楊 佳 趙百孝 韓 麗 劉 平 王 磊 白 樺 黃 劍 劉鈞天 朱茂祥 楊陟華

(1北京中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院，北京，100029;2中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院，北京，100071)

微循環(huán)障礙是心血管疾病重要的病理基礎(chǔ)，近年來頗受關(guān)注。艾灸因具有活血化瘀、溫陽散寒，通經(jīng)活絡(luò)的作用而備受古代醫(yī)家推崇。艾作為最佳的施灸材料，性苦微溫，氣味芳香，艾葉溫辛通脈，具有活血行氣的藥理作用［1］，實(shí)驗(yàn)證明［2］艾灸可以使局部皮膚充血，毛細(xì)血管擴(kuò)張，增強(qiáng)局部的血液循環(huán)與淋巴循環(huán)，使局部的皮膚組織代謝能力加強(qiáng)。

灸法的治療作用主要是由于溫?zé)岽碳?、光輻射等物理刺激，艾的藥性作用以及艾燃燒生成?艾煙)的共同作用。艾灸物理刺激及藥性作用的研究比較明確，但艾煙的化學(xué)成分復(fù)雜，其對(duì)于人體各系統(tǒng)效應(yīng)的基礎(chǔ)研究尚處于起步階段。

已有報(bào)道表明［3］，香煙煙霧會(huì)造成微循環(huán)障礙，增加罹患心血管疾病的危險(xiǎn)率，艾煙也經(jīng)由皮膚或者呼吸道吸入人體，而它對(duì)于微循環(huán)影響的相關(guān)報(bào)道缺如。本實(shí)驗(yàn)為艾煙長(zhǎng)期毒理實(shí)驗(yàn)和安全性評(píng)估的一部分，通過觀察不同濃度艾煙長(zhǎng)期干預(yù)后大鼠的血管性假血友病因子(von Willebrand factor，vWF)、氧化性低密度脂蛋白(ox－LDL)的改變來探討艾煙對(duì)微循環(huán)的影響，以期為艾煙安全性評(píng)價(jià)提供參考。

1 材料與方法

1.1 試劑和儀器 3年陳艾條(規(guī)格18 mm×200 mm×10支;市售南陽漢醫(yī)有限責(zé)任公司生產(chǎn))，全自動(dòng)電子分析天平(河南愛博特科技發(fā)展有限公司生產(chǎn))，動(dòng)式染毒柜(產(chǎn)品型號(hào)HOPE－MED8050;天津開發(fā)區(qū)合普工貿(mào)有限公司生產(chǎn))，科研級(jí)生物顯微鏡(NIKON E-clipse 80i)，大鼠ox－LDL、vWF檢測(cè)試劑盒均由美國(guó)R＆D公司生產(chǎn)，北京環(huán)宇金科生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司分裝。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組 本實(shí)驗(yàn)選擇7周齡雄性wistar大鼠168只，體重(60±10)g，購(gòu)自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。許可證號(hào):［SCXK(津)2008－0001］。所有動(dòng)物均用標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，自由進(jìn)水;飼養(yǎng)環(huán)境溫度18～22℃，采用人工控制照明，保持12 h光照(8:00－20:00)和黑暗(20:00－次日8:00)交替循環(huán)，相對(duì)濕度為50%～60%。

適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，按照隨機(jī)數(shù)字表達(dá)法將168只大鼠隨機(jī)分為四組，每組42只。低濃度組、中濃度組、高濃度組，對(duì)應(yīng)的動(dòng)式染毒柜的不透光度分別為10%、40%、70%，每組在不同濃度組艾煙中暴露6個(gè)月，每日20 min，6個(gè)月末取材;空白組只放置于動(dòng)式染毒柜中每日20 min，不進(jìn)行任何干預(yù)，6個(gè)月末取材。

1.3 用動(dòng)式染毒柜進(jìn)行艾煙干預(yù) 該實(shí)驗(yàn)選用動(dòng)式染毒柜可精確控制艾煙濃度并維持染毒環(huán)境氧氣、溫度、濕度、壓強(qiáng)的恒定。艾煙濃度用透光率度量，濃度越低，透光率越高。打開染毒柜電源，設(shè)置動(dòng)式染毒柜各項(xiàng)參數(shù):氧氣為26%、濕度45% ～63%、溫度20℃～22℃、壓強(qiáng)－70 kp、時(shí)間20 min，觀察染毒柜屏幕顯示，待染毒柜內(nèi)艾煙濃度分別達(dá)到低、中、高相應(yīng)濃度，打開艙門，迅速放入動(dòng)物，待儀器顯示干預(yù)時(shí)間已到，取出動(dòng)物;空白組放置于染毒柜中，設(shè)置動(dòng)式染毒柜各項(xiàng)參數(shù):氧氣為26%、濕度45% ～63%、溫度20～22℃、壓強(qiáng)－70 kp、時(shí)間20 min，不進(jìn)行任何干預(yù)。

1.4 取材 所有大鼠麻醉后，股動(dòng)脈取血，所得血液放入EP管中，在室溫(22～25℃)下靜置2 h后離心:轉(zhuǎn)速3 500 r/min，溫度4℃，時(shí)間15 min，離心完畢，用移液槍將上清液(血清)移入新的離心管后放入－70℃的冰箱待測(cè)。

1.5 檢測(cè)指標(biāo) 血清vWF、ox－LDL含量的測(cè)定采用酶聯(lián)免疫吸附雙抗體夾心法(ELISA)原理定量測(cè)定血清vWF、ox－LDL含量，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。計(jì)量指標(biāo)均采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差(s)表示，各組數(shù)據(jù)若符從正態(tài)分布，組間比較采用單因素方差分析;若不服從正態(tài)分布，采用非參數(shù)檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;P＜0.01為差異有顯著性意義。

2 結(jié)果

2.1 血清中vWF含量的改變 結(jié)果如表1和圖1所示:低濃度、中濃度艾煙干預(yù)均使血清中vWF含量下降，與空白組相比有差異，P＜0.05，高濃度艾煙干預(yù)后，vWF含量顯著性降低，P＜0.01，顯示出隨著艾煙濃度的升高，vWF含量逐漸下降，這可能預(yù)示著血小板聚集程度下降，血流狀態(tài)下抑制血栓形成。

表1 各組血清中vWF含量的對(duì)比(%，s)

表1 各組血清中vWF含量的對(duì)比(%，s)

注:與正常組比較，*P ＜0.05，＊＊P＜0.01。

48.58±1.58低濃度組 7 43.82±2.04* 0.043中濃度組 7 43.11±1.23* 0.018高濃度組 7 41.16±1.31＊＊空白對(duì)照組7 0.003

圖1 各組血清中vWF含量的對(duì)比(%，s)

表2 各組血清中ox－LDL含量的對(duì)比(μg/dl，s)

表2 各組血清中ox－LDL含量的對(duì)比(μg/dl，s)

注:與正常組比較，*P ＜0.05，＊＊P＜0.01。

空白對(duì)照組67.95±5.7低濃度組 7 58.95±1.57 0.175中濃度組 7 81.98±4.79* 0.034高濃度組7 68.7±4.57 0.908 7

圖2 各組血清中ox－LDL含量的對(duì)比(μg/dl，s)

2.2 血清中ox－LDL的含量改變 低濃度艾煙干預(yù)后ox－LDL含量有下降趨勢(shì)，但與空白組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＞0.05;中濃度組艾煙使血清中ox－LDL含量升高，與空白組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05;高濃度艾煙干預(yù)與空白組相比有上升趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＞0.05。結(jié)果如表2和圖2所示。

3 討論

血液流變異常是誘發(fā)心血管疾病的危險(xiǎn)因素之一，血流速度減慢，血小板凝聚性增高，可以促使血栓的形成，進(jìn)一步誘發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化，導(dǎo)致心血管事件的發(fā)生。因此改善血液流變狀態(tài)對(duì)于保證微循環(huán)的正常運(yùn)行，維持物質(zhì)代謝，能量代謝平衡，促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞的功能恢復(fù)具有重大意義。

vWF是反映血小板功能的重要指標(biāo)［4－6］。vWF主要在血管內(nèi)皮細(xì)胞的Weibel－Palade小體中合成和儲(chǔ)存，當(dāng)血管內(nèi)皮細(xì)胞受損時(shí)，vWF能夠迅速釋放，它對(duì)血小板黏附到已暴露膠原的內(nèi)皮和血小板聚集起關(guān)鍵作用。越來越多的證據(jù)顯示vWF在血流狀態(tài)下的血栓形成中發(fā)揮關(guān)鍵作用，而血栓的形成則加速了心血管疾病的發(fā)生。

臨床觀察和實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，艾灸通過改善機(jī)體循環(huán)狀態(tài)，提高氧自由基代謝、調(diào)整神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)、穩(wěn)定內(nèi)環(huán)境等多種途徑達(dá)到活血化瘀的作用［7－9］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:低濃度、中濃度艾煙干預(yù)均使血清中vWF含量下降，隨著艾煙濃度的升高，vWF含量逐漸下降，提示艾煙可以使血流變快，降低血液凝集程度，具有加速機(jī)體新陳代謝，改善微循環(huán)，穩(wěn)定內(nèi)環(huán)境的作用。

艾性芳香辛燥是艾灸對(duì)機(jī)體產(chǎn)生效應(yīng)的機(jī)制之一［10］。艾煙能夠起到調(diào)節(jié)微循環(huán)作用可能與艾葉的藥性作用以及艾燃燒生成物的芳香作用有關(guān)?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，艾葉的主要成分是揮發(fā)油，其化學(xué)成分中含有:桉葉素、樟腦、龍腦、甘菊環(huán)等［11］，這些成分也存在于羅勒、迷迭香、桉葉油等［12］，這些芳香物質(zhì)可以對(duì)人體神經(jīng)系統(tǒng)、血液循環(huán)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、皮膚、泌尿系統(tǒng)都存在著治療和輔助治療作用［13－14］，可以促進(jìn)血液運(yùn)行，加快微循環(huán)，調(diào)節(jié)新陳代謝，加快體內(nèi)毒素排除、消炎殺菌，擴(kuò)張外周血管、降低血壓、增加心灌流量而抗缺氧。

目前普遍認(rèn)為［15］芳香物質(zhì)可經(jīng)嗅覺系統(tǒng)傳入大腦，抑制或興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng)，亦可通過呼吸或皮膚滲透進(jìn)入血液，隨血液循環(huán)運(yùn)行至全身，因此艾葉及艾燃燒生成物可能是通過其中的揮發(fā)油的芳香作用達(dá)到加快血液循環(huán)，通絡(luò)散瘀的作用。

ox－LDL可以抑制內(nèi)皮細(xì)胞NOS基因表達(dá)，從而抑制NO合成和釋放，引起內(nèi)皮功能障礙。在心血管疾病發(fā)展的過程中，首先是由于內(nèi)皮功能受損或高膽固醇血癥，因此ox－LDL是內(nèi)皮損傷的有害因子。血管內(nèi)皮損傷是造成微循環(huán)障礙的原因之一［16］。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，低濃度艾煙干預(yù)后ox－LDL含量無明顯改變，P＞0.05;高濃度艾煙干預(yù)后，ox－LDL含量有上升趨勢(shì)但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＞0.05;中濃度艾煙干預(yù)使ox－LDL含量顯著性上升，表明中濃度艾煙對(duì)血管內(nèi)皮有一定損傷，但是由于本實(shí)驗(yàn)為毒理試驗(yàn)，中濃度(40%)艾煙相當(dāng)于臨床艾煙濃度的56倍，低濃度組艾煙(10%)為臨床艾煙濃度9倍，低濃度艾煙干預(yù)對(duì)血管內(nèi)皮無損傷，可以初步推斷，臨床使用艾煙可能不會(huì)對(duì)血管內(nèi)皮造成損傷。進(jìn)一步研究可以設(shè)置臨床診室濃度組，從而深入探討臨床使用艾煙對(duì)微循環(huán)的影響。

4 結(jié)論

隨著艾煙濃度的升高，vWF含量逐漸下降，這可能預(yù)示著艾煙使血小板聚集程度下降，從而改善血液微循環(huán)，對(duì)促進(jìn)機(jī)體新陳代謝，穩(wěn)定內(nèi)環(huán)境起到一定積極作用。低濃度艾煙未見明顯血管內(nèi)皮損傷，中濃度艾煙會(huì)造成一定血管內(nèi)皮損傷。其損傷機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。

［1］許煥芳，趙百孝.艾灸療法作用機(jī)理淺述［C］.中國(guó)針灸學(xué)會(huì)年會(huì)論文集，2011.

［2］唐照亮，宋曉鴿，王寧新.艾灸活血化瘀作用機(jī)制的研究［J］.安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2004，4(2):24 －26.

［3］李萬偉，李曉紅，徐東群.可吸入顆粒物心血管毒性作用機(jī)制研究進(jìn)展［J］.環(huán)境與健康雜志2011，11(28):1026.

［4］王興木，官莉莉.DM2大血管病變與血管內(nèi)皮標(biāo)志物相關(guān)性分析［J］.放射免疫學(xué)雜志，2009，22(4):322 －323.

［5］Dandona P.Endothelium，in flammation，and diabetes［J］.Curr Diab Rep，2002，2:311 －315.

［6］Rosati E，AracriN，Bot ton e A，et al.Statine and endothelium dysfunction in diabetes［J］.Minerva Cardioangio，2002，50:63 －68.

［7］Ma SH，F(xiàn)ENG Y，Liu H.The effect of moxibustion at Renzhong point in Lapoplexy［J］.Beijing zhongyiyao daxue xuebao(J Beijing TCM Univ)，1998，21(3):68 －69.

［8］趙寧俠，郭瑞林，任秦有.艾灸三陰交穴對(duì)健康人血液流變學(xué)及紅細(xì)胞聚集指數(shù)的影響［J］.云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，12(4):31－33.

［9］吳中朝.艾灸對(duì)老年老年前期者血液流變性的影響［J］.中國(guó)針灸，1996，16(11):23 －24.

［10］崔瑩雪，趙百孝.艾灸與芳香療法［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2010，10(25):1548－1549.

［11］文福姬，俞慶善，閹民變，等.艾葉精油化學(xué)成分研究［J］.香料香精化妝品，2007，102(3):21.

［12］宋愛華，王穎，劉艷梅，等.藍(lán)桉葉揮發(fā)油化學(xué)成分的氣相色譜－質(zhì)譜分析研究［J］.食品與藥品，2009，11(1):31.

［13］張季平.中藥成分知多少——香氣由何處來［J］.東陽藥刊，1997，22(1):3.

［14］洪蓉.日本芳香生理心理學(xué)研究進(jìn)展［J］.世界林業(yè)研究，2001，14(3):61.

［15］秦紅.從香薰器皿看古代香薰文化［J］.上海工藝美術(shù)，2009，16(1):112.

［16］Maxwell K N，Breslow J L.Adenoviral－ mediated expression of PCSK9 in mice results in a low－density lipoprotein receptor knockout phenotype［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2004，101(18):7100 －7105.