律泉明 張大威 李一帆 (敦化市醫(yī)院神經(jīng)外科，吉林 敦化 33700)

缺血性腦血管疾病約占腦血管疾病的70% ～85%〔1〕。腦缺血疾病的癥狀體征，在中醫(yī)屬于“中風(fēng)-中經(jīng)絡(luò)”范疇，其基本病機(jī)有風(fēng)、火、痰、瘀、虛幾端，而無(wú)論是何種病理要素為主，均因絡(luò)脈瘀阻，氣血不暢甚或不通而導(dǎo)致腦髓失養(yǎng)、津停血瘀、神機(jī)失用〔2〕。美國(guó)俄勒岡州立大學(xué)醫(yī)學(xué)系的研究人員在長(zhǎng)達(dá)3年多時(shí)間的臨床研究中發(fā)現(xiàn)，65歲以上老年人常年口服銀杏葉制劑可有效預(yù)防記憶力退化和阿爾茨海默病〔3〕。研究表明銀杏葉注射液對(duì)腦動(dòng)脈硬化癥引起的腦供血不足有一定的改善作用〔4〕。此外，電針技術(shù)在腦血管疾病的預(yù)防和治療方面對(duì)改善腦細(xì)胞供氧、促進(jìn)腦細(xì)胞功能的恢復(fù)都起到了重要的作用。本研究創(chuàng)新性地把我國(guó)傳統(tǒng)中醫(yī)中藥理論與電針針灸技術(shù)相結(jié)合，探討此聯(lián)合治療方案對(duì)腦缺血損傷的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組 72只體重200～250 g雄性健康的Wistar大鼠，由吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。隨機(jī)分為四組，每組18只。局灶性腦缺血(MCAO)模型組:給予相同天數(shù)、等體積的生理鹽水，然后做MCAO手術(shù);銀杏葉組:舒血寧注射液(規(guī)格:5 ml/瓶，由北京神威藥業(yè)有限公司提供)，1.25 ml/kg，腹腔注射，1次/d，連續(xù)給藥 7 d，在末次給藥40 min后，做MCAO手術(shù);銀杏葉聯(lián)合電針治療組:在銀杏葉組注射給藥的基礎(chǔ)上，MCAO術(shù)后2 h，進(jìn)行電針治療，取頭穴和體穴兩組穴位。頭穴:前庭聰、百會(huì)、四神聰、水溝穴(取病灶區(qū))，體穴取肢患側(cè):內(nèi)關(guān)、曲池、足三里。選用長(zhǎng)25 mm、直徑0.35 mm的毫針，上海產(chǎn)6805-II型治療儀，頻率1～2 Hz，強(qiáng)度0.3～1.0 mA，以針刺處肌肉輕微抖動(dòng)為宜，持續(xù)15 min，留針15 min。MCAO術(shù)后22 h，重復(fù)電針1次。假手術(shù)組:給予相同天數(shù)、等體積的生理鹽水，只分離頸總動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈和頸外動(dòng)脈，不做MCAO手術(shù)。

1.2 大鼠MCAO模型建立 采用改良的Longa方法〔5〕。所有器械經(jīng)高壓蒸汽滅菌，用10%水合氯醛作腹腔麻醉(0.35 ml/100 g)，將大鼠仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)上，行頸部正中切口，逐層分離并暴露右側(cè)頸總動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈，避免刺激迷走神經(jīng)。在距頸總動(dòng)脈分叉5 mm處結(jié)扎頸總動(dòng)脈，剪一“V”形切口，將直徑0.20 mm，長(zhǎng)2.5 cm的魚(yú)線緩慢插入該口，逐漸插入頸內(nèi)動(dòng)脈內(nèi)，向前緩慢推進(jìn)18～19 mm，稍遇阻力即停止，扎緊頸內(nèi)動(dòng)脈，防止出血和魚(yú)線滑出，縫合皮膚。術(shù)后給以軟飼料喂養(yǎng)，飲水不加限制。各組大鼠均MCAO術(shù)后24 h取材。MCAO造模成功的標(biāo)準(zhǔn):動(dòng)物手術(shù)清醒后有明顯手術(shù)對(duì)側(cè)(即左側(cè))Horner癥(左側(cè)眼瞼下垂，眼球凹陷)及手術(shù)對(duì)側(cè)(即左側(cè))偏癱體征(不能完全伸展左前肢，行走時(shí)向左側(cè)傾倒或轉(zhuǎn)圈)〔6〕。

1.3 腦組織梗死范圍測(cè)定〔7〕MCAO造模后24 h，每組6只大鼠，取出腦組織放入低溫生理鹽水中沖洗，隨即放入-20℃冰箱中冷凍5 min，去除嗅球、小腦和低位腦干，冠狀面切成5片，將切片放入4%TTC溶液中，37℃避光孵育30 min后置于50%甲醛溶液中避光保存，固定24 h。經(jīng)TTC染色后，非缺血區(qū)呈玫瑰紅色，梗死區(qū)呈白色。將白色組織仔細(xì)切取稱重，以梗死組織占腦組織總重量的百分比作為腦梗死范圍。

1.4 生化指標(biāo)測(cè)定 實(shí)驗(yàn)各組大鼠6只，MCAO造模后24 h，取右側(cè)大腦組織，4℃生理鹽水洗凈，準(zhǔn)確稱重后移入玻璃勻漿管中，冰浴條件下，用冷0.9%生理鹽水按1∶10制成10%的腦組織勻漿液，6 000 r/min離心10 min，提取上清，按各試劑盒說(shuō)明分別進(jìn)行乳酸脫氫酶(LDH)、超氧化物歧化物(SOD)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)的測(cè)定。

1.5 電生理檢測(cè) MCAO造模后24 h，每組取6只大鼠，進(jìn)行感覺(jué)誘發(fā)電位(SEP)和運(yùn)動(dòng)誘發(fā)電位(MEP)檢測(cè)。將受檢大鼠用10%水合氯醛作腹腔麻醉，在頭顱后部，消毒皮膚，切開(kāi)頭顱后部皮膚，剝離骨膜，用牙科鉆在右側(cè)皮層中央后回感覺(jué)區(qū)相對(duì)應(yīng)的冠狀縫后3 mm，失狀縫旁1 mm處鉆一盲孔;左腿部剪毛，并暴露左腿坐骨神經(jīng)。用Powerlab誘發(fā)電位儀，BL-410生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，刺激參數(shù):粗電壓，強(qiáng)度3 V，波寬1 ms，頻率10 Hz，增益20倍，濾波300 Hz，時(shí)間常數(shù)0.01 s，掃描速度6.25 ms/div。SEP時(shí)，刺激電極位于坐骨神經(jīng)，記錄電極置于皮層，負(fù)極置于頭皮下參考電極插于椎旁肌，信號(hào)計(jì)算機(jī)連續(xù)疊加100次，方能記錄到該誘發(fā)電位;檢測(cè)MEP時(shí)，刺激電極與記錄電極交換，參考電極位于硬腭下。所有大鼠檢測(cè)完后測(cè)量其潛伏期和峰-峰值，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行分析，采用單因素方差分析進(jìn)行組間比較，數(shù)據(jù)以±s表示。

2 結(jié)果

2.1 腦組織梗死范圍 大鼠MCAO術(shù)后24 h，假手術(shù)組未見(jiàn)腦梗死灶，其他各組大鼠均有不同程度的腦梗死灶;銀杏葉聯(lián)合電針組梗死范圍為(5.78±1.63)%;銀杏葉組梗死范圍為(6.86±1.97)%;MCAO對(duì)照組梗死范圍為(11.21±2.43)%。其中，銀杏葉組與銀杏葉聯(lián)合電針組梗死灶面積百分比與模型組比較明顯下降(P＜0.05)，銀杏葉聯(lián)合電針組要優(yōu)于銀杏葉組，但統(tǒng)計(jì)學(xué)上未見(jiàn)顯著性差異(P＞0.05)。

2.2 各生化指標(biāo)測(cè)定結(jié)果 大鼠MCAO后24 h，與假手術(shù)組相比，其他各組大鼠LDH與SOD活性均降低，以模型組降低最為明顯，銀杏葉聯(lián)合電針組高于銀杏葉組;模型組MDA和NO含量均比假手術(shù)組增高，銀杏葉聯(lián)合電針組數(shù)值增高幅度最小，最接近假手術(shù)組。見(jiàn)表1。

2.3 電生理檢測(cè)結(jié)果 模型組已經(jīng)失去正常波形，銀杏葉組和銀杏葉聯(lián)合電針組SEP與MEP的峰-峰值較模型組都有明顯的增加，且潛伏期均有不同程度的縮短，其中銀杏葉聯(lián)合電針組優(yōu)于銀杏葉組。各組之間相比較差異顯著(P＜0.05)。見(jiàn)圖 1，表 2，表 3。

表1 實(shí)驗(yàn)各組大鼠腦組織LDH、SOD、MDA及NO測(cè)定結(jié)果(n=6，±s)

表1 實(shí)驗(yàn)各組大鼠腦組織LDH、SOD、MDA及NO測(cè)定結(jié)果(n=6，±s)

與模型組比較:1)P＜0.05

組別LDH(U/gpro)SOD(U/mgpro)MDA(nmol/mgpro)NO(μmol/gpro)1.35±0.22 61.94±19.33 6.31±1.02 14.51±1.38銀杏葉組 1.98±0.271)109.75±23.961)4.01±1.111)10.68±1.951)銀杏葉聯(lián)合電針組 2.04±0.211)128.67±24.151)3.39±1.011)9.82±1.931)假手術(shù)組 2.10±0.131)135.54±18.311)3.01±0.861)8.57±1.621)模型組

表2 實(shí)驗(yàn)各組SEP潛伏期與峰-峰值(n=6，±s)

表2 實(shí)驗(yàn)各組SEP潛伏期與峰-峰值(n=6，±s)

與模型組比較:1)P＜0.05;與銀杏葉組比較:2)P＜0.05;下表同

組別 潛伏期(ms) 峰-峰值(mV)6.34±0.23 0.01±0.01銀杏葉組 5.51±0.301) 0.03±0.011)銀杏葉聯(lián)合電針組 3.82±0.161)2) 0.06±0.011)2)假手術(shù)組 2.07±0.021)2) 0.15±0.011)2)模型組

表3 實(shí)驗(yàn)各組MEP潛伏期(± s，n=6)

表3 實(shí)驗(yàn)各組MEP潛伏期(± s，n=6)

組別 潛伏期(ms) 峰-峰值(mV)6.64±0.41 3.96±1.23銀杏葉組 5.22±0.321) 10.89±2.291)銀杏葉聯(lián)合電針組 4.24±0.141)2) 35.47±1.611)2)假手術(shù)組 2.03±0.021)2) 80.65±0.511)2)模型組

圖1 各組SEP及MEP波形

3 討論

銀杏葉是我國(guó)特有植物銀杏樹(shù)之葉，性味甘、苦、澀、平，有斂肺、平喘、活血、化瘀、祛風(fēng)、通絡(luò)、止痛的功效。中醫(yī)認(rèn)為其具有化痰濕、化淤血、益心肺的作用。目前在臨床上，銀杏提取物及其制劑主要用于治療心腦血管及中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變〔8〕。舒血寧注射液是銀杏葉提取物，主要成分是黃酮和銀杏內(nèi)酯，具有抑制血小板活化因子，清除自由基，促進(jìn)血液循環(huán);抑制血栓形成，緩解組織缺血缺氧及組織水腫，抗脂過(guò)氧化，抑制炎癥反應(yīng)等作用。有研究顯示，早期對(duì)腦梗死患者應(yīng)用舒血寧注射液能有效抑制血清可溶性血管細(xì)胞黏附分子(sVCAM-1)的表達(dá)，從而阻斷白細(xì)胞向缺血區(qū)的浸潤(rùn)和遷移，可減輕缺血腦細(xì)胞的損害，有利于病情恢復(fù)〔9〕。

針刺可以刺激中樞神經(jīng)系統(tǒng)中內(nèi)啡肽、復(fù)合胺、P物質(zhì)、降鈣素基因相關(guān)肽、神經(jīng)肽Y等物質(zhì)的釋放，降低血液黏度，抑制血小板聚集和黏附，抑制紅細(xì)胞聚集及降低血球壓積，達(dá)到增加腦血流量，改善腦細(xì)胞供氧，促進(jìn)腦細(xì)胞恢復(fù)功能，激發(fā)和改善腦休克。同時(shí)在改善二便功能、緩解肢體痙攣、減輕截癱性疼痛等并發(fā)癥、后遺癥方面有較好的療效〔10〕。

LDH是一種糖酵解酶，在胞質(zhì)內(nèi)含量豐富，當(dāng)細(xì)胞受損或死亡時(shí)可釋放到細(xì)胞外，所以細(xì)胞死亡數(shù)目與LDH活性呈正比，由此可判斷細(xì)胞受損的程度。MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化作用的終產(chǎn)物，在一定程度上間接地反映出細(xì)胞損傷的程度。MDA的測(cè)定常常與SOD的測(cè)定相互配合，SOD活力的高低間接反映了機(jī)體清除氧自由基的能力，而MDA的高低又間接反映了機(jī)體受自由基攻擊的嚴(yán)重程度。NO是一種不穩(wěn)定的高度彌散性自由基，主要通過(guò)大量的化學(xué)反應(yīng)而發(fā)揮其生物學(xué)作用，廣泛影響信息傳導(dǎo)過(guò)程，能量代謝和DNA合成。在腦缺血損傷時(shí)具有雙重作用，多數(shù)研究認(rèn)為，早期生成的NO由于時(shí)間短暫，通過(guò)擴(kuò)張腦血管，增加腦血流，抗血小板聚集及降低細(xì)胞內(nèi)鈣等途徑起到對(duì)抗缺血性腦損傷的作用;然而在腦缺血中晚期，梗死灶內(nèi)的炎癥細(xì)胞、巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)產(chǎn)生大量誘導(dǎo)型NO合成酶(iNOS)，由此造成NO的過(guò)度釋放，起著細(xì)胞毒性作用〔11，12〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明銀杏葉聯(lián)合電針能夠抑制腦缺血損傷后的LDH與SOD活性降低，減少細(xì)胞死亡數(shù)目，降低細(xì)胞損傷的程度，這與各MCAO手術(shù)組腦組織梗死范圍結(jié)果相吻合，銀杏葉聯(lián)合電針同樣能夠抑制MDA和NO含量的增高，減小細(xì)胞毒性作用，對(duì)腦細(xì)胞起到了有效的保護(hù)作用。銀杏葉聯(lián)合電針能夠促進(jìn)腦缺血損傷大鼠感覺(jué)功能和運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)。

綜上所述，銀杏葉(舒血寧)對(duì)腦缺血損傷能起到一定保護(hù)作用，但單獨(dú)使用效果欠佳。聯(lián)合電針同時(shí)應(yīng)用時(shí)，對(duì)大鼠MCAO損傷具有良好的保護(hù)作用，并能有效促進(jìn)損傷大鼠感覺(jué)功能和運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)。

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