第五永長(zhǎng)， 田金洲， 時(shí) 晶

(1.陜西中醫(yī)學(xué)院第一臨床醫(yī)學(xué)院，陜西咸陽(yáng)712046;2.北京中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，北京100029)

蛋白質(zhì)磷酸化和O位N-乙酰葡萄糖胺 (O-linked N-acetylglucosamine，O-Glc N Ac)糖基化修飾是蛋白質(zhì)翻譯后修飾的兩種重要方式。近年研究表明，蛋白質(zhì)的磷酸化和O-Glc N Ac糖基化之間負(fù)相關(guān)，兩種修飾之間存在一種平衡機(jī)制［1］，類似于中醫(yī)的“陰”與“陽(yáng)”，即存在著“陰陽(yáng)調(diào)治”的關(guān)聯(lián)［2］。神經(jīng)微管蛋白tau出現(xiàn)異常過(guò)度磷酸化以至形成阿爾茨海默病 (Alzheimer's Disease)組織病理改變之一的細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)原纖維纏結(jié)，與腦內(nèi)tau蛋白磷酸化和O-Glc N Ac糖基化修飾之間的平衡被打破有密切關(guān)系［3］。

本實(shí)驗(yàn)研究了清代治療癡呆名方洗心湯對(duì)散發(fā)性老年性癡呆大鼠腦內(nèi)tau蛋白O-Glc N Ac糖基化修飾水平的影響［4］，從而探討其通過(guò)調(diào)節(jié) OGlc N Ac糖基化修飾途徑而抑制散發(fā)性老年性癡呆腦內(nèi)tau異常磷酸化的可能機(jī)制，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物及分組 SPF級(jí)健康雄性SD大鼠84只，體質(zhì)量 (270±20)g，由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供 (實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào):0034642)。所有大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、多奈哌齊組、洗心湯小劑量組、洗心湯中劑量組、洗心湯大劑量組，均飼養(yǎng)于屏障環(huán)境動(dòng)物室 (使用許可證:SYXK【陜】2007－2010)。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中自由攝食飲水，室溫22℃ ～26℃，相對(duì)濕度40%左右。

1.2 主要藥品與試劑 洗心湯:人參、半夏、茯神、附子、石菖蒲等中藥組成，由999企業(yè)集團(tuán)醫(yī)藥股份有限公司提供中藥配方顆粒 (產(chǎn)品批號(hào):0908032);鏈脲佐菌素 (Streptozotocin，STZ):Merck公司產(chǎn)品 (批號(hào):K0050);多奈哌齊:由中美合資西安海欣制藥有限公司生產(chǎn) (產(chǎn)品批號(hào):091201)。

琥珀酸化凝集素 (sWGA):EY Labs，San Mateo，CA產(chǎn)品。用于富集海馬組織內(nèi)O-Glc N Ac糖基化修飾的蛋白質(zhì)。用western blot法富集時(shí)稀釋倍數(shù)1∶400。

CTD110.6一抗:SantaCruz產(chǎn)品。用于檢測(cè)海馬組織內(nèi)O-Glc N Ac糖基化修飾的tau蛋白。western blot稀釋倍數(shù)1∶1 000。

RL2一抗:Pierce-ABR產(chǎn)品。用于檢測(cè)海馬組織內(nèi)O-Glc N Ac糖基化修飾的tau蛋白。免疫組化染色時(shí)稀釋倍數(shù)為1∶200，western blot稀釋倍數(shù)1∶1 000。

1.3 側(cè)腦室注射鏈脲佐菌素?cái)M阿爾茨海默病模型制備 參考Sharma的方法［5］，大鼠經(jīng)10%水合氯醛麻醉后，固定于腦立體定位儀，常規(guī)消毒皮膚，顱骨正中矢狀切口，分離骨膜，暴露硬腦膜。除假手術(shù)組外，均以微量注射器雙側(cè)側(cè)腦室各注射STZ約18μL(注射前將STZ溶于人工腦脊液，質(zhì)量濃度為25 mg/mL)。坐標(biāo)參考《大鼠腦立體定向圖譜》［6］。第3天重復(fù)注射，劑量同前。假手術(shù)組以等量人工腦脊液代替STZ。

1.4 給藥方法 第二次造模21 d后給藥治療。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中以60℃雙蒸水溶解稀釋洗心湯顆粒，配成大、中、小不同劑量 ［每29 g提取物相當(dāng)于原方生藥169 g，依據(jù)人與大鼠體表面積折算等效劑量，按生藥計(jì)算的大鼠給藥劑量，大劑量為30.42 g/(kg·d)，中劑量為15.21 g/(kg·d)，小劑量為7.61 g/(kg·d)］，多奈哌齊給藥量0.92 mg/kg，均按7.5 mL/(kg·d)灌胃。模型組及假手術(shù)組以等體積的雙蒸水灌胃。各組均每日1次，共灌胃2個(gè)月。

1.5 腦組織樣品處理 先采用Morris水迷宮試驗(yàn)法進(jìn)行大鼠行為學(xué)測(cè)試［7］。內(nèi)容包括:(1)定位航行實(shí)驗(yàn):即從平臺(tái)所在象限的相鄰象限中選擇一個(gè)入水點(diǎn)，將動(dòng)物面向池壁放入水中，記錄動(dòng)物尋找并爬上平臺(tái)所需時(shí)間即逃避潛伏期 (escape latency)及游泳距離。用于測(cè)量動(dòng)物在水迷宮中的學(xué)習(xí)和記憶能力。(2)空間搜索實(shí)驗(yàn):撤除平臺(tái)，任選一個(gè)入水點(diǎn)將動(dòng)物放人水中，測(cè)量120 s內(nèi)動(dòng)物在目標(biāo)象限 (原平臺(tái)所在象限)(targetquadrant)和其他各象限的游泳時(shí)間。用于測(cè)量動(dòng)物對(duì)平臺(tái)空間位置準(zhǔn)確記憶，即記憶保持能力。行為學(xué)測(cè)試結(jié)束后，每組隨機(jī)選取6只大鼠行灌注固定，然后斷頭并完整取出鼠腦，置于固定液中，24 h后行石蠟包埋切片。每只大鼠海馬CA1區(qū)出現(xiàn)后連續(xù)冠狀切片，放入0.01 mol/L PBST的溶液中進(jìn)行免疫組化染色。Western-blot蛋白印跡檢測(cè)取新鮮海馬組織置液氮中速凍后保存于－70℃冰箱。

1.6 免疫組化染色 ①石蠟切片常規(guī)二甲苯脫蠟;②新鮮3%H2O2滅活內(nèi)源性酶，蒸餾水沖洗;③將切片置于枸櫞酸鹽緩沖液 (pH6.0)中熱修復(fù)抗原，PBS(pH7.4)沖洗;④滴加5%BSA封閉，37℃20 min，吸去多余液體;⑤滴加稀釋的一抗，4℃過(guò)夜，PBS沖洗;⑥滴加相應(yīng)的二抗，37℃孵育1 h，PBS沖洗;⑦滴加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉素卵白素工作液，37℃孵育1 h，PBS沖洗;⑧滴加DBA，室溫下作用5～30 min;⑨蘇木素復(fù)染，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片。

免疫組化染色結(jié)果分析:每只大鼠取相同位置腦片，以Motic Med 6.0數(shù)碼醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)采集圖象和分析，記錄每組圖象中陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)、陽(yáng)性細(xì)胞總面積和積分光密度值。

1.7 Western-blot蛋白印跡檢測(cè) ①提取大鼠海馬蛋白質(zhì);②Folin酚法測(cè)定海馬組織蛋白水平;③SDS—PAGE電泳;④轉(zhuǎn)膜;⑤免疫反應(yīng) (分別加入按1∶1 000稀釋后的相應(yīng)二抗);⑥化學(xué)發(fā)光(吸干膜上的PBST，鋪于干凈的平皿中膜蛋白朝上，放入Syngene GBOX iChemi化學(xué)發(fā)光凝膠成像多功能系統(tǒng)的智能暗箱中，調(diào)好焦距，將發(fā)光液A和B兩種試劑等體積混勻后，用移液器均勻加于膜上，充分接觸后進(jìn)行曝光)。利用多功能系統(tǒng)的圖像采集和分析軟件分析圖像各條帶的光密度值。

2 結(jié)果

2.1 行為學(xué)測(cè)試結(jié)果 在5 d的定位航行試驗(yàn)中，從第3天開(kāi)始，多奈哌齊組，洗心湯小、中、大劑量組與模型組相比，平均逃避潛伏期及總游泳距離表現(xiàn)出顯著性差異 (P＜0.05，P＜0.01)。第5天各治療組與模型組相比，平均逃避潛伏期及總游泳距離均有顯著性差異 (P＜0.01)。在第6天撤除平臺(tái)后的空間搜索試驗(yàn)中，與模型組相比，各治療組在第一象限的活動(dòng)時(shí)間明顯延長(zhǎng) (P＜0.05，P＜0.01)。見(jiàn)表1、表2、表3。

表1 大鼠在定位航行試驗(yàn)中的平均逃避潛伏期比較 (±s)Tab.1 Comparison of average escape latency in place navigation experm iment of rats in each group(±s)

表1 大鼠在定位航行試驗(yàn)中的平均逃避潛伏期比較 (±s)Tab.1 Comparison of average escape latency in place navigation experm iment of rats in each group(±s)

與假手術(shù)組相比，＊＊P ＜0.01;與模型組相比，△P＜0.05，△△P ＜0.01;與多奈哌齊組相比，▲P ＜0.05

組 別 動(dòng)物數(shù)/只 第1天/s 第2天/s 第3天/s 第4天/s 第5天/s假手術(shù)組 11 76.74±25．03 31.37 ±10．76 20.46±10．14 12.91 ±3．10 10.67 ±6．59模型組 12 94.69 ±7．01 88.98 ±26．02＊＊ 50.96 ±31．85＊＊ 47.43 ±30．50＊＊ 40.23 ±34．12＊＊多奈哌齊對(duì)照組 12 78.92±24．19 66.95±26．47 27.99±17．48△ 28.26±25．97△ 15.62±13．58△△洗心湯小劑量組 11 69.09±41．59 60.99±28．91△ 25.89±20．46△ 23.62±11．16△ 16.75±13．30△△洗心湯中劑量組 11 56.54±19．81△ 40.69±19．14△△ 26.62±21．43△ 30.68±27．75△ 19.95±23．07△△洗心湯大劑量組 11 66.29±20．85△ 27.07±10．17△△▲ 19.84±11．89△△ 16.84±12．38△△ 11.19±7．98△△

表2 大鼠在定位航行試驗(yàn)中的游泳距離比較 (±s)Tab.2 Comparison of sw imm ing distance in the place navigation test of rats in each group(±s)

表2 大鼠在定位航行試驗(yàn)中的游泳距離比較 (±s)Tab.2 Comparison of sw imm ing distance in the place navigation test of rats in each group(±s)

注:與假手術(shù)組相比，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與模型組相比，△P＜0.05，△△P＜0.01;與多奈哌齊組相比，▲P＜0.05

組 別 動(dòng)物數(shù)/只 第1天/cm 第2天/cm 第3天/cm 第4天/cm 第5天/cm假手術(shù)組 11 968.74±368.03 676.65±408.62 334.22±175.44 231.23± 22.87 179.15±105.79模型組 12 1 210.51±303.78 1093.50±498.43* 764.34±375.98＊＊ 748.82±376.27＊＊ 601.59±409.03＊＊多奈哌齊對(duì)照組 12 1 063.38±407.53 755.59±348.04△ 451.88±272.12△ 408.39±244.89△ 247.31±224.99△△洗心湯小劑量組 11 822.28±544.56△ 665.53±493.53△ 328.29±173.62△△ 316.62±146.44△△ 260.75±215.79△△洗心湯中劑量組 11 742.90±313.50△ 529.96±329.79△△ 361.29±206.50△△ 461.85±387.99△ 307.56±310.55△△洗心湯大劑量組 11 968.91±400.43 422.41±204.95△△▲ 341.91±171.92△△ 252.18±123.28△△ 157.18±105.47△△

表3 各組大鼠空間探索試驗(yàn)第一象限活動(dòng)時(shí)間比較 (±s)Tab.3 Comparison of sw imm ing time around the target quadrant of rats in each group(±s)

表3 各組大鼠空間探索試驗(yàn)第一象限活動(dòng)時(shí)間比較 (±s)Tab.3 Comparison of sw imm ing time around the target quadrant of rats in each group(±s)

注:與假手術(shù)組相比，＊＊P＜0.01;與模型組相比，△P＜0.05，△△P ＜0.01

組 別 動(dòng)物數(shù)/只 第一象限活動(dòng)時(shí)間/s假手術(shù)組11 59.49±8.57模型組 12 15.92 ± 6.16＊＊多奈哌齊對(duì)照組 12 41.02±10.76△洗心湯小劑量組 11 39.91±13.97△洗心湯中劑量組 11 52.81± 4.30△△洗心湯大劑量組 11 56.45±5.32△△

2.2 western blot檢測(cè)結(jié)果 western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn):模型組sWGA富集的O-Glc N Ac糖基化蛋白質(zhì)明顯低于假手術(shù)組 (P＜0.01)，同樣，模型組以RL2、CTD 110.6檢測(cè)的O-Glc N Ac糖基化tau蛋白表達(dá)明顯低于假手術(shù)組 (P＜0.01);與模型組相比，洗心湯不同劑量組中，sWGA富集的O-Glc N Ac糖基化蛋白質(zhì)以及 RL2、CTD 110.6檢測(cè)的 OGlc N Ac糖基化tau蛋白表達(dá)均明顯提高，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05，P＜0.01)，洗心湯各劑量組之間無(wú)顯著性差異，多奈哌齊對(duì)照組與模型組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表4～6，圖1～3。

圖1 sWGA富集的糖基化蛋白質(zhì)表達(dá)Fig.1 sWGA enrichment protein glycosylation expression by western blot

表4 sWGA富集的糖基化蛋白質(zhì)表達(dá)情況 (±s)Tab.4 sWGA enrichment protein glycosylation expression by western blot(±s)

表4 sWGA富集的糖基化蛋白質(zhì)表達(dá)情況 (±s)Tab.4 sWGA enrichment protein glycosylation expression by western blot(±s)

注:與假手術(shù)組相比，＊＊P＜0.01;與模型組相比，△P＜0.05，△△P＜0.01;與多奈哌齊組相比，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01

組 別 動(dòng)物數(shù)/只 (sWGA/β-actin)假手術(shù)組50.540 2±0.007 6模型組 5 0.257 9 ±0.003 6＊＊多奈哌齊對(duì)照組 5 0.270 1±0.002 3洗心湯小劑量組 5 0.405 3±0.003 6△▲洗心湯中劑量組 5 0.485 2±0.027 3△△▲▲洗心湯大劑量組 5 0.459 8±0.006 4△△▲▲

圖2 以RL2檢測(cè)的O-G lc N Ac糖基化tau蛋白表達(dá)Fig.2 Tau RL2 expression of hippocam pus of rat measured by western blot

表5 以RL2檢測(cè)的O-G lc N Ac糖基化tau蛋白表達(dá)情況(±s)Tab.5 Tau RL2 expression of hippocampus of rat measured by western blot(±s)

表5 以RL2檢測(cè)的O-G lc N Ac糖基化tau蛋白表達(dá)情況(±s)Tab.5 Tau RL2 expression of hippocampus of rat measured by western blot(±s)

注:與假手術(shù)組相比，＊＊P＜0.01;與模型組相比，△P＜0.05，△△P＜0.01;與多奈哌齊組相比，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01

組 別 動(dòng)物數(shù)/只 (RL2/β-actin)假手術(shù)組50.538 8±0.008 2模型組 5 0.276 1 ±0.003 7＊＊多奈哌齊對(duì)照組 5 0.284 6±0.003 6洗心湯小劑量組 5 0.406 8±0.018 9△▲洗心湯中劑量組 5 0.490 4±0.010 7△△▲▲洗心湯大劑量組 5 0.501 9±0.005 2△△▲▲

圖3 以CTD 110.6檢測(cè)的O-Glc N Ac糖基化tau蛋白表達(dá)Fig.3 Tau CTD 110．6 expression of hippocampus of rat measured by western blot

表6 以CTD 110.6檢測(cè)的O-Glc N Ac糖基化tau蛋白表達(dá)情況(±s)Tab.6 Tau CTD 110.6 expression of hippocam pus of ratmeasured by western blot(±s)

表6 以CTD 110.6檢測(cè)的O-Glc N Ac糖基化tau蛋白表達(dá)情況(±s)Tab.6 Tau CTD 110.6 expression of hippocam pus of ratmeasured by western blot(±s)

注:與假手術(shù)組相比，＊＊P＜0.01;與模型組相比，△P＜0.05，△△P＜0.01;與多奈哌齊組相比，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01

組 別 動(dòng)物數(shù)/只 (CTD110.6/β-actin)假手術(shù)組50.589 9±0.012 2模型組 5 0.286 1 ±0.003 3＊＊多奈哌齊對(duì)照組 5 0.269 1±0.004 7洗心湯小劑量組 5 0.385 7±0.034 9△▲洗心湯中劑量組 5 0.520 7±0.016 9△△▲▲洗心湯大劑量組 5 0.533 4±0.024 1△△▲▲

2.3 免疫組化檢測(cè)結(jié)果 用免疫組化方法，以RL2檢測(cè)大鼠海馬CA1區(qū)O-Glc N Ac糖基化tau蛋白表達(dá)，所得結(jié)果與western blot法一致。與假手術(shù)組相比，模型組O-Glc N Ac糖基化tau陽(yáng)性蛋白表達(dá)的細(xì)胞數(shù)減少、陽(yáng)性細(xì)胞總面積減小、積分光密度值均下降 (P＜0.05，P＜0.01);與模型組相比，洗心湯小、中、大劑量組O-Glc N Ac糖基化tau蛋白表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)、陽(yáng)性細(xì)胞總面積、積分光密度值均有明顯提高 (P＜0.05，P＜0.01)，洗心湯各劑量組之間比較仍未表現(xiàn)出顯著性差異，多奈哌齊對(duì)照組與模型組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表7、圖4。

圖4顯示，假手術(shù)組陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)多，胞漿深染;模型組陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)極少;多奈哌齊組陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)極少;洗心湯小劑量組陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)明顯增多;洗心湯中劑量組陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)明顯增多;洗心湯大劑量組陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)明顯增多。

3 討論

近年來(lái)大量研究顯示:O-Glc N Ac糖基化在老年性癡呆發(fā)病中起著重要的作用［8］。多項(xiàng)證據(jù)支持O-Glc N Ac糖基化通過(guò)己糖胺生物合成途徑(Hexosamine biosynthetic pathway，HBP)直接調(diào)節(jié)tau蛋白的磷酸化而參與了散發(fā)性老年性癡呆的發(fā)病過(guò)程［9］。老年性癡呆發(fā)病的能量代謝障礙學(xué)說(shuō)認(rèn)為，腦內(nèi)葡萄糖攝取及代謝障礙引起神經(jīng)原纖維變性可能是散發(fā)性老年性癡呆發(fā)病的重要原因［10］。老年性癡呆患者腦內(nèi)葡萄糖代謝障礙，影響了尿苷二磷酸N-乙酰氨基葡萄糖 (UDP-GlcNAc)的合成，導(dǎo)致tau蛋白O-Glc N Ac糖基化水平降低，從而促進(jìn)了tau蛋白的過(guò)度磷酸化［8］。而tau的異常過(guò)度磷酸化除了使其喪失正常生物學(xué)活性外，還使其變成細(xì)胞毒性分子，并促使其自身沉積為神經(jīng)原纖維纏結(jié)［11］。

表7 大鼠海馬CA1區(qū)以RL2檢測(cè)的O-G lc N Ac糖基化tau蛋白表達(dá)情況 (±s)Tab.7 Tau RL2 expression in CA1 region of hippocampus of rat by immunohistochem istry(±s)

表7 大鼠海馬CA1區(qū)以RL2檢測(cè)的O-G lc N Ac糖基化tau蛋白表達(dá)情況 (±s)Tab.7 Tau RL2 expression in CA1 region of hippocampus of rat by immunohistochem istry(±s)

注:與假手術(shù)組相比，＊＊P＜0.01;與模型組相比，△P＜0.05，△△P＜0.01;與多奈哌齊組相比，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01

組 別 動(dòng)物數(shù)/只 陽(yáng)性細(xì)胞數(shù) 陽(yáng)性細(xì)胞總面積/μm2積分光密度值假手術(shù)組 5 84.791 7±0.342 5 32 066.290 1±502．131 7 171.961 7 ±0．628 1模型組 5 18.421 7 ±0.942 4＊＊ 6 797.310 1 ±117．613 1＊＊ 56.201 7 ±1．218 5＊＊多奈哌齊對(duì)照組 5 21.491 7±0.535 6 6 906.146 7±61．845 7 57.743 3±0．643 3洗心湯小劑量組 5 38.583 3±1.325 8△▲ 11 970.921 7±190．516 8△△▲ 110.006 7±1．134 7△△▲洗心湯中劑量組 5 71.745 1±0.448 9△△▲▲ 26 514.466 7±450．454 0△△▲▲ 137.941 7±1．150 0△△▲▲洗心湯大劑量組 5 74.403 3±1.761 1△△▲▲ 27 445.185 1±315．989 6△△▲▲ 140.854 7±2．920 6△△▲▲

圖4 大鼠海馬CA1區(qū)以RL2檢測(cè)的O-Glc N Ac糖基化tau蛋白表達(dá)情況Fig.4 Tau RL2 expression in CA1 region of hippocampus of rat by immunohistochem istry)(×200)

本實(shí)驗(yàn)中洗心湯是在清代名醫(yī)陳士鐸治療呆病經(jīng)驗(yàn)方的基礎(chǔ)上經(jīng)組方及劑量?jī)?yōu)化形成的有效成分提取物。該方依據(jù)中醫(yī)益氣通陽(yáng)、開(kāi)郁化痰治則擬定，全方寓消于補(bǔ)，標(biāo)本兼治，具有升發(fā)陽(yáng)氣，祛逐陰邪，開(kāi)郁化痰、平衡陰陽(yáng)之功效。前期研究表明，洗心湯能明顯改善側(cè)腦室注射STZ擬散發(fā)性老年性癡呆大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力，其作用的形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)可能與保護(hù)海馬神經(jīng)元線粒體及軸突內(nèi)微管結(jié)構(gòu)有關(guān)［7］。

本實(shí)驗(yàn)研究表明，側(cè)腦室注射STZ擬散發(fā)性老年性癡呆模型大鼠海馬組織O-Glc N Ac糖基化蛋白質(zhì)明顯低于假手術(shù)組，同樣，以 RL2、CTD 110.6檢測(cè)的O-Glc N Ac糖基化tau蛋白表達(dá)也明顯低于假手術(shù)組，上述結(jié)果說(shuō)明大鼠側(cè)腦室注射STZ之后，可能影響了腦組織神經(jīng)元能量代謝及糖代謝，使得O-Glc N Ac糖基化的供體UDP-乙酰氨基己糖合成減少，導(dǎo)致大鼠腦內(nèi)tau蛋白OGlc N Ac糖基化水平下降，這與散發(fā)性老年性癡呆患者體內(nèi)的變化一致［12］;研究顯示:與模型組相比，洗心湯不同劑量組中，sWGA富集的 OGlc N Ac糖基化蛋白質(zhì)以及RL2、CTD 110.6檢測(cè)的O-Glc N Ac糖基化tau蛋白表達(dá)均明顯提高，表明洗心湯能夠通過(guò)改善側(cè)腦室注射STZ擬散發(fā)性老年性癡呆模型大鼠腦組織能量及糖代謝，增加tau蛋白的O-Glc N Ac糖基化水平，從而起到抑制tau蛋白過(guò)度磷酸化及其毒性的作用。當(dāng)然，該方對(duì)于蛋白質(zhì)O-Glc N Ac糖基化修飾水平的研究屬于首次探索，對(duì)其深層次的作用機(jī)制有必要進(jìn)一步深入研究。

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