許月明

(蕪湖職業(yè)技術(shù)學(xué)院生物工程系，安徽 蕪湖 241003)

平菇 (Pleurotus ostreatus)又稱側(cè)耳、北風(fēng)菌、青蘑、凍菌，在分類學(xué)上屬擔(dān)子菌亞門、層菌綱、傘菌目、側(cè)耳屬，是世界上種植面積最大的食用菌之一［1，2］。平菇肉質(zhì)肥嫩，味道鮮美，營養(yǎng)豐富，含有大量的蛋白質(zhì)、維生素和豐富的礦物質(zhì)，同時(shí)兼有藥用功能，因此，平菇與一般蔬菜相比，深受人們喜愛［3，4］。隨著社會經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展，人們生活水平的日益提高，人們對食品安全和食品保健功能的逐步認(rèn)知，平菇的消費(fèi)市場將會不斷擴(kuò)大，對平菇需求量也將逐年增加。此外，平菇具有適應(yīng)性廣、栽培技術(shù)簡單、經(jīng)濟(jì)效益顯著等特點(diǎn)［5］。因此，平菇發(fā)展的前景可觀。

我國作為平菇栽培大國，近年來開展了平菇的育種研究工作，并取得一定進(jìn)展。王敬榮等［6］比較了48株平菇菌株的產(chǎn)量、品質(zhì)、抗逆性等栽培性狀，篩選出適合山東省生產(chǎn)應(yīng)用的品種。姜新良等［7］對引進(jìn)的10個(gè)平菇菌株進(jìn)行比較試驗(yàn)，篩選出3個(gè)菌株作為下一步雜交育種出發(fā)菌株。但在平菇產(chǎn)業(yè)發(fā)展過程中，適宜品種的選擇仍是目前平菇生產(chǎn)中存在的主要問題，每年因平菇品種的選擇不當(dāng)?shù)葐栴}，給平菇生產(chǎn)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失［8］。為解決平菇產(chǎn)業(yè)發(fā)展中存在的問題，推進(jìn)產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展，篩選高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)適合本地的平菇新菌株顯得尤為重要。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌株

試驗(yàn)用的平菇菌株收集自安徽省各菌種廠，均由蕪湖職業(yè)技術(shù)學(xué)院生物實(shí)驗(yàn)室保存，分別標(biāo)號為Ps1～Ps12。

1.1.2 培養(yǎng)基

固體培養(yǎng)基 (PDA):馬鈴薯20%、葡萄糖2%、瓊脂2%，餾水定容;液體培養(yǎng)基:黃豆粉2%、葡萄糖2%、酵母1%、KH2PO40.05%、MgSO4·7H2O 0.05%;栽培袋培養(yǎng)料配方:棉籽殼83%、麥麩10%、過磷酸鈣2%、石膏粉2%、石灰3%，含水量65%［9］。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 菌株的準(zhǔn)備

將冰箱保存的斜面菌株分別進(jìn)行活化，轉(zhuǎn)接到新鮮固體斜面PDA培養(yǎng)基上，25℃培養(yǎng)7 d后作為菌種備用，并將活化的斜面菌種接種至黃豆粉液體培養(yǎng)基中，25℃溫度下130 r·min－1培養(yǎng)7 d后作為液體菌種備用。

1.2.2 菌株生長速度測定

將12個(gè)菌株的菌絲在平皿上相互接種后，均產(chǎn)生明顯的拮抗線，表明12個(gè)菌株為不同的菌株。將活化好的12個(gè)平菇菌株接種到PDA平板培養(yǎng)基上，設(shè)置5個(gè)重復(fù)，25℃培養(yǎng)7 d，每天觀測菌絲生長并記錄菌落直徑，菌絲生長均勻、濃密、粗壯且潔白的為優(yōu)，用“+++”表示;菌絲較濃密、較粗壯且潔白度遜色于優(yōu)的定為良，用“++”表示;菌絲稀疏，灰白色為一般，用“+”表示［10］。

1.2.3 菌球密度、直徑及干重的測定

將液體菌種以10%的接種量接種到黃豆粉液體培養(yǎng)基中，設(shè)置5個(gè)重復(fù)，250 mL三角瓶裝液量100 mL，置25℃溫度下130 r·min－1培養(yǎng)5 d。將培養(yǎng)好的搖瓶用微量移液器吸取l mL培養(yǎng)液攤勻于培養(yǎng)皿中，在暗背景下用放大鏡直觀計(jì)數(shù)菌球密度。培養(yǎng)結(jié)束后，隨機(jī)選取15個(gè)菌球，在培養(yǎng)皿中排成1排，皿下襯坐標(biāo)紙測量樣本中全部菌球直徑。菌球清洗、3 000 r·min－1離心10 min，于80℃恒溫烘干至恒重，測量菌球樣品的干重。每菌株5個(gè)重復(fù)，取平均值［11］。

1.2.4 平菇菌株栽培子實(shí)體的比較

選擇性狀測定結(jié)果良好的3個(gè)菌株 (Ps5、Ps7、Ps10)用于進(jìn)一步的子實(shí)體產(chǎn)量試驗(yàn)。裝入30 cm×15 cm的聚丙烯袋中，每袋約裝干料0.4 kg，在栽培料拌料時(shí)，每個(gè)供試菌株接40袋，兩端用繩扎緊，常壓滅菌，保溫8 h，冷卻至30℃后室內(nèi)開放式接種。當(dāng)菌球覆蓋整個(gè)栽培袋開始現(xiàn)蕾后，轉(zhuǎn)移到菇架，解開封口繩，保持25℃，85%空氣濕度，適量光照，進(jìn)行出菇。待平菇子實(shí)體菌褶出現(xiàn)開裂時(shí)視為成熟，開始采摘。同時(shí)觀察出菇情況，采收并稱重。子實(shí)體采摘后，于80℃烘箱烘干至恒重，稱量干重，記錄生物量數(shù)據(jù)［12］。

1.3 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS(2001)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，經(jīng)方差分析后進(jìn)行Duncan's多重比較，檢驗(yàn)各處理間的差異顯著性 (p=0.05)。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌絲生長性狀的測定

菌株的生長性狀見表1。

由表1可以看出，不同菌種在PDA培養(yǎng)基中長勢差異較大，菌株P(guān)s5、Ps7和Ps10菌落的日生長量最大，分別為1.28 cm、1.32 cm和1.29 cm，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，其與其它9種菌種相比差異達(dá)到極顯著水平;而Ps1的生長速度最慢，日生長量僅為0.44 cm。同時(shí)，菌株P(guān)s5、Ps7、Ps9和Ps10的菌絲生長均勻、濃密、粗壯且潔白。

表1 菌株的生長性狀

2.2 搖瓶菌球生長情況的測定

菌株的菌球生長情況見表2。

表2 菌株的菌球生長情況

由表2可知，不同菌種在不同的液體培養(yǎng)基中長勢差異較大，菌株P(guān)s5、Ps7和Ps10的菌球干重和平均直徑較大，方差分析表明三者間無顯著性差異，但與其它9個(gè)菌株相比有顯著性差異;菌株P(guān)s8和Ps10的菌球密度最大，分別為108.40個(gè)和107.20個(gè)。綜合考慮，Ps5、Ps7和Ps10在搖瓶培養(yǎng)基中長勢均好，菌球干重大。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)菌株P(guān)s5、Ps7和Ps10菌球濃密且大小均勻，因此選用這3個(gè)菌株進(jìn)行下一步的篩選試驗(yàn)。

2.3 平菇子實(shí)體出菇時(shí)間及產(chǎn)量測定

菌株子實(shí)體干重和生產(chǎn)周期情況見表3。

表3 菌株子實(shí)體干重和生產(chǎn)周期

試驗(yàn)菌株在出菇過程中，Ps10菌株的出菇時(shí)間僅為38.60 d，子實(shí)體產(chǎn)量達(dá)0.46 kg，生物學(xué)效率為115.00%，該菌株顯蕾時(shí)間早，子實(shí)體朵大肉厚、柄粗長、菇形圓整，生產(chǎn)周期短，平均產(chǎn)量及生物轉(zhuǎn)化率最高，各項(xiàng)指標(biāo)均優(yōu)于其他菌株。其次為Ps5菌株，Ps7菌株各項(xiàng)性狀最差。

3 小結(jié)

平菇菌種質(zhì)量好壞直接關(guān)系到平菇產(chǎn)業(yè)能否健康發(fā)展。目前平菇市場缺乏統(tǒng)一管理，菌種退化、老化，品種混雜等問題嚴(yán)重。拮抗作用是鑒定不同菌株的傳統(tǒng)方法，菌絲間的拮抗反應(yīng)是菌株之間不同遺傳特性的表現(xiàn)［13，14］。本試驗(yàn)通過對12株平菇供試菌株間的拮抗試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)供試菌株之間產(chǎn)生了明顯的拮抗線，說明各供試菌株之間有較大的遺傳差異，屬于不同的菌株。

當(dāng)前，平菇菌種生產(chǎn)仍采用傳統(tǒng)的母種、原種、栽培種的固體培養(yǎng)模式，周期長，污染率高，菌齡相差懸殊。而液體菌種周期短、菌齡一致、流動性好、萌發(fā)快、污染率低［15］。因此，下一步還需對該菌株液體菌種的發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化。

本試驗(yàn)通過建立標(biāo)準(zhǔn)的培養(yǎng)和觀察方法，利用多項(xiàng)指標(biāo)，采取連續(xù)觀察，選育出適合本地栽培的商品性能好的平菇優(yōu)良菌株P(guān)s10。該菌株的出菇時(shí)間僅為38.60 d，子實(shí)體產(chǎn)量達(dá)0.46 kg，生物學(xué)效率為115.00%，具有菌絲生長旺盛、致密;菌球的干重和直徑大;菇形圓整、濃白色、朵大、叢生;出菇周期短、產(chǎn)量高、生物轉(zhuǎn)化率高的優(yōu)點(diǎn)，在今后平菇栽培中具有巨大的應(yīng)用潛力。

［1］王桂芹，李戈．平菇種質(zhì)資源評價(jià) ［J］．中國食用菌，2006，25(1):14－17．

［2］ Camphell AC，Slee RW．Commercial cultivation of shiitake in Tsiwan and Japan［J］．Mushroom，1987(2):170．

［3］王釗，梁瑞璋．平菇優(yōu)良菌種篩選及其營養(yǎng)成分研究 ［J］．中國食用菌，1999，18(2):9－11．

［4］ Ahn YJ，Park SJ，Lee SG．Cordycepin:selective growth inhibitor derived from liquid culture of Cordyceps militaris against Clostridium spp．［J］．Journal of Agricultural and Food Chemistry，2000，48(7):2744－2748．

［5］杜敏華．食用菌栽培學(xué)［M］．北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2007．

［6］王敬榮，張玉昆，王德源，等．平菇優(yōu)良菌種 (株)篩選［J］．山東科學(xué)，1994，7(3):52－55．

［7］姜新良，趙占春，李蓁，等．十個(gè)平菇菌株比較試驗(yàn) ［J］．食用菌，2006，28(6):18－19．

［8］范可章，陳靈，蔡健，等．平菇在12種秸稈主料基質(zhì)中生長情況的初步研究［J］．安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，38(5):806－811．

［9］趙占春，姜新良，李蓁，等．平菇雜交菌株A34N22、A34F28的選育 ［J］．中國食用菌，2009，28(3):16－17，27．

［10］趙占春，姜新良，李蓁，等．港平l號生物學(xué)特性及栽培技術(shù)要點(diǎn) ［J］．食用菌，2009，31(5):27，36．

［11］孟麗君，王芳，張玉萍，等．平菇液體菌種的制備條件及應(yīng)用研究 ［J］．中國食用菌，2007，26(5):48－50．

［12］黃清榮，姜華，辛?xí)粤?，等．白平菇?yōu)良菌株選育研究初報(bào)［J］．中國食用菌，2004，23(2):18－21．

［13］王曉峰，張海林，崔鴻文．平菇菌絲生長速度的親子相關(guān)及配合力分析 ［J］．食用菌學(xué)報(bào)，1998，5(4):l－5．

［14］池惠榮，王朝江．平菇菌絲拮抗作用探討［J］．食用菌，1998(5):17．

［15］張玉林，譚永忠．平菇液體菌種栽培菌株篩選試驗(yàn) ［J］．中國食用菌，2007，26(5):32－33．