李偉業(yè)，王義權(quán),2,*

1. 廈門大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，福建 廈門 361005

2. 廈門大學(xué) 深圳研究院，廣東 深圳 518057

文昌魚是頭索動(dòng)物亞門（Cephalochordata）動(dòng)物的總稱，現(xiàn)存30余種（Poss & Boschung, 1996;Wang & Fang, 2005），廣泛分布于世界各地的淺海沙灘，營(yíng)鉆沙、底棲和濾食生活，保留了脊索動(dòng)物門共同祖先的原始特征，是現(xiàn)生生物中與脊椎動(dòng)物亞門（Vertebrata）最為相似的無脊椎動(dòng)物。文昌魚胚胎發(fā)育和軀體結(jié)構(gòu)的基本圖式（body plan）與脊椎動(dòng)物相同，在脊椎動(dòng)物起源與進(jìn)化研究中扮演著非常重要的角色，且作為進(jìn)化和胚胎學(xué)研究的絕佳材料，早在上個(gè)世紀(jì)前葉即已被許多科學(xué)家所認(rèn)識(shí)。自從1994年Garcia-Fernàndez & Holland在《自然》雜志上發(fā)表論文，首次從基因組結(jié)構(gòu)層次上證明了脊椎動(dòng)物起源過程中的基因組“兩輪加倍”說（two-round duplication hypothesis）之后（Garcia-Fernàndez & Holland, 1994），文昌魚又再次回到進(jìn)化和發(fā)育生物學(xué)家的視野（Holland et al, 2004;Stokes & Holland, 1998）。近年來，越來越多的實(shí)驗(yàn)室加入到文昌魚研究中，從進(jìn)化生物學(xué)、發(fā)育生物學(xué)和基因功能、人工繁殖以及全基因組測(cè)序等方面進(jìn)行了多層次的研究并取得了一系列重要進(jìn)展。文昌魚作為模式動(dòng)物日趨成熟（Beaster-Jones et al,2007; Fuentes et al, 2004; Holland & Holland, 2001;Holland & Yu, 2004; Holland & Holland, 2010;Putnam et al, 2008; Wang et al, 2006; Yu et al, 2007;Zhang et al, 2007）。

培育實(shí)驗(yàn)室模式動(dòng)物首先要解決文昌魚的人工繁殖問題，為此各國(guó)研究者們經(jīng)過多年的努力（Du & Cheng, 1990; Fuentes et al, 2004; Mizuta &Kubokawa, 2004; Stokes & Holland, 1995; Wu et al,1994; Zhang et al, 2001），終于在2006年首次取得了文昌魚實(shí)驗(yàn)室全人工繁育的成功（Wang et al,2006; Zhang et al, 2007）。隨著文昌魚人工繁殖技術(shù)的突破，在人工海水養(yǎng)殖、餌料培養(yǎng)、產(chǎn)卵誘導(dǎo)技術(shù)以及養(yǎng)殖設(shè)施和養(yǎng)殖方式等方面亦均取得了進(jìn)展（Wu et al, 1995; Wang et al, 2002; Zhong et al,2006; Fuentes et al, 2007）。

野生文昌魚群體遺傳多樣性高、個(gè)體差異大（Zhong, 2009; Li et al, 2010），將其由野生狀態(tài)培育為實(shí)驗(yàn)室模式動(dòng)物，不僅需要在實(shí)驗(yàn)室可控條件下繁殖，還需要培育較純品系。然而，文昌魚幼體階段死亡率高，品系培育難度大，按前人統(tǒng)計(jì)，平均一對(duì)親本所產(chǎn)的后代最多僅能存活5尾（Courtney,1975）。自從2006年人工繁殖成功后至今尚無關(guān)于文昌魚品系培育的報(bào)道。本研究利用實(shí)驗(yàn)室長(zhǎng)期繁育的日本文昌魚（Branchiostoma japonicum）群體，通過一雌一雄配對(duì)繁殖的方式，嘗試性地建立全同胞家系，探索提高幼體存活率的最佳方法，為文昌魚品系培育積累經(jīng)驗(yàn)和基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 親本來源

2005—2010年，從廈門海域陸續(xù)采集日本文昌魚，在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)雌、雄混養(yǎng)，自然產(chǎn)卵受精獲得實(shí)驗(yàn)室繁殖的子代。我們以野生個(gè)體及實(shí)驗(yàn)室繁殖的日本文昌魚（B. japonicum）作為親本。2011年 3月初，文昌魚性腺成熟時(shí)，挑選體形較大，性腺飽滿而健康的個(gè)體組成備選親本群，包括雌魚 1 122尾，雄魚736尾。所有備選親本的種名均參照Zhang et al（2006）的分類學(xué)描述，在解剖鏡下逐尾鑒定。將備選雌、雄親本分別養(yǎng)殖于～20 L的小桶中，每桶～100尾。按照本實(shí)驗(yàn)室此前報(bào)道的養(yǎng)殖方法（Zhang et al, 2007），加強(qiáng)飼喂促使其性腺成熟。

1.2 親本催產(chǎn)及家系獲得

2011年3月9日—5月19日，采用溫度及光照誘導(dǎo)的方法，對(duì)雌、雄親本進(jìn)行人工催產(chǎn)。具體操作方法如下：備選親本在17～19 ℃低溫中養(yǎng)殖≥10 d后放入 22～25 ℃高溫中熱激≥24 h；催產(chǎn)前30～60 min，用同樣溫度的潔凈海水沖洗親本兩次后將每一條親本單獨(dú)置于一250 mL的小杯中，熄燈于25 ℃水溫中催產(chǎn)；熄燈后每隔30 min觀察一次，若發(fā)現(xiàn)有雌、雄個(gè)體同時(shí)排精和排卵，及時(shí)取出杯中親魚，將精、卵人工混合；充氣培養(yǎng)～30 min后，用150目網(wǎng)濾出受精卵，轉(zhuǎn)移至盛有新鮮過濾海水的塑料桶中孵化（Zhang, 2007）。至此獲得由同一對(duì)雌、雄文昌魚配對(duì)所產(chǎn)生的子代為同一家系，以后將單獨(dú)培養(yǎng)，全過程絕對(duì)避免與其他來源的個(gè)體混合。

1.3 受精卵孵化及仔魚飼養(yǎng)管理

受精卵置于容積為 3 L的深色塑料小桶中孵化，加桶蓋遮光，桶底鋪一層細(xì)沙，蓋滿桶底即可，水浴加熱，氣泵充氣增氧。為避免家系混雜，各家系分桶培育，嚴(yán)格隔離。在整個(gè)孵化和仔魚飼養(yǎng)過程中，保持各桶內(nèi)海水溫度25～27 ℃，鹽度25‰～28‰。

文昌魚受精卵發(fā)育至神經(jīng)胚時(shí)即破卵膜而出。在胚胎出膜前，調(diào)節(jié)充氣量至不產(chǎn)生氣浪，神經(jīng)胚出膜后在水中浮游，此時(shí)適當(dāng)增加充氣量。幼體開口后及時(shí)投喂叉鞭金藻（Dicrateria sp.）或等鞭金藻（Isochrysis sp.），餌料投喂量視仔魚生長(zhǎng)發(fā)育及其攝食情況適時(shí)增減。從仔魚進(jìn)入3鰓裂期開始，每天用300目網(wǎng)換水，換水體積視水體清潔程度而定，一般換出桶中～1/3海水，注意及時(shí)清除桶壁附著物，清洗沙層并觀察水質(zhì)變化，若發(fā)現(xiàn)水中出現(xiàn)雜蟲污染，及時(shí)吸去雜蟲并更換新鮮海水。進(jìn)入變態(tài)期時(shí)停止清洗沙層，及時(shí)增加鋪沙量至沙層厚度～2 cm，并對(duì)密度過高的家系進(jìn)行分桶養(yǎng)殖，直至全部仔魚完成變態(tài)潛沙后，再恢復(fù)對(duì)沙層的清洗。潛沙后餌料仍以金藻為主，佐以少量角毛藻（Chaetoeeros muelleri）或新月菱形藻（Nitzschia closterium）。亞成體和成體階段仍保持每天換水，同時(shí)注意觀察沙層清潔度并及時(shí)清洗沙層。

1.4 胚胎及仔魚生長(zhǎng)發(fā)育觀察

受精30 min后在體視鏡下抽樣觀察卵子是否正常受精，以受精膜舉起的卵子數(shù)占卵子總數(shù)的比例估算受精率；從受精之日起，每日在解剖鏡下抽樣觀察，胚胎階段主要觀察胚胎能否正常發(fā)育和出膜，以正常出膜的個(gè)體數(shù)占受精卵總數(shù)的比例估算孵化率；神經(jīng)胚出膜后主要觀察開口時(shí)間，以開口幼體數(shù)量占出膜個(gè)體總數(shù)的比例估算開口率；開口后到變態(tài)前主要記錄幼魚鰓裂數(shù)，分別以3鰓裂期幼體數(shù)量占開口幼體數(shù)量的比例計(jì)算 3鰓裂期的存活率，8鰓裂期幼體數(shù)量占 3鰓裂幼體數(shù)量的比例計(jì)算8鰓裂期的存活率；觀察幼魚攝食情況和變態(tài)開始的時(shí)間，直至全部幼魚完成變態(tài)，潛入沙中為止，以亞成體數(shù)目占 8鰓裂期幼體數(shù)量的比例計(jì)算變態(tài)率；文昌魚完成變態(tài)后形成圍鰓腔和肝盲囊，成為亞成體，潛入沙中生活，以亞成體數(shù)量占受精卵總數(shù)的比例計(jì)算生存率（Zhang, 2007）。

為探討文昌魚早期發(fā)育模式，從各組配對(duì)的卵子受精時(shí)開始觀察，除去子代未能發(fā)育至8鰓裂期即已死亡的家系外，記錄所有配對(duì)所產(chǎn)子代的生長(zhǎng)發(fā)育情況，用鰓裂數(shù)對(duì)日齡繪制曲線，以反映子代幼體早期生長(zhǎng)發(fā)育速度。

2 結(jié)果

2.1 日本文昌魚全同胞家系的存活與變態(tài)

2011年3月16日—2011年4月17日，先后配對(duì)34對(duì)親本，其中27對(duì)親本的后代先后全部死亡，7對(duì)親本所產(chǎn)全同胞對(duì)家系的子代完成變態(tài)并潛入沙中，本文持續(xù)統(tǒng)計(jì)這7個(gè)家系亞成體的生長(zhǎng)至體長(zhǎng)5～28 mm。各存活家系概況見表1。

表1 日本文昌魚家系繁殖情況及早期發(fā)育階段的生存率Table 1 Breeding and survival ratio at early development stages of B. japonicum full-sib families

除18號(hào)配對(duì)的受精率僅為20%外，其他配對(duì)的受精率都＞95%。各配對(duì)后代孵化率高低不一，最高孵化率＞95%，最低的幾乎全部無法出膜。

日本文昌魚各組配對(duì)后代的生存率及變態(tài)時(shí)間差異也很大。在7個(gè)完成變態(tài)的家系中，生存率最高的為31號(hào)家系，達(dá)32.4%，而最低的33號(hào)家系僅有 1.67%；變態(tài)最快的為 27號(hào)家系，僅歷時(shí)24 d，其次是24號(hào)和29號(hào)家系，最慢的是31號(hào)家系，歷時(shí)42 d。

2.2 不同家系間早期發(fā)育模式的比較及成因

在所有親本配對(duì)中，其中 24個(gè)配對(duì)所產(chǎn)子代未能發(fā)育至8鰓裂即全部死亡，其余10個(gè)配對(duì)的曲線圖走勢(shì)顯示各配對(duì)所產(chǎn)子代發(fā)育速度快慢不一，呈現(xiàn)出兩種不同的發(fā)育模式（圖1）。第一種包括24、25、26、27、28及29號(hào)配對(duì)的子代，鰓裂數(shù)隨日齡幾乎呈勻速增長(zhǎng)；第二種包括 5、11、31及 33號(hào)配對(duì)的子代，幼體發(fā)育過程中早期鰓裂數(shù)增長(zhǎng)緩慢，有的甚至連續(xù)數(shù)日不形成新的鰓裂，后期鰓裂形成速度有所加快，但仍不及第一種模式。

圖1 日本文昌魚子代幼體的兩種發(fā)育模式Figure 1 Two different development patterns of B. japonicum larvae

為了探討產(chǎn)生兩種早期發(fā)育模式的原因是否由養(yǎng)殖條件不同所導(dǎo)致，對(duì)各家系的養(yǎng)殖條件進(jìn)行比較，所有家系中，24、25、26、27及31號(hào)家系是在相同條件下養(yǎng)殖，卻進(jìn)入了不同的早期發(fā)育模式，提示早期發(fā)育模式可能與親本遺傳性狀有關(guān)。

2.3 家系畸形與死亡

27個(gè)配對(duì)親本的子代在培育過程中全部死亡，每個(gè)配對(duì)后代大量死亡時(shí)，均觀察到異?，F(xiàn)象，包括受精率低、孵化率低、胚胎畸形、水質(zhì)惡化、日光暴曬、溫度驟變以及變態(tài)期未及時(shí)鋪沙和投喂的餌料被雜藻污染等，其中大部分配對(duì)后代的死亡伴隨胚胎畸形或水質(zhì)惡化現(xiàn)象。總體來看，前期獲得的配對(duì)死亡時(shí)大多出現(xiàn)水質(zhì)惡化現(xiàn)象，而后期獲得的配對(duì)中大多觀察到胚胎畸形率過高，不同原因?qū)е录蚁邓劳龅谋壤妶D2。

圖2 不同原因?qū)е氯毡疚牟~家系死亡的比例Figure 2 Death ratio of amphioxus families caused by various factors

有 11個(gè)配對(duì)親本所產(chǎn)子代中出現(xiàn)了嚴(yán)重的胚胎發(fā)育畸形現(xiàn)象，畸形率＞90%，而且畸形的特征非常一致，主要特征是受精卵前三次卵裂時(shí)產(chǎn)生細(xì)胞間的粘連不緊密，甚至完全分離，各自獨(dú)立發(fā)育為一個(gè)結(jié)構(gòu)完整的較小胚胎，最終一枚受精卵形成兩個(gè)或多個(gè)胚胎，到神經(jīng)胚后期，兩個(gè)或幾個(gè)胚胎在受精膜內(nèi)轉(zhuǎn)動(dòng)受阻，通常無法正常出膜而死亡，個(gè)別能夠出膜的個(gè)體多出現(xiàn)幼體尾端粘連，最終不能存活?；闻咛グl(fā)育過程見圖3。

圖3 日本文昌魚畸形胚胎發(fā)育過程Figure 3 Abnormal developmental embryos of B. japonicum

為探求胚胎畸形的原因，我們用不同的授精方式（包括受精容器大小、受精時(shí)間長(zhǎng)短、受精時(shí)所用精卵比例、受精時(shí)有無光照等）得到同一配對(duì)親本的后代，在不同的條件下發(fā)育，其胚胎畸形率相當(dāng)；而用相同授精方式得到的不同配對(duì)親本的后代，在相同條件下發(fā)育，則畸形率相差甚遠(yuǎn)。通過設(shè)置以上對(duì)照實(shí)驗(yàn)，排除了人工授精操作和胚胎孵化條件造成胚胎畸形的可能性，由此推測(cè)這種畸形主要是由親本遺傳因素造成的，可能與精液或卵子質(zhì)量不佳有關(guān)。而后我們用同一條雄魚所產(chǎn)的精液同時(shí)給兩尾雌魚所產(chǎn)的卵子分別受精，在相同條件下孵化，受精后一直在解剖鏡下觀察，結(jié)果一組畸形率很高而另一組幾乎沒有出現(xiàn)畸形，因此確定這種畸形與雌性親本產(chǎn)卵質(zhì)量有直接關(guān)系。前期獲得的1～12號(hào)配對(duì)中，大部分配對(duì)沒有發(fā)現(xiàn)畸形現(xiàn)象，只在少數(shù)配對(duì)中出現(xiàn)個(gè)別畸形，并未對(duì)整個(gè)配對(duì)后代的存活造成大的影響，但最初配對(duì)的這些家系因管護(hù)經(jīng)驗(yàn)不足而全部夭折；后期獲得的13～34號(hào)配對(duì)中，較多的家系出現(xiàn)了高比率的畸形現(xiàn)象，隨著管護(hù)經(jīng)驗(yàn)的積累，其中有7對(duì)親本所產(chǎn)家系成功培育至完成變態(tài)鉆入沙中，此后的仔代死亡率就很低了。實(shí)際上我們?cè)谡T導(dǎo)親本產(chǎn)卵的操作過程中，在3月初，一次性將所有親本都置于低溫環(huán)境下養(yǎng)殖以備催產(chǎn)。與前期獲得的親本配對(duì)相比，后期配對(duì)的親本在低溫下養(yǎng)殖的時(shí)間達(dá) 25天以上，因此雌性親本在較低溫度下長(zhǎng)時(shí)間養(yǎng)殖可能是導(dǎo)致胚胎早期畸形率高的原因之一。

前期獲得的 3、4、6、7、9、11及 12號(hào)等 7個(gè)配對(duì)后代死亡時(shí)觀察到水質(zhì)惡化現(xiàn)象，包括兩種不同的情況：有的家系明顯可見水體中懸浮著很多雜藻和文昌魚排泄物；有的肉眼觀察不到明顯的水質(zhì)變化，將水滴置于鏡下觀察時(shí)可見水中雜質(zhì)很多，水體不清澈。文昌魚對(duì)水質(zhì)變化非常敏感，一旦水質(zhì)惡化，仔魚立即停止進(jìn)食，并在1～2 d內(nèi)整個(gè)家系的個(gè)體全部死亡。早期水質(zhì)惡化主要是海水中原有的雜藻、蟲卵孵化、生長(zhǎng)所致，后期水質(zhì)惡化的原因主要有：投喂餌料時(shí)引入蟲卵、文昌魚排泄物積累、未吃完的藻類死亡分解，特別是當(dāng)有部分仔魚死亡后未及時(shí)清理，會(huì)導(dǎo)致水質(zhì)很快惡化，引起文昌魚大規(guī)模死亡。

編號(hào)為2、18、32、34號(hào)的4個(gè)配對(duì)的卵受精不正常，包括卵子、精子本身質(zhì)量差造成的受精率低、受精后發(fā)育不良，完成受精后未及時(shí)去除多余精子導(dǎo)致的受精卵死亡。幼體養(yǎng)殖過程中曾有一段時(shí)間投喂的金藻中混入了很多角毛藻，角毛藻個(gè)體較大，而幼體的口較小，無法順利吞食，因此投喂角毛藻會(huì)后造成口被堵塞，無法繼續(xù)攝食，致使大量幼體死亡，其中8號(hào)和14號(hào)配對(duì)的幼體因餌料污染全部死亡。

在所有配對(duì)的家系中，5號(hào)家系第一個(gè)進(jìn)入變態(tài)期，但當(dāng)時(shí)桶底未及時(shí)鋪沙，幼體試圖鉆沙時(shí)前端撞傷，停止攝食，最終全部死亡。10號(hào)家系在受精后的當(dāng)晚，因加熱棒夜間意外斷電，水溫下降至19 ℃，大量胚胎死亡，剩余胚胎發(fā)育成的幼體不能正常形成鰓裂，無法攝食，最終全部死亡。我們?cè)诔跗诘募蚁蹬嘤龝r(shí)，用半透明的塑料桶孵化仔魚，只在正午光線太強(qiáng)時(shí)做遮光處理，但隨著仔魚的發(fā)育，其眼點(diǎn)數(shù)不斷增加，感光能力增強(qiáng)，而仔魚尚無鉆沙能力，因光線過強(qiáng)對(duì)仔魚的生長(zhǎng)發(fā)育不利，導(dǎo)致大量死亡（如 1號(hào)配對(duì)）。后改用深色的帶蓋的塑料桶，只留一個(gè)小孔透光、通氣，未再出現(xiàn)因光線太強(qiáng)而導(dǎo)致仔魚大量死亡的現(xiàn)象。

在最終存活的7個(gè)家系中，24、25、29號(hào)家系早期有一些胚胎畸形，24、25號(hào)家系畸形胚胎出膜前死亡，幼體孵化率不高，29號(hào)家系畸形胚胎存活至正常幼魚開口，導(dǎo)致開口到3鰓裂期間死亡率很高，結(jié)果這三個(gè)家系的生存率低。33號(hào)家系3鰓裂至8鰓裂期間發(fā)育緩慢，死亡率高，導(dǎo)致最終生存率僅有1.67%。

3 討論

3.1 文昌魚全同胞家系建立的可行性

建立全同胞家系是培育品系的重要途徑，也是進(jìn)行遺傳性狀分析和構(gòu)建連鎖圖譜的重要材料，在遺傳育種研究中起著重要作用，許多物種通過建立家系育成了新的品種（Thodesen et al, 2011），并建立了遺傳連鎖圖譜（Petersen et al, 2012; Wilson et al,2002）。使文昌魚成為實(shí)驗(yàn)室模式動(dòng)物，需要從野生群體中培育文昌魚品系，但文昌魚的人工繁殖初告成功，從受精卵培育到成體過程中死亡率非常高（Zhang et al, 2007），稍有不慎幼體在孵化或發(fā)育過程中即全部消亡，能否建立全同胞家系無任何經(jīng)驗(yàn)可以借鑒。本研究結(jié)果表明，只要選擇合適的親本配對(duì)，采用適當(dāng)?shù)酿B(yǎng)護(hù)措施，子代發(fā)育至完成變態(tài)的活率可大大高于前人的估測(cè)（Courtney, 1975），在本實(shí)驗(yàn)中成活率最高可達(dá)32.4%，而且這一比率還有進(jìn)一步提高的可能，因此文昌魚家系建立是完全可行的。

我們?cè)谖牟~全同胞對(duì)家系培育過程中發(fā)現(xiàn)，不同家系間在孵化率、生長(zhǎng)發(fā)育速度、成活率等方面的差異很大。因此通過建立全同胞家系，有目的的定向選育和雜交，可以培育遺傳背景一致性高、生長(zhǎng)發(fā)育快、成活率高等性狀優(yōu)良的文昌魚品系，使文昌魚成為真正的實(shí)驗(yàn)室模式動(dòng)物。

3.2 發(fā)育模式與仔魚存活的關(guān)系

此前的研究已發(fā)現(xiàn)日本文昌魚3鰓裂階段持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，～15 d，3鰓裂幼體到8鰓裂幼體期間的死亡率極高，到幼體完成變態(tài)的時(shí)間需要40～50 d（Zhang, 2007），這與本研究中的第二種發(fā)育模式相同。我們?cè)诩蚁蹬嘤倪^程中還發(fā)現(xiàn)了日本文昌魚早期發(fā)育的另一種模式，幼魚3鰓裂期僅需數(shù)日，幼體完成變態(tài)的時(shí)間最短僅歷時(shí)24 d（27號(hào)家系），這樣的家系3鰓裂到8鰓裂階段死亡率也較低，只要度過這一段艱難時(shí)期，幼體變態(tài)潛沙后存活力和適應(yīng)力大大增強(qiáng)，死亡率低，群體的數(shù)量趨于穩(wěn)定。因此在今后的品系培育工作中，選用第一種模式的親魚，可以縮短幼體培育時(shí)間，提高子代生存率，同時(shí)也表明第一種發(fā)育模式的文昌魚更適合培育成為實(shí)驗(yàn)室模式動(dòng)物。

3.3 文昌魚幼體主要死因的解決辦法

畸形胚胎使幼體孵化率大大降低，從而影響總存活率（如24、25號(hào)家系），甚至造成了大量家系死亡（13、15～17、19～23、28、30號(hào)家系）。這些家系的雌性親本在較低溫度下長(zhǎng)時(shí)間養(yǎng)殖可能是導(dǎo)致胚胎早期畸形率高的主要原因，因此在誘導(dǎo)產(chǎn)卵時(shí)，應(yīng)將親魚分期分批地進(jìn)行低溫養(yǎng)殖，保證親魚在低溫環(huán)境中少于 20天，避免親魚產(chǎn)卵質(zhì)量不佳而導(dǎo)致胚胎畸形。此外，由于劇烈震蕩可能導(dǎo)致粘連本就不緊密的卵裂細(xì)胞更易分離，為降低胚胎畸形率，應(yīng)注意受精后孵化的早期充氣量不宜太大，避免水花翻騰過于激烈，受精卵密度不高時(shí)，也可靜水孵化。

文昌魚對(duì)水質(zhì)變化特別是水的清潔度非常敏感，水體惡化后文昌魚幼體停止攝食，并很快死亡。因此在養(yǎng)殖過程中必須每天測(cè)量水溫和鹽度，及時(shí)調(diào)節(jié)，保持各桶內(nèi)海水溫度25～27 ℃，鹽度25‰～28‰，并每天觀察水體清潔程度。為避免早期水質(zhì)惡化，可將沙濾過的海水用單層新華濾紙?jiān)龠^濾一次，盡量去除雜質(zhì)，每次孵育受精卵時(shí)應(yīng)使用新鮮過濾的海水。為防止后期水質(zhì)惡化引起文昌魚大規(guī)模死亡，要每天觀察水質(zhì)變化情況，餌料投喂不可過量，一旦發(fā)現(xiàn)文昌魚數(shù)量減少，要立即換水，避免大規(guī)模死亡發(fā)生。我們后期獲得的家系由于采取了新鮮過濾海水并及時(shí)換水的方法，未再出現(xiàn)文昌魚幼體因水質(zhì)惡化而大量死亡的現(xiàn)象。

在前期進(jìn)行家系培育時(shí)，部分仔魚因光線太強(qiáng)而死亡，在張秋金等的研究中采用透明或不透明的養(yǎng)殖容器對(duì)成體和幼體進(jìn)行培育，并未出現(xiàn)明顯差異，但此項(xiàng)養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)是在光線較昏暗的房間中進(jìn)行，需以日光燈輔助照明，而本研究的養(yǎng)殖房是墻壁和屋頂透明的陽光房，使用自然光線照明。因此，在文昌魚仔魚培育中需進(jìn)行遮光處理，避免陽光直射。

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