吳冬寒，張學娟，吳冬冰

（海南省三亞市人民醫(yī)院消化內科 572000）

有研究報道明抑癌基因p53和增殖細胞核抗原（PCNA）與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預后有關［1］。作者為探討抑癌基因p53和增殖細胞核抗原（PCNA）在胃癌和癌前病變中的表達情況，采用免疫組織化學技術檢測p53和PCNA在正常胃黏膜→腸上皮化生→異型增生→胃癌的演變過程的表達，探討p53和PCNA與胃癌發(fā)生、發(fā)展及其與預后的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2009年1月至2010年12月收集的胃組織148例，術后均經病理檢查證實，術后病理其中腸上皮化生26例，中、重度不典型增生28例，原發(fā)性胃癌69例，正常胃黏膜組織25例設為正常對照組。69例原發(fā)性胃癌中，男性54例，女性15例；年齡33～78歲，平均（52.0±16.13）歲；術前均未經化療和放療。按世界衛(wèi)生組織制定的標準進行組織分型，高、中分化腺癌39例，低及未分化分化腺癌22例，黏液腺癌6例，印戒細胞癌2例。病理分期［國際抗癌聯盟（UCIC）標準］為1期11例，2期22例，3期27例，4期9例。浸潤深度：漿膜內（包括黏膜層、黏膜下層、肌層）16例，漿膜層和漿膜外層53例；腫瘤直徑大于或等于5cm者24例，小于5 cm者45例；淋巴結轉移42例，無轉移者27例。

1.2 試劑 SP試劑盒試、鼠抗p53單克隆抗體、鼠抗PCNA單克隆抗體由福州邁新生物技術開發(fā)公司提供。

1.3 方法 組織玻片經多聚賴氨酸預處理，石蠟標本4μm厚連續(xù)切片，常規(guī)脫蠟，逐級乙醇水化，免疫組織化學SP法按試劑盒說明書進行，DAB顯色。以已知陽性切片作為陽性對照，磷酸鹽緩沖液（PBS）替代一抗作為陰性對照。

1.4 結果判定 p53和PCNA表達陽性細胞胞核呈明顯棕黃色著色。p53高倍鏡下每張切片隨機選擇10個視野，每個視野計數100個細胞，依據細胞染色程度、及染色細胞百分率進行評分［1］：不著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；0分為無陽性細胞，≤10%為1分，11%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分；染色強度與陽性細胞百分比乘積大于3分為陽性。PCNA計數用PCNA標記指數（PCNALI），每個標本隨機觀察5個高倍視野，每個視野計數200個細胞，計算陽性細胞百分率。

1.5 統計學處理 本組資料采用SPSS 10.0統計軟件處理，組間進行χ2檢驗、方差分析和t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 p53、PCNA在正常胃組織和病變組織中的表達 p53在正常胃黏膜和腸化上皮組織中無陽性表達，胃癌組織中的陽性表達率顯著高于異型增生組織，組間比較差異有統計學意義（P＜0.01）。從正常胃黏膜、腸上皮化生、異型增生到胃癌，PCNA標記指數（PCNALI）逐漸遞增，PCNA在腸化、不典型增生和胃癌中陽性表達率與正常胃黏膜比較差異均有統計學意義，且呈遞增趨勢（P＜0.01），結果見表1。

表1 p53和PCNA在正常胃黏膜及病變組織中的表達

圖1 胃癌組織中p53、PCNA表達均呈細胞核陽性（SP×200）

2.2 胃癌組織中p53、PCNA的表達與臨床病理特征的關系

p53、PCNA表達與胃癌的分化程度和有無淋巴結轉移關系密切，分化程序越低、有淋巴轉移，p53、PCNA陽性表達越高，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

2.3 胃癌中p53表達與PCNALI的關系 p53陽性表達組的PCNALI（65.69±17.48）明顯高于p53陰性表達組PCNALI（25.03±8.97），差異有統計學意義（P＜0.01）。

表2 p53和PCNA的表達與胃癌臨床病理特征的關系

3 討 論

大量的研究表明胃癌的發(fā)生、發(fā)展是多階段逐步演變過程，胃癌的演變遵循正常胃黏膜→腸上皮化生→異型增生→胃癌的變化規(guī)律，其間涉及多種癌基因和抑癌基因的表達和調控［2］。抑癌基因p53對細胞周期的增殖具有負調控作用，它可使細胞停滯于G1期，抑制DNA合成及誘導DNA修復，從而抑制細胞的增殖［3－5］。p53另外一個主要的靶基因是 Mdm2，編碼泛素連接酶，Mdm2可以結合p53蛋白的N端引起p53的失活，出核轉運、降解［6］。p53也是一種細胞老化的主要調節(jié)器，能封閉細胞周期有利于細胞進入老化［7］。突變是腫瘤抑制基因失活的主要機制之一，p53與50%的人類癌癥有關，在胃癌中p53的突變頻率達到32%［8］?；蛲蛔兒髉53就失去了上述作用。在p53基因編碼的蛋白中，野生型p5蛋白的半衰期很短，而突變型p53蛋白降解緩解，代謝半衰期較長，積聚在核內易于檢測到，所以使用免疫組化檢測的p53均為突變型。本研究發(fā)現突變型p53蛋白在正常胃黏膜、腸化上皮無表達，在異型增生中有低表達，且主要是在重度不典型增生中出現，而在胃癌中的表達明顯增高，提示p53蛋白的異常表達與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關，突變后p53基因抑制細胞增殖能力減弱，導致細胞增殖失控從而發(fā)生腫瘤。此外p53蛋白的檢測有助于對胃黏膜癌變傾向的判斷和胃癌的早期診斷。Forones等采用免疫組化的方法分別檢查了胃腺癌、慢性胃炎和腸化生胃黏膜組織，結果發(fā)現顯示胃腺癌中p53的陽性表達高達59%，結果也與本例相符［9］。本研究結果顯示p53蛋白的異常表達與胃癌的分化程度及淋巴結轉移有關，低、未分化胃癌p53蛋白表達明顯高于高、中分化胃癌，有淋巴結轉移組p53蛋白表達也明顯高于無淋巴結轉移組，與文獻報道相符［10－12］。提示p53蛋白的異常表達與胃癌生物學行為密切相關，p53可作為評價胃癌惡性程度和擴散的重要指標。

PCNA是一種核蛋白，在DNA合成中起重要作用，能與DNA多聚酶δ結合，參與DNA復制。PCNA的表達和細胞增殖周期相關，它在G1后期開始升高，G1／S期交界時達到高峰，G2、M期明顯下降，檢測PCNA可客觀反映細胞增殖活性［13］。PCNA陽性細胞的多少與腫瘤發(fā)展、預后均有密切的關系［14］。在腫瘤的發(fā)生過程中，細胞增生活躍，處于增生狀態(tài)，其PCNA表達明顯增強，且隨著疾病的發(fā)展，PCNA表達也逐漸增加［15］。本研究顯示，在正常胃黏膜→腸上皮化生→不典型增生→胃癌的演變過程中PCNALI呈遞增趨勢，說明在胃癌變過程，隨著病變的加重，惡性程度的增高，細胞的增殖活性逐漸增強。結果顯示胃癌的形成與胃黏膜上皮過度增殖有關。本研究還顯示PCNA的表達與胃癌的分化程度、浸潤深度和淋巴結轉移有關，分化程度越低、有淋巴轉移，p53、PCNA陽性表達越高，提示胃癌的浸潤轉移是腫瘤細胞不斷增殖的結果，腫瘤細胞的增殖活性與胃癌的生物學行為，特別是腫瘤的浸潤、轉移和預后等密切相關。檢測PCNA對胃癌的分化、侵襲和預后判斷有重要的意義。

本研究結果表明，p53蛋白陽性表達組的PCNALI明顯高于陰性表達組，表明p53基因的突變可使細胞過度增殖，進而導致腫瘤的形成和發(fā)展。PCNA的表達與胃癌的分化程度、浸潤深度和淋巴結轉移有關，與腫瘤的浸潤、轉移和預后等密不可分。聯合檢測p53和PCNA對判斷胃癌的發(fā)展和預后及指導治療有積極意義。

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