顧建新 馮軍

【摘 要】本文研究了氟化物對雞新城疫疫苗免疫效果的影響。試驗組Ⅰ和試驗組Ⅱ在4-42d分別喂含氟量為300mg/Kg和500mg/Kg的飼料，43-56d喂常規(guī)飼料，對照組在整個試驗期內(nèi)喂常規(guī)飼料。試驗結(jié)果表明，在短期內(nèi)，氟化物能增強雞新城疫疫苗的免疫效果；在較長時間內(nèi)，氟化物干擾ND疫苗免疫效果，但不顯著。

【關(guān)鍵詞】氟化物；雞；免疫效果；新城疫疫苗

氟中毒主要是由于自然高氟以及在飼料中添加含氟量過高的磷酸氫鈣所引起的，近年來后一種因素出現(xiàn)增多的趨勢。80年代以后，氟化物對機體免疫系統(tǒng)的影響研究日益引起國內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注。眾多研究資料表明，氟化物對機體體液免疫功能有不同程度的影響[1]。為了弄清楚氟化物對雛雞免疫功能的影響，從而為提高動物機體抵抗力和進一步研究氟中毒提供科學(xué)依據(jù)和新途徑，特此研究。

1.材料和方法

1.1 飼料和實驗動物

1.1.1 飼料

本試驗所用飼料按一定配方自行配制。經(jīng)檢測氟含量為64mg/Kg。準確稱取氟化鈉，溶于離子交換水中，以噴霧方式均勻地混入飼料中，使飼料中氟含量分別為300mg/Kg、500mg/Kg。對照組飼料不添加氟化鈉，也噴霧等量的離子交換水。

1.1.2 實驗動物

從華南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)系種雞場購進1d石歧雜黃雞150只，當天心臟采血8只，測母源抗體效價。試驗期為56天。試驗前，健康觀察三天，4d時稱重并隨機分為三組，每組50只，即試驗組Ⅰ（300mg/Kg）、試驗組Ⅱ（500mg/Kg）、對照組。試驗組從4-42d分別飼喂上述濃度的飼料，43-56d喂常規(guī)飼料，對照組整個試驗期內(nèi)均喂常規(guī)飼料。三組于14d和38d接種Lasota雞新城疫疫苗。

1.2 檢測項目和方法

1.2.1 雞新城疫血清HI抗體滴度的測定

分別于第1、14、21、28、35、42、49、56d各取10只雞（以后同），心臟或翅下靜脈采血，分離血清，采用微量HI試驗法于當天測定。

1.2.2 雞血清球蛋白含量的測定

方法：分別在14、28、42、56d采血，分離血清，用雙縮脲比色法和溴甲酚綠比色法分別測得血清總蛋白和清蛋白含量，兩者之差即為球蛋白含量。即：

球蛋白含量（g/l）=總蛋白含量（g/l）-清蛋白含量（g/l）

試劑：

T.P.試劑：廣東省人民醫(yī)院臨床檢驗中心出品。

ALB.試劑：同上。

蛋白標準液：衛(wèi)生部上海生物制品研究所出品

儀器：法國產(chǎn)UV-VIS2型半自動生化分析儀。

1.2.3 骨氟含量的測定

方法：用氟離子選擇電極法14、28、42、56d時測定雞的股骨氟含量

儀器：

PHS-3C型精密PH計：上海雷磁儀器廠生產(chǎn)。

232C型甘汞電極（參比電極）：江蘇泰縣水準儀器廠生產(chǎn)。

氟離子選擇電極：上海電光器件廠生產(chǎn)。

1.2.4 法氏囊器官指數(shù)測定

方法：分別于14、28、42、56d每組各取10只雞，稱重，測定法氏囊重量，求出器官指數(shù)。即：器官指數(shù)=臟器重（mg）/體重（g）

2.結(jié)果與分析

2.1 骨氟含量的測定

從表1中可知，在整個試驗期內(nèi)，二個試驗組骨氟含量均比對照組高，且差異極顯著（P<0.01）；此外，試驗組骨氟含量隨飼料中氟含量的升高而升高，呈正相關(guān)性；同時，隨著實驗時間的推移，試驗組骨氟含量也相應(yīng)升高。

由此可見，骨胳中氟含量的高低一方面與飼料中氟含量的高低有關(guān)，另一方面也與氟化物作用時間的長短有關(guān)。

表1 股骨中氟含量的變化（×103） 單位：mg/Kg

注：① C=對照組 T1=試驗組Ⅰ T2=試驗組Ⅱ② 同日齡中，*表示試驗組與對照組比較，差異極顯著； **表示差異極顯著

2.2 對雞新城疫血清HI抗體滴度的影響

從表2可知，在14d測定時，試驗組Ⅱ母源抗體滴度高于對照組，且差異顯著（P<0.05），14dLasota ND疫苗首免后7d的測定結(jié)果也同樣如此。此時，試驗組Ⅰ母源抗體滴度雖比對照組高，但差異不顯著（P>0.05）。

由此可見，氟化物在實驗初期促進抗體產(chǎn)生，并與劑量呈正相關(guān)性。隨時間推移，這種作用越來越不明顯。

表2 雞ND病毒血清HI抗體滴度

注： ① HI抗體滴度：以2為底對數(shù)（log2x）② 14d進行Lasota疫苗首免，38日齡時二免③ 同日齡中，*表示試驗組與對照組比較，差異顯著

2.3 對雞血清球蛋白含量的影響

從表3可知，在14d、28d測定時，試驗組Ⅱ球蛋白含量比對照組升高，且差異極顯著（P<0.01）；在42d、56d測定時，試驗組Ⅱ雖比對照組高，但差異不顯著（P>0.05）。而試驗組Ⅰ在整個試驗期內(nèi)，球蛋白含量雖然比對照組高，但差異不顯著（P>0.05）。

由此可見，氟化物僅在一定時間內(nèi)影響球蛋白的生成，而且與劑量呈正相關(guān)性。

表3 雞血清球蛋白含量的變化 單位：g/l

注：

① 總蛋白測定參數(shù)：波長--540nm，反應(yīng)溫度--室溫，反應(yīng)時間--10分鐘，光程—1.0cm。 清蛋白測定參數(shù)：波長--630nm，反應(yīng)溫度--室溫，反應(yīng)時間--5分鐘，光程—1.0cm。

② 表中數(shù)據(jù)為：總蛋白含量（g/l）-清蛋白含量（g/l） ③ 同日齡中， **表示差異極顯著

2.4 器官指數(shù)測定

法氏囊指數(shù)及脾臟指數(shù)在整個試驗期內(nèi)均沒有明顯變化。如表4所示。

表4 器官指數(shù)及平均重量的變化

注：

① 表中重量均為器官平均重量（g）② 器官指數(shù)單位：mg/g

3.討論

體液免疫為B淋巴細胞介導(dǎo)（又稱抗體介導(dǎo)）的免疫應(yīng)答反應(yīng)。

本試驗通過對雞ND病毒HI抗體滴度的測定和血清球蛋白含量的測定為指標來評價氟化物對雞體液免疫功能的影響。結(jié)果表明，在短期內(nèi)，氟化物使雞血清ND病毒HI抗體滴度和球蛋白含量顯著升高，說明氟化物能促進抗體產(chǎn)生，反映了氟化物在短期內(nèi)能增強新城疫苗免疫效果。從結(jié)果還可發(fā)現(xiàn)，在短期內(nèi)，這種增強作用僅出現(xiàn)在高劑量組（500mg/Kg），說明氟化物對體液免疫功能的影響存在劑量-效應(yīng)關(guān)系。

在實驗后階段測定時發(fā)現(xiàn)，血清中ND病毒HI抗體水平和球蛋白含量，高、低劑量組與對照組之間不存在顯著差異（P>0.05），表明較長時間內(nèi)，氟化物對新城疫免疫效果影響不大。

4.小結(jié)

（1） 在短期內(nèi)，氟化物能增強新城疫苗免疫效果，并呈劑量-效應(yīng)關(guān)系。這種增強作用可能是由于氟短時間作用引起機體應(yīng)激反應(yīng)所致。

（2）在較長時間內(nèi)，氟化物對新城疫疫苗免疫效果影響不明顯。

參考文獻：

[1] 李為，馬蔚，戴壽芝，等.1990.地方性氟中毒患者免疫功能、SODI、微量元素和Hb含量的研究.中國實驗臨床免疫學(xué)雜志，2（1）：34～35

[2] Rivas A and Fabricant J.1985.Indication of immunodepression in chicken infected with various strain of Marek，s Disease Virus.Avian Dis，32：1～8

[3] 騰國興，孫玉富，湯瑞奇，等.1992.燃煤污染型和飲水型氟區(qū)人群免疫功能狀態(tài)的研究.中國地方病防治雜志，7（地方性氟中毒增刊）：12

[4] 宋世震，章孟本.1989.氟化物免疫毒性的實驗研究.氟研究通訊，4（1）：38