中分別加入地黃飲子飲片粉末，制備成1%、2%、4%濃度地黃飲子培養(yǎng)基。

1.2 方法

1.2.1 分組方法 收集8h內(nèi)羽化但未交配的果蠅用二氧化碳麻醉后雌雄分組，取雄性果蠅進行實驗。取1天齡果蠅全部喂食普通培養(yǎng)基;在第9天將喂食普通培養(yǎng)基的果蠅約90只，分成3組，分別喂食1%、2%、4%地黃飲子培養(yǎng)基，第14天進行攀爬能力測試，即用1%、2%、4%濃度的地黃飲子培養(yǎng)基喂5天與空白組進行測試，全部被測試果蠅為14天齡。測試時取1%組22只蠅，2%組21只，4%組22只，空白組21只，分別放入指管中。

1.2.2 測試方法 在暗室紅燈下進行測試，將待測試果蠅放入空指管內(nèi)適應(yīng)5min，輕彈指管使果蠅至管底部，計時10s，到達指管頂部的果蠅數(shù)(A)，每組至少測試5次，取平均數(shù)，每次間隔1min。計算攀附指數(shù)CI=A/總數(shù)。在不同濃度組與空白組之間進行統(tǒng)計學(xué)分析。

1.2.4 時效關(guān)系實驗 根據(jù)以上數(shù)據(jù)確定將最佳濃度的地黃飲子培養(yǎng)基。取1天齡果蠅全部喂普通培養(yǎng)基，分別在第7天、9天、11天、13天取喂普通培養(yǎng)基的果蠅約120只，分成3組，用最佳濃度的地黃飲子培養(yǎng)基喂養(yǎng)，第14天進行攀爬能力測試，即用最佳濃度地黃飲子培養(yǎng)基喂養(yǎng)果蠅1天、3天、5天、7天與空白組進行測試，全部被測試果蠅為14天齡。測試時1天組取21只蠅，3天組取22只，5天組取21只，7天組取22只，空白組21只，分別放入指管中。

2 結(jié)果

2.1 不同濃度地黃飲子對果蠅攀爬能力的影響 見表1。

表1 不同濃度地黃飲子對果蠅攀爬能力的影響(±s)

表1 不同濃度地黃飲子對果蠅攀爬能力的影響(±s)

注:與空白組比較，*P＜0.05;與2%組比較，#P＜0.05。

組別 n 攀爬指數(shù)(%)1%組 22 47.74 ±2.52*#2%組 21 55.22 ±6.38*4%組 22 34.56 ±2.52*#空白組 21 24.78 ±6.18#

2.2 不同給藥天數(shù)對果蠅攀爬能力的影響 見表2

表2 不同給藥天數(shù)對果蠅攀爬能力的影響(±s)

表2 不同給藥天數(shù)對果蠅攀爬能力的影響(±s)

注:與5天組比較，*P＜0.05。

組別 n 攀爬指數(shù)(%)1 天組 21 43.82 ±6.21*3 天組 22 43.60 ±2.47*5 天組 21 55.22 ±6.38 7 天組 22 48.18 ±5.21空白組 21 24.78 ±6.18*

3 討論

果蠅基因組的測序工作在2000年已經(jīng)結(jié)束，并確定了果蠅細胞中含有月13 600個基因［1］，分析人類與果蠅基因組序列發(fā)現(xiàn)，兩種生物具有很多同源基因，在人類已知的714個遺傳性疾病的致病基因中，果蠅具有548個同源基因，其中包括與人類神經(jīng)退行性疾病同源的基因［2］。另一方面，果蠅個體小，繁殖周期短，繁殖能力強，且雌雄易于分辨;果蠅只有四對染色體，第一對為性染色體，其他三對是常染色體，第二、三對常染色體包含了80%左右的遺傳信息，第四對常染色體僅包含2%左右的遺傳信息，這樣的染色體組雖然小但是很全面使我們更容易進行遺傳學(xué)的研究［1］。因此，將果蠅作為人類遺傳學(xué)研究，特別是神經(jīng)系統(tǒng)疾病研究有著巨大的實用價值。正常果蠅具有反趨地性行為，即在一個垂直地面的空間會自發(fā)地向上運動［3］。通過觀察果蠅在垂直管內(nèi)的攀爬情況測試其運動能力，在一定程度上反應(yīng)果蠅神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育程度。

地黃飲子一方面要溫補下元，攝納浮陽;另一方面開竅化痰，宣通心氣，上下并治，標(biāo)本兼顧，而以本為主，廣泛應(yīng)用于治療腦血管及神經(jīng)系統(tǒng)疾?。?］。實驗結(jié)果表明，地黃飲子高、中、低劑量組均可改善果蠅的攀爬能力，其中2%濃度的地黃飲子對果蠅攀爬能力影響最大(P＜0.05);在給藥時間方面，給藥5天組果蠅的攀爬能力明顯高于1天組和3天組(P＜0.05)，但5天組與7天組相比較，無明顯差異。本實驗說明，地黃飲子可以改善果蠅的運動能力，在一定程度上提高其神經(jīng)系統(tǒng)功能。

［1］劉力.果蠅:基因、腦和行為［J］.世界科技研究與發(fā)展，22(6):47.

［2］溫艾，劉力.以果蠅模型研究人類神經(jīng)退行性疾病［J］.生物化學(xué)與生物物理進展，2003，30(3):357.

［3］Chiara Cirelli.Cellular consequences of sleep deprivation in the brain［J］.Sleep Medicine Reviews，2006，10:307 － 321.

［4］周妍妍，姚辛敏，何秀麗，等.地黃飲子對老年性癡呆神經(jīng)保護作用的實驗研究［J］.中醫(yī)藥學(xué)報，2011，39(2):58－61.