王 華，張淑梅，鐘穎婷，林標(biāo)聲，沈紹新*，邱豐艷

（1.龍巖學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，福建 龍巖 364012；2.福建省預(yù)防醫(yī)學(xué)與獸醫(yī)生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 龍巖 364012）

腸道健康對(duì)斷奶仔豬生產(chǎn)性能的影響極為顯著[1]，而益生菌劑具有良好的生物學(xué)功能，能調(diào)節(jié)動(dòng)物消化道微生物菌群的區(qū)系平衡，改善動(dòng)物體內(nèi)消化酶活性，促進(jìn)食物消化吸收，提高飼料的利用率，促進(jìn)仔豬生長(zhǎng)發(fā)育[2]。益生菌劑還具有調(diào)節(jié)仔豬機(jī)體抵抗疾病能力，減少豬糞排出、改善飼養(yǎng)環(huán)境、降低生豬飼養(yǎng)污染等優(yōu)點(diǎn)[3]，對(duì)解決日益嚴(yán)重的抗生素耐藥性和藥物殘留問(wèn)題起到重要作用[4-6]。

本文通過(guò)研究斷奶仔豬日糧中添加不同濃度的含高活性、高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的乳酸菌、酵母菌、維生素的“乳菌寶”益生菌菌劑，考查其對(duì)仔豬排泄糞便、腸道內(nèi)容物的氨濃度、pH、消化酶活性、微生物總數(shù)、腹瀉指數(shù)等生理生化指標(biāo)影響，探討益生菌劑對(duì)斷奶仔豬腸道作用機(jī)理和影響作用，為其在仔豬生產(chǎn)中的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 益生菌劑與培養(yǎng)基

“乳菌寶”，市場(chǎng)購(gòu)買，含乳酸菌、酵母菌等益生菌和單體維生素、載體等，每千克產(chǎn)品含：乳酸菌1.0×1011cfu·mL-1、酵母菌1.5×1012cfu·mL-1、VA 2.4×106IU、VD34.5×105IU、VE 6 400 mg、VK 520 mg、VB1570 mg、VB22 650 mg、VB6650 mg、VB128 mg。

微生物培養(yǎng)基[5]：細(xì)菌總數(shù)：平板計(jì)數(shù)瓊脂（PCA）培養(yǎng)基；大腸桿菌，麥康凱培養(yǎng)基；沙門氏菌：SS瓊脂培養(yǎng)基；乳酸菌：MRS培養(yǎng)基；酵母菌：YPD培養(yǎng)基。

1.2 試驗(yàn)豬場(chǎng)

福建省龍巖市龍馬原種豬場(chǎng)。

1.3 動(dòng)物與設(shè)計(jì)

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：選取體重（約8～10 kg）相近，健康狀況良好的杜×長(zhǎng)×大三元雜交斷奶仔豬120頭，公母各半，隨機(jī)分為4組，每組10頭，3個(gè)重復(fù)。其中一組為對(duì)照組，飼喂基礎(chǔ)日糧；另三組為試驗(yàn)組：Ⅰ組飼喂基礎(chǔ)日糧+0.1%益生菌劑；Ⅱ組飼喂基礎(chǔ)日糧+0.15%益生菌劑；Ⅲ組飼喂基礎(chǔ)日糧+0.2%益生菌劑。試驗(yàn)期間，仔豬自由采食與飲水，做好飼養(yǎng)環(huán)境衛(wèi)生和疾病防控。試驗(yàn)時(shí)間28 d，試驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束時(shí)分別測(cè)定各組仔豬的體重，記錄所消耗的飼料總量，分析仔豬的日均采食量、日均增重及料肉比。試驗(yàn)期間注意觀察和記錄仔豬健康狀況，于第28天試驗(yàn)結(jié)束時(shí)的當(dāng)天早上8點(diǎn)前采集各組樣品，用于生理生化指標(biāo)和微生物數(shù)量的測(cè)定。

1.4 樣品采集與預(yù)處理

糞便及腸道內(nèi)容物的取樣[6]：分別從各試驗(yàn)組中采集新鮮糞便、每組隨機(jī)抽取4頭試驗(yàn)仔豬的盲腸、結(jié)腸、十二指腸、空腸和回腸的腸道內(nèi)容物，-20℃密封冷凍保存待用。其中盲腸、結(jié)腸腸道內(nèi)容物用于測(cè)定氨濃度和pH；十二指腸、空腸和回腸腸道內(nèi)容物用于測(cè)定腸道酶活力和絨毛長(zhǎng)度；盲腸、回腸和糞便用于測(cè)定微生物總數(shù)。

腸道內(nèi)容物酶活力測(cè)定溶液的準(zhǔn)備：將各腸道內(nèi)容物減碎，取10 g樣品用0.14 moL·L-1KCL溶液溶解，勻漿，定容至50 mL，4℃4 000 r·min-1離心10 min，取上清液-20℃低溫保存待用。

1.5 樣品測(cè)定[7-8]

氨濃度測(cè)定：納氏試劑比色法測(cè)定。pH測(cè)定：pH儀測(cè)定（型號(hào)FE.20）。

消化酶活性測(cè)定：淀粉酶活性采用碘-淀粉比色法測(cè)定；總蛋白酶活性采用福林-酚試劑法測(cè)定。

微生物總數(shù)測(cè)定：采用平板菌落計(jì)數(shù)法測(cè)定所采集樣品的細(xì)菌總數(shù)、大腸桿菌、沙門氏菌、乳酸菌和酵母菌。

腹瀉指數(shù)：腹瀉指數(shù)的統(tǒng)計(jì)方法及評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)參照Barnet等[7]方法，硬糞便為1級(jí)，嚴(yán)重腹瀉，不成形，水分高的為5級(jí)。

1.6 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS 10.0 One-Way ANOVA中Waller-Duncan多重比較對(duì)所得的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 益生菌劑對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響

益生菌劑對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響見(jiàn)表1。結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，添加不同濃度益生菌劑的三個(gè)試驗(yàn)組的采食量、日增重、料重比均優(yōu)于對(duì)照組，其中試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ組各項(xiàng)指標(biāo)差異達(dá)到顯著水平（P＜0.05)，但試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ組間各項(xiàng)指標(biāo)差異不顯著（P＞0.05)，說(shuō)明基礎(chǔ)日糧中添加0.15%益生菌劑（試驗(yàn)Ⅱ組）即可促進(jìn)仔豬生長(zhǎng)，且對(duì)仔豬生長(zhǎng)影響效果顯著。

2.2 益生菌劑對(duì)斷奶仔豬腸道氨濃度及pH影響

pH影響動(dòng)物體內(nèi)消化環(huán)境，較低的pH有利于有益菌群生長(zhǎng)，而病原微生物的生長(zhǎng)則受到抑制。而腸道內(nèi)的氨對(duì)動(dòng)物有毒副作用，會(huì)破壞腸細(xì)胞表明，腸道內(nèi)氨濃度的降低，有利于仔豬機(jī)體健康生長(zhǎng)[5]。

益生菌劑對(duì)斷奶仔豬腸道氨濃度及pH影響見(jiàn)表2。結(jié)果表明，添加不同濃度益生菌劑的3個(gè)試驗(yàn)組的腸道（盲腸、結(jié)腸）氨濃度及pH均與對(duì)照組差異顯著（P＜0.05），說(shuō)明添加益生菌劑能降低仔豬腸道氨濃度及pH的作用，且效果顯著。

表1 益生菌劑對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響Table1 Effect of probiotics on growth performance of weaned piglets

表2 益生菌劑對(duì)仔豬腸道氨濃度、pH的影響Table2 Effect of probiotics on intestinal ammonia concentration and pH of weaned piglets

2.3 益生菌劑對(duì)斷奶仔豬腸道酶活性的影響

益生菌劑對(duì)斷奶仔豬腸道酶活性的影響見(jiàn)表3，結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，添加不同濃度益生菌劑的3個(gè)試驗(yàn)組十二指腸、空腸的淀粉酶、總蛋白酶活性均顯著提高（P＜0.05），但3個(gè)試驗(yàn)組組間差異均不顯著（P＞0.05）；回腸的淀粉酶、總蛋白酶活性提高不顯著（P＞0.05)，但也表現(xiàn)出更好的趨勢(shì)性。表明益生菌劑中添加的乳酸菌、酵母菌等能分泌出相應(yīng)的淀粉酶、蛋白酶，提高仔豬腸道消化酶的活性，幫助仔豬腸道消化，促進(jìn)物質(zhì)吸收。

表3 益生菌劑對(duì)仔豬腸道淀粉酶、總蛋白酶活性的影響Table3 Effect of probiotics on intestinal amylase and total protease activity of weaned piglets

2.4 益生菌劑對(duì)斷奶仔豬腸道絨毛高度的影響

仔豬斷奶后，飲食由液體乳汁變成固體飼料，其絨毛長(zhǎng)度會(huì)受到固體物質(zhì)的磨損而變短，影響仔豬的消化和吸收能力[10]。添加不同濃度的益生菌劑能改善受損腸粘膜的修復(fù)，提高仔豬腸道絨毛高度，從而促進(jìn)小腸的發(fā)育成熟，促進(jìn)其物質(zhì)吸收。結(jié)果見(jiàn)表4。結(jié)果表明，3個(gè)試驗(yàn)組的十二指腸、空腸與回腸的絨毛高度均比對(duì)照組試驗(yàn)有所提高，其中試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ組與對(duì)照組的差異達(dá)到顯著水平（P＜0.05）。

2.5 益生菌劑對(duì)斷奶仔豬腸道、糞便微生物數(shù)量的影響

益生菌劑對(duì)斷奶仔豬腸道、糞便微生物數(shù)量的影響結(jié)果見(jiàn)表5。

表4 益生菌劑對(duì)仔豬腸道絨毛高度的影響Table4 Effect of probiotics on intestinal villus height of weaned piglets（μm）

表5 益生菌劑對(duì)仔豬腸道、糞便微生物數(shù)量的影響Table5 Effect of probiotics on intestinal and dejecta microbial population of weaned piglets

由表5可知，添加不同濃度益生菌劑的3個(gè)試驗(yàn)組盲腸、回腸、糞便的致病菌（大腸桿菌、沙門氏菌數(shù)量要明顯小于對(duì)照組，其中盲腸、糞便中的數(shù)量差異達(dá)到顯著水平（P＜0.05)；各樣品有益菌乳酸菌、酵母菌的數(shù)量也明顯高于對(duì)照組，尤其是當(dāng)益生菌添加量達(dá)到0.2%的Ⅲ組，其數(shù)量差異均達(dá)到顯著水平（P＜0.05）。試驗(yàn)表明，添加乳酸菌、酵母菌的益生菌劑能起到改善仔豬腸道微生物區(qū)系平衡，增加有益菌數(shù)量、抑制有害致病菌生長(zhǎng)的作用。

2.6 益生菌劑對(duì)斷奶仔豬腹瀉的影響

益生菌劑對(duì)斷奶仔豬腹瀉的影響見(jiàn)表6，結(jié)果表明：與對(duì)照組相比，添加不同濃度益生菌劑的3個(gè)試驗(yàn)組的腹瀉情況均有所改善，其腹瀉指數(shù)均降低，且均達(dá)到顯著差異（P＜0.05）。說(shuō)明益生菌劑對(duì)改善仔豬腸道平衡，提高仔豬腸道健康，減少腹瀉有顯著作用。

表6 益生菌劑對(duì)仔豬腹瀉的影響Table6 Effect of probiotics on diarrhea of weaned piglets

3 討論與結(jié)論

本文研究益生菌劑改善仔豬腸道健康、提高采食量、促進(jìn)生長(zhǎng)的作用機(jī)制，在斷奶仔豬基礎(chǔ)日糧中添加0.15%益生菌劑即可促進(jìn)仔豬生長(zhǎng)。與對(duì)照組組比，添加0.5%、0.1%、0.15% 3個(gè)不同濃度益生菌劑的試驗(yàn)組（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組），其盲腸、結(jié)腸腸道氨濃度、pH下降顯著（P＜0.05），十二指腸、空腸的淀粉酶、總蛋白酶活性提高顯著（P＜0.05)、但回腸的淀粉酶、總蛋白酶活性提高不顯著（P＞0.05)。三個(gè)試驗(yàn)組的腸絨毛高度均比對(duì)照組有所提高，其中試驗(yàn)組Ⅱ、Ⅲ組差異達(dá)到顯著水平（P＜0.05)。三個(gè)試驗(yàn)組的盲腸、回腸、糞便的致病菌數(shù)量均比對(duì)照組降低、有益菌數(shù)量增多，其中試驗(yàn)組Ⅲ組各微生物數(shù)量與試驗(yàn)組相比差異均達(dá)到顯著水平（P＜0.05)。3個(gè)試驗(yàn)組的腹瀉指數(shù)均比對(duì)照組顯著降低（P＜0.05)，仔豬腸道健康得到改善。

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