劉嬋娟 趙向輝，2 徐 明，3 曹陽春 楊 婷 姚軍虎*

(1.西北農(nóng)林科技大學(xué)動物科技學(xué)院，楊凌 712100;2.江西農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，南昌 330045;3.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，呼和浩特 010018)

CPM-Dairy是基于康奈爾凈碳水化合-蛋白質(zhì)體系(CNCPS)研究開發(fā)的目前世界上最先進的奶牛配方軟件［1］。它在飼糧配方設(shè)計中，考慮了動物、環(huán)境與管理、飼料在瘤胃內(nèi)的消化與流通速率等因素，充分反映了動物類型、生產(chǎn)水平、環(huán)境、飼糧組成及管理間的交互作用，體現(xiàn)了軟件的動態(tài)性和精準(zhǔn)性。聚類分析是根據(jù)研究對象的特征對其進行分類的多元技術(shù)的總稱，是應(yīng)用最廣泛的分類技術(shù)［2］。聚類分析在生物領(lǐng)域的應(yīng)用主要集中在對動植物和基因進行分類，獲取對種群固有結(jié)構(gòu)的認(rèn)識［3］。此方法可用來對變量進行分類，稱為R型聚類，也可用以對案例進行分類，稱為Q型聚類。多種分類聚類法中，應(yīng)用最廣泛的是層次聚類和迭代聚類［2］。聚類分析要求所選擇變量之間不可高度相關(guān)，否則相當(dāng)于對這些變量進行了加權(quán)。分析結(jié)果中，同一類個體應(yīng)具有高度同質(zhì)性，不同類之間應(yīng)具有高度異質(zhì)性。

CPM-Dairy配方軟件通過對大量飼料及試驗數(shù)據(jù)的回歸分析，集奶牛飼糧配方的預(yù)測、評價和優(yōu)化功能于一體［4］。研究表明，CNCPS體系對90%以上變量的預(yù)測結(jié)果與實際生產(chǎn)的偏差只有1.3%［5］。Tedeschi等［6］使用 CPM-Dairy 3.0 對228頭泌乳奶牛的實測與模型預(yù)測產(chǎn)奶量進行線性回歸，結(jié)果表明，該模型對79.8%的變量做出了正確預(yù)測，整合相關(guān)系數(shù)高達 0.997［7-8］，預(yù)測的均方根誤差為5.14 kg/d，且87.3%的均方根誤差源于隨機誤差［9］，說明對高產(chǎn)奶牛的產(chǎn)奶量預(yù)測中，系統(tǒng)誤差很小。在美國，利用該體系使奶牛平均單產(chǎn)在10年間(1989—1998年)提高了20%，目前，CPM-Dairy配方軟件在全世界42個國家得到了廣泛的應(yīng)用。通過不同樣品的信息特征比較，聚類分析結(jié)果可表明樣品間的一致程度，進而確定樣品的歸屬關(guān)系［10-11］。

由于生長環(huán)境、收割期、加工方法及貯存時間不同，即便同一種飼料原料其營養(yǎng)成分差異也較大［12-14］。因此，需要利用聚類分析方法對飼料進行科學(xué)有效的分類和匯總。目前，我國奶牛應(yīng)用的飼料種類與品質(zhì)上與美國存在較大差異，已有的飼料成分表及營養(yǎng)價值表也存在一定的局限性，主要表現(xiàn)在奶牛常用飼料營養(yǎng)成分信息過時、不完善、分類不準(zhǔn)確等，給應(yīng)用CPM-Dairy配方軟件配制奶牛高效飼糧造成了不便。本研究旨在依據(jù)CNCPS和CPM-Dairy配方軟件的技術(shù)思想，收集、測定部分我國常用奶牛飼料原料的營養(yǎng)成分，并用聚類分析法對飼糧樣品進行科學(xué)分類，為建立奶牛精準(zhǔn)營養(yǎng)管理軟件奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 飼料樣品收集

對我國現(xiàn)有各大型牛場常用原料進行調(diào)查研究，并與原CPM-Dairy飼料數(shù)據(jù)庫信息進行對比分析，尋找并收集在原數(shù)據(jù)庫中沒有體現(xiàn)及國內(nèi)外成分差異較大的飼料品種，分別為苜蓿干草(442個)、干酒糟及其可溶物(DDGS，143個)、玉米粉(263個)、玉米青貯(321個)(表1)。原料收集后盡快于65℃烘干后裝袋保存，在測定前統(tǒng)一粉碎直徑為0.5 mm微粒。

1.2 指標(biāo)測定及方法

CPM-Dairy配方軟件從預(yù)測到優(yōu)化均以飼料各指標(biāo)的表觀數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)，因此，需測定樣品中干物質(zhì)(DM)、有機物(OM)、粗蛋白質(zhì)(CP)、粗脂肪(EE)、中性洗滌纖維(NDF)、酸性洗滌纖維(ADF)、酸性洗滌木質(zhì)素(ADL)、粗灰分(ash)、非纖維性碳水化合物(NFC)、酸性洗滌不溶性蛋白質(zhì)(ADIP)、中性洗滌不溶性蛋白質(zhì)(NDIP)、可溶性蛋白質(zhì)(SP)、非蛋白氮(NPN)、淀粉、脂肪酸、微量元素(鐵、鋅、銅、錳、硒、鈷、碘)和常量元素(鈣、磷、鎂、鉀、鈉、氯)的含量。

測定方法:苜蓿干草、玉米粉和玉米青貯飼料樣品送至華夏牧業(yè)有限公司進行近紅外掃描［15］，DDGS在西北農(nóng)林科技大學(xué)動物科技學(xué)院實驗室分析。其中，DM、OM、EE、CP、NDF、ADF、ADL、NFC、ash含量的測定參考 AOAC［16］，ADIP、NDIP、SP、NPN含量的測定參考 Fortina 等［17］、Krishnamoorthy 等［18］和 Licita 等［19］的方法，淀粉含量采用試劑盒(愛爾蘭Megazyme)測定，脂肪酸含量的測定參考Qi等［20］的方法，常量元素、微量元素含量采用原子吸收法測定［21］。

1.3 聚類分析

本研究嚴(yán)格遵循變量與聚類分析的研究目標(biāo)密切相關(guān)，不同研究對象上的值有明顯差異，變量間不可高度相關(guān)的原則，采用R型聚類對變量進行篩選，并根據(jù)生產(chǎn)實踐和軟件需要對變量進行最后確定。選定聚類變量后，通過Q型聚類對研究對象進行分類。層次聚類是多種Q型聚類分析中應(yīng)用最廣泛的聚類方法，其聚類過程可用一個樹狀圖表示出來，根據(jù)樹狀結(jié)構(gòu)圖進行不同的分類處理。

1.3.1 數(shù)據(jù)整理

以苜蓿干草(442個樣品)為例，簡述在SPSS 17.0中進行聚類分析的操作方法。將苜蓿干草各營養(yǎng)成分的數(shù)值輸入軟件中(圖1)。

圖1 部分苜蓿干草營養(yǎng)水平數(shù)據(jù)在SPSS 17.0中的輸入Fig.1 Input of partial data of nutrient levels of dry alfalfa hay in SPSS 17.0

1.3.2 聚類類型及方法的選擇

激活“分析(analysis)”菜單選“分類(classify)”中的“層次聚類(hierarchical cluster)”項，從彈出對話框左側(cè)的變量列表中選 ash、ADL、EE、CP、ADF、NDF、NFC(根據(jù)經(jīng)驗選用常量指標(biāo))，點擊按鈕使之進入“變量(variables)”框;在“聚類(cluster)”處選擇聚類類型，其中“個案(cases)”表示觀察對象聚類，variables表示變量聚類。本例是對變量聚類，因此，選擇variables(圖2)。

點擊“圖表(plots)”鈕，選擇“樹形圖(dendrogram)”項(圖3-a)，要求系統(tǒng)輸出聚類結(jié)果的樹狀關(guān)系圖，點擊“繼續(xù)(continue)”鈕返回。點擊“統(tǒng)計(statistics)”鈕，彈出“層次聚類分析(hierar-chical cluster analysis)”，選擇“相似矩陣(proximity matrix)”(圖3-b)，要求結(jié)果中顯示距離矩陣，點擊continue鈕返回hierarchical cluster analysis對話框。

在對變量的R型聚類中，以“皮爾遜相關(guān)關(guān)系(Pearson correlation)”作為聚類方法。為確保聚類結(jié)果的可信性，需選用不同的聚類方法反復(fù)聚類，取共同部分來去除隨機因素的影響［2］。在本例中，分別選用組間聚類和質(zhì)心聚類(centroid clustering)，如圖4所示。點擊 continue鈕返回 hierarchical cluster analysis對話框，點擊“確定(OK)”鈕即完成分析。

2 結(jié)果

2.1 飼料樣品指標(biāo)聚類結(jié)果

苜蓿干草主要指標(biāo)聚類樹狀圖見圖5。從2種聚類方法得到的樹狀圖可以看出，聚類方法可信。由于確定分類數(shù)的問題迄今尚無統(tǒng)一定論，實際操作中，需根據(jù)經(jīng)驗而定，本例在與原數(shù)據(jù)庫比較的基礎(chǔ)上，選擇了CP和NDF作為分類主要指標(biāo)。

圖3 聚類結(jié)果顯示項選擇Fig.3 Clustering results display options

圖4 聚類方法和距離的選擇Fig.4 Clustering method and distance options

2.2 飼料樣品聚類結(jié)果

在對樣品的聚類中，本例中選用centroid clustering方法和平方歐幾里德距離(squared Euclidean distance)，先根據(jù)樣品的CP聚類，將樣品分為6大類，將歸到每1類的樣品CP值求平均。之后對每個蛋白質(zhì)類的樣品根據(jù)NDF指標(biāo)再重新聚類，對樹狀圖(略)結(jié)果進行整理，苜蓿干草的442個樣品共分為12類，將每類中的樣品指標(biāo)整合后結(jié)果見表1。

同理，DDGS樣品聚類分析的結(jié)果是將CP和NDF作為主要指標(biāo)，在此基礎(chǔ)上，最終樣品分成了10大類，結(jié)果見表2。玉米粉的聚類結(jié)果是將淀粉作為主要指標(biāo)，樣品最后分為了5大類，結(jié)果見表3。根據(jù)聚類分析結(jié)果，玉米青貯的主要聚類指標(biāo)選定為NDF，樣品被分成了6大類，結(jié)果見表4。

表5為試驗飼料所有樣品的各個指標(biāo)的平均值。

圖5 苜蓿干草主要指標(biāo)聚類樹狀圖Fig.5 Dendrogram of main indices of dry alfalfa hay

3 討論

聚類分析是數(shù)據(jù)挖掘中的一個重要研究領(lǐng)域［22-25］，在生物領(lǐng)域的應(yīng)用主要集中在對動植物種群固有結(jié)構(gòu)的認(rèn)識，受到廣泛關(guān)注。聚類分析中，并不是加入的變量越多，得到的結(jié)果越客觀。有時，加入一兩個不合適的變量就會使得分類結(jié)果大相徑庭。而且，不加鑒別地使用高度相關(guān)的變量相當(dāng)于給這些變量進行了加權(quán)［2］。因此，聚類分析應(yīng)該只根據(jù)在研究對象上有顯著差別的變量進行分類，而研究者需要對聚類結(jié)果不斷進行檢驗，剔除在不同類之間沒有顯著差別的變量。此外，為使數(shù)據(jù)庫的界面更加友好，使用更便捷，CPM-Dairy配方軟件要求先對每1種飼料原料選出1個或幾個最具代表性的指標(biāo)，再根據(jù)選定指標(biāo)對樣品進一步分類。本研究對飼料原料分類指標(biāo)的確定是由聚類分析的結(jié)果及飼料本身特性共同決定。

本研究在CNCPS的理論指導(dǎo)下，收集、分析了全國范圍內(nèi)部分我國常用奶牛飼料原料的營養(yǎng)成分，使用聚類分析的方法，按照CPM-Dairy的要求對樣品科學(xué)分類，符合飼料分類的基本方法。聚類分析法只對差異較大且沒有高度相關(guān)的研究對象分類才有意義［2］。苜蓿干草的聚類中，首先選用R型(橫向)聚類對指標(biāo)進行分類并選擇。苜蓿干草CP和NDF含量相關(guān)性較低(圖5);而苜蓿干草的CP含量在14.87% ～24.14%之間，NDF含量在29.82% ～50.63%范圍內(nèi)變化，同一指標(biāo)同種樣品間差異較大。而且，Minson［26］和Sheaffer等［27］的研究結(jié)果表明，CP和NDF含量是最能反映粗飼料特征的指標(biāo)。因此，將CP和NDF含量作為苜蓿干草的主要分類指標(biāo)，這與Fox等［4］的分類依據(jù)相同。在對飼料樣本進行Q型(縱向)聚類時，采用層次聚類的思想，將樣品共分成了12類。Fox等［4］建立的 CNCPS 5.0/CPM-Dairy 3.0飼料數(shù)據(jù)庫中，苜蓿干草的CP變化范圍為17.00% ～25.00%(分別為17%、20%和25%)，NDF范圍為32.00% ～46.00%(分別為32%、35%、37%、40%、43%和46%)。本研究中，苜蓿干草不同分類間CP含量相差約1個百分點，NDF含量相差2～4個百分點，符合CPM-Dairy數(shù)據(jù)庫的要求。

DDGS、玉米粉和玉米青貯的聚類思想及方法同苜蓿干草。Kim等［28］研究表明，DDGS是玉米提取酒精后的副產(chǎn)物，主要成分為粗纖維、CP和油脂。國內(nèi)DDGS樣品的CP含量變化范圍為21.8% ～35.7%，NDF含量為32.2% ～55.7%，樣品間差異較大。所以本研究將CP和NDF含量作為DDGS的主要分類指標(biāo)，這與Singh等［29］評價DDGS的依據(jù)為CP和NDF含量為主要指標(biāo)相同。玉米粉和玉米青貯分別以淀粉和NDF含量為分類指標(biāo)，是因為對玉米粉品質(zhì)影響最大的成分是淀粉［30］，且本研究中玉米粉樣品的淀粉變化范圍較大(51.93% ～74.91%);玉米青貯NDF含量的變化范圍較大(37.2% ～70.3%)，而CP含量的變化變化差異不明顯(8.3% ～9.6%)。對樣品分類后，同種原料類與類之間的差值均符合CPMDairy原料數(shù)據(jù)庫要求。苜蓿干草的CP和NDF含量，DDGS的CP和NDF含量，玉米粉的淀粉以及玉米青貯的NDF含量變異均相對較大，說明本研究中分類的依據(jù)合理。

由表6可知，各類飼料的SP均變異很大，可能是由于飼料中SP大部分是NPN，這與靳玲品等［31］的研究結(jié)果一致。

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表3 玉米粉聚類結(jié)果Table 3 The clustering results of corn meal

表4 玉米青貯聚類結(jié)果Table 4 The clustering results of corn silage

續(xù)表4

表5 試驗飼料所有樣品的各個指標(biāo)的平均值Table 5 Means of various indices of all experimental feed samples

續(xù)表5

比較本研究結(jié)果和CPM-Dairy原料數(shù)據(jù)庫數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，我國常用奶牛飼料原料與該數(shù)據(jù)庫數(shù)據(jù)存在很大差異。以玉米青貯為例，國外的玉米青貯NDF含量變化范圍是在40% ～50%，國內(nèi)玉米青貯NDF的變化范圍是在40%～70%之間。因此，不斷完善并建立我國常用奶牛飼料數(shù)據(jù)庫，對建立奶牛精準(zhǔn)營養(yǎng)管理軟件及其應(yīng)用至關(guān)重要。

4 結(jié)論

用聚類分析的方法，根據(jù)不同飼料的特點，分別將苜蓿干草分為12類、DDGS分為10類、玉米粉分為5類和玉米青貯分為6類，其結(jié)果符合CPM-Dairy原料數(shù)據(jù)庫要求。

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