羅春燕

(青海省農(nóng)林科學(xué)院青藏高原野生植物資源研究所食用菌研究室，青海 西寧 810016)

雞腿菇 (Coprinus comatus)學(xué)名毛頭鬼傘，在分類學(xué)上隸屬真菌門、擔(dān)子菌亞門、層菌綱、傘菌目、鬼傘科、鬼傘屬，又稱雞腿蘑、刺蘑菇。雞腿菇肉質(zhì)細(xì)嫩，味道鮮美，蓋肥柄脆，潤滑爽口，營養(yǎng)豐富，含有人體所必需的8種氨基酸?，F(xiàn)代研究表明雞腿菇具有抗氧化、降血糖、防止肝損傷、抗腫瘤、提高免疫力、抑菌等功效，其子實體中含有治療糖尿病的有效成分，并能從中提取具有較高免疫活性和抗腫瘤活性的多糖類物質(zhì)［1］，是一種具有較高商業(yè)開發(fā)價值和應(yīng)用前景的食藥兩用真菌，被WHO和FAO確定為具“天然、營養(yǎng)、保健”3種功能為一體的16種珍稀食用菌之一。雞腿菇適應(yīng)性廣泛，栽培容易，其開發(fā)和應(yīng)用前景廣闊。近年來，雞腿菇栽培面積逐年增加，農(nóng)業(yè)科技工作者對雞腿菇菌絲生長條件［2，3］、培養(yǎng)基配方［4，5］、覆土出菇方式［6－9］、栽培料配方與其生長發(fā)育及產(chǎn)量的關(guān)系等［10，11］進行了大量研究。但有關(guān)雞腿菇液體和固體菌種制作及栽培的對比試驗尚未見報道。隨著我國食用菌產(chǎn)業(yè)的不斷發(fā)展，運用液體菌種進行生產(chǎn)，不但能大幅提高食用菌的產(chǎn)量和質(zhì)量，同時也符合食用菌產(chǎn)業(yè)向機械化、集約化和周年化生產(chǎn)發(fā)展的趨勢。目前，在推進食用菌產(chǎn)業(yè)化發(fā)展的過程中，液體菌種應(yīng)用和推廣是關(guān)鍵一環(huán)。本試驗對雞腿菇液體和固體菌種制作及栽培進行對比研究，旨在為雞腿菇液體菌種推廣應(yīng)用于生產(chǎn)提供參考，為雞腿菇的豐產(chǎn)栽培提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌株

供試菌株雞腿菇1號，由青海省農(nóng)林科學(xué)院食用菌研究室提供。

1.1.2 培養(yǎng)基

試管培養(yǎng)基:PDA培養(yǎng)基;搖瓶種子培養(yǎng)基:麥麩4%、玉米粉 3%、葡萄糖 2%、酵母粉 0.5%、KH2PO40.35%、MgSO40.1%;原種培養(yǎng)基:麥粒99%、輕質(zhì)碳酸鈣l%，含水率60%，pH 7.5(用石灰水調(diào)節(jié));栽培培養(yǎng)基:棉籽殼88%、麥麩 4.5%、玉米粉 3%、石膏 2%、石灰 2%、尿素0.5%，含水率65%，pH 8.0(用石灰水調(diào)節(jié))。

1.1.3 主要儀器與設(shè)備

恒溫?fù)u床THZ－92A，上海浦東物理光學(xué)儀器廠;培養(yǎng)箱MJ－25085－II，上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司;單人單面凈化操作臺SW－CJ－IFD，蘇州凈化設(shè)備有限公司;電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱DHG－914385－III，上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司;電子天平BL－2200H;不銹鋼立式壓力滅菌鍋，上海搏訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠制造等。

1.2 方法

通過對雞腿菇液體和固體菌種生產(chǎn)周期、成本效益的分析，對比在菌種制作過程中的異同，并在同等條件下進行栽培管理，分析比較出菇情況及產(chǎn)量差異。液體菌種接種栽培袋的接種量設(shè)為10 mL、20 mL和30 mL，分別為處理I、處理II和處理III，固體菌種接種栽培袋為處理IV，液固菌種接種栽培袋為處理V，處理IV和處理V接種量一致。各處理以100個菌袋為1個小區(qū)，各小區(qū)設(shè)3次重復(fù)。分析各處理的發(fā)菌速度、出菇整齊度、子實體發(fā)育情況及產(chǎn)量差異。本試驗將處理IV和處理V均視為液體菌種，兩者區(qū)別在于制種過程中搖瓶液體菌種的應(yīng)用方式不同，處理IV的液體菌種是將搖瓶液體菌種直接接入栽培袋料中培養(yǎng)，處理V的液固菌種則是將搖瓶液體菌種直接接入麥粒原種培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，待原種滿瓶后再接入栽培袋。

1.2.1 液體菌種的制備

將25℃恒溫培養(yǎng)10 d的斜面試管母種，切取0.5 cm2接種塊3塊在超凈工作臺上接種于250 mL三角瓶中，三角瓶的裝液量為150 mL，靜置48 h后在25℃、200 r·min－1條件下恒溫?fù)u床培養(yǎng)7 d，得到搖瓶液體菌種，然后將搖瓶液體菌種用注射器按10 mL、20 mL和30 mL分別接入經(jīng)126℃高壓滅菌2 h后冷卻的栽培袋中，25℃培養(yǎng)，待菌絲滿袋得雞腿菇液體菌種。

1.2.2 固體菌種的制備

將麥粒煮熟后控水，與輕質(zhì)碳酸鈣拌勻裝瓶，126℃高壓滅菌2 h，冷卻后將25℃恒溫培養(yǎng)10 d的斜面試管母種，切取1 cm2大小的接種塊在超凈工作臺上接種于麥粒原種培養(yǎng)瓶中，25℃培養(yǎng)，待菌絲滿瓶得到麥粒原種。然后將麥粒原種接種于經(jīng)126℃高壓滅菌2 h后冷卻的栽培袋中，每瓶原種接15個栽培袋，25℃培養(yǎng)待菌絲滿袋得雞腿菇固體菌種。

1.2.3 液固菌種的制備

將1.2.1所得搖瓶液體菌種，按5 mL·瓶－1接種于經(jīng)126℃高壓滅菌2 h后冷卻的原種培養(yǎng)瓶中，25℃培養(yǎng)，待菌絲滿瓶后接種于經(jīng)高壓滅菌的栽培袋中 (同1.2.2)，待菌絲滿袋得雞腿菇液固菌種。

2 結(jié)果與分析

2.1 雞腿菇液體與固體菌種制作流程比較

固體菌種制作工藝流程:試管母種→原種→栽培種。

液固菌種制作工藝流程:試管母種→搖瓶液體菌種→原種→栽培種。

固體菌種制作工藝流程:試管母種→搖瓶液體菌種→栽培種。

2.2 雞腿菇液體與固體菌種發(fā)菌速度比較

雞腿菇液體與固體菌種各階段發(fā)菌時間對照情況見表1。

表1 雞腿菇液體與固體菌種各階段發(fā)菌時間對照

由表1可知，液體菌種發(fā)菌速度最快，用時最少，節(jié)省時間最多，從試管母種到栽培種的整個制作過程僅需44 d。固體菌種發(fā)菌速度最慢，用時最多，從試管母種到栽培種的制備需要約70 d。液固菌種則介于前兩者之間，這種菌種制作方式極大地縮短了原種培養(yǎng)時間，僅僅需要常規(guī)固體原種培養(yǎng)的1/4時間即可，也顯著提高了制種效率，可以根據(jù)菌種制作的實際情況選擇應(yīng)用。

液體菌種接種量為20 mL時，菌種長滿菌袋的時間比接種量為10 mL的菌袋提前4 d～5 d，接種量為30 mL時與接種量為10 mL的滿袋時間沒有明顯差異，可見并不是接種量越多越好，接種量過多，超過一定的量后，對菌絲生長速度的影響反而不明顯，并不能縮短菌種滿袋的時間，從節(jié)約成本和節(jié)省發(fā)菌時間兩方面綜合考慮，液體菌種的接種量為10 mL最優(yōu)，這樣既節(jié)約成本又不影響發(fā)菌速度。

2.3 雞腿菇液體與固體菌種制作過程比較

液體菌種制作工藝簡單，培養(yǎng)時間明顯縮短，固體菌種制作用時較長，幾乎需要液體菌種的2倍 (表1)。液體菌種接種速度快，操作簡便，一小時可以接種約400瓶，而固體菌種一小時最多能接100瓶，可見，液體菌種的接種時間僅是固體菌種的1/4，極大地提高了接種效率，同時節(jié)省了將近3/4的人工，從而也就顯著降低了成本投入，提高了工作效率。另外，液體菌種接種快捷方便，有力避免了一些由于接種過程繁雜而在接種時難免造成的污染，同時，由于其發(fā)菌速度快，在培養(yǎng)發(fā)菌過程中也明顯降低了污染率，使得從接種到培養(yǎng)過程中菌袋成功率大大提高。試驗得出液體菌種污染率僅是固體菌種的1/3左右。

2.4 雞腿菇液體與固體菌種出菇情況與產(chǎn)量比較

試驗表明，在同等播種量、同等栽培管理條件下，液體菌種比固體菌種提前3 d～5 d冒菌，相應(yīng)的頭潮菇出菇時間也提前3 d～5 d，而且出菇整齊，密度大，成品菇率達(dá)80%以上，死菇少。液固菌種較固體菌種提前1 d～2 d出菇，出菇整齊度、密度與固體菌種無明顯差異，兩者成品菇率均為70%左右。3種菌種出菇產(chǎn)量統(tǒng)計見表2。

表2 雞腿菇液體菌種和固體菌種產(chǎn)量對照

由表2可知，在同等栽培環(huán)境條件下，雞腿菇液體菌種出菇產(chǎn)量最高，分別高出固體菌種和液固菌種的17.48%和8.08%。另外，液體菌種頭潮菇產(chǎn)量高，所占比重最大，而頭潮菇一般是品質(zhì)最優(yōu)的上等菇，市場競爭力強，經(jīng)濟效益高?？梢姡后w菌種的出菇產(chǎn)量和效益都優(yōu)于固體菌種。

2.5 雞腿菇液體與固體菌種成本比較

雞腿菇液體與固體菌種成本比較見表3。

表3 液體菌種和固體菌種投入成本比較

由于液體菌種和固體菌種制作流程不同，成本投入也有差異。液體菌種制作流程簡單，所需原材料較少，成本投入低，固體菌種制作流程相對繁雜，原材料用量較大，所需成本是液體菌種的3倍之多，而液固菌種介于兩者之間。另外，從菌種制作流程比較，固體菌種制備所需要的場地大，并且菌種培養(yǎng)需要的時間相對較長，液體菌種制作簡便快捷，所需要的制種場地小，靈活方便，可以節(jié)省一部分場地租用費和水電能的消耗。同時，由于液體菌種接種速度快，效率高，與固體菌種相比，節(jié)省了將近3/4的人工，從而也就節(jié)省了相當(dāng)大的一部分成本投入。試驗表明，雞腿菇液體菌種的總成本投入不到固體菌種的1/3。

3 結(jié)論與討論

在食用菌產(chǎn)業(yè)中，菌種生產(chǎn)作為這一產(chǎn)業(yè)的首道工序，關(guān)系著這一產(chǎn)業(yè)的成敗，其重要性不言而喻。近年來，液體菌種以其獨特的優(yōu)勢越來越受到食用菌生產(chǎn)者和企業(yè)的青睞，對雞腿菇液體菌種和固體菌種制作流程及栽培出菇試驗進行了對比研究。結(jié)果得出，首先，與固體菌種相比，液體菌種發(fā)菌速度快、培養(yǎng)時間短，從試管母種到栽培種僅需要44 d，而固體菌種需要近70 d，節(jié)省了制種時間，縮短了生產(chǎn)周期;其次，液體菌種菌齡整齊一致、出菇早、產(chǎn)量高、品質(zhì)好，較固體菌種大大提高了產(chǎn)品經(jīng)濟效益和市場競爭力;再次，液體菌種制作簡單、場地靈活、接種簡便快捷、污染率低、節(jié)省人工、能耗低，從而大幅度降低了生產(chǎn)投入，成本不到固體菌種的1/3，這樣就顯著提高了生產(chǎn)效益，增加了生產(chǎn)者的積極性，并有利于食用菌規(guī)?；?、工廠化生產(chǎn)。目前，隨著食用菌產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展，傳統(tǒng)的食用菌生產(chǎn)模式越來越不能滿足食用菌日益發(fā)展的要求，液體菌種已成為當(dāng)前食用菌制種產(chǎn)業(yè)的發(fā)展趨勢。因此，利用液體發(fā)酵培養(yǎng)技術(shù)進行食用菌工業(yè)化制種的深入研發(fā)已成為當(dāng)前推動食用菌產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要內(nèi)容，本試驗的研究為雞腿菇液體菌種在生產(chǎn)中的進一步推廣應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)，提供了理論依據(jù)。

［1］李詩鵬，蘇蕾．雞腿菇多糖的提取及其免疫活性抗腫瘤活性的研究 ［J］．中國商辦工業(yè)，2000(1):44－45．

［2］王桂芹，張玉磊．雞腿菇菌絲生長條件研究 ［J］．中國林副特產(chǎn)，2007(2):87－89．

［3］辛?xí)粤?，黃清榮，董洪新，等．雞腿菇菌絲體液體深層培養(yǎng)條件優(yōu)化研究 ［J］．浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2003(6):307－308．

［4］聶建軍，李彩萍，楊玉畫，等．雞腿菇液體菌種的制備及應(yīng)用［J］．山西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39(8):826－827，831．

［5］李碧瓊，陳政明，林俊揚．雞腿菇培養(yǎng)基配方研究［J］．中國食用菌，2008，27(2):19－20．

［6］王振河，董自梅．不同覆土出菇方式對雞腿菇產(chǎn)量的影響 ［J］．安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2005，33(12):2304－2305．

［7］楊宣華，張維民，關(guān)仕港，等．不同覆土深度對雞腿菇子實體產(chǎn)量的影響 ［J］．中國食用菌，2003，23(2):27－28．

［8］王尚堃，葉俊英，李段，等．雞腿菇不同覆土厚度對比試驗［J］．河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2004(8):65－67．

［9］何莉，聞杰，王尚堃，等．雞腿菇不同出菇方式的比較［J］．安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2006，34(16):3960－3961．

［10］王軍英，王芳，賈靜，等．白靈菇菌糠栽培雞腿菇配方試驗［J］．食用菌，2011(3):37－38．

［11］李媛媛，陶鴻．不同配比的稻草秸稈培養(yǎng)料對雞腿菇生長發(fā)育影響的研究 ［J］．宜春學(xué)院學(xué)報，2011，33(12):136－139．

［12］王相剛．蕈菌學(xué)［M］．北京:中國林業(yè)出版社，2010．