陳驍勇，葛玉松

(1.江蘇省鹽城市第一人民醫(yī)院，江蘇 鹽城 224001; 2.江蘇省鹽城市藥品檢驗所，江蘇 鹽城 224002)

安神膠囊是一種常用中成藥，由炒酸棗仁、川芎、五味子等幾味藥組方，具有補血滋陰、養(yǎng)心安神的功效。原標準[1]只有五味子、川芎的薄層鑒別以及五味子的高效液相色譜法含量測定。酸棗仁具有養(yǎng)心補肝、寧心安神、斂汗、生津功能，作為方中君藥，卻沒有質(zhì)量控制標準。為有效、準確地控制安神膠囊的質(zhì)量，筆者參照文獻[2－5]，以酸棗仁皂苷A為檢測指標，建立了測定安神膠囊中酸棗仁皂苷A含量的高效液相色譜蒸發(fā)光散射檢測器法，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Aglient1200型高效液相色譜儀，包括G1311A四元泵高效液相色譜儀、G1322A真空脫氣機、G1329A自動進樣器、G1316A柱溫箱、Varian 380－LC蒸發(fā)光檢測器、Aglient色譜工作站(美國安捷倫公司);XS205DU型電子天平(梅特勒－托利多國際股份有限公司)。酸棗仁皂苷A對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110734－200510);安神膠囊(市售品);乙腈為色譜純，水為娃娃哈純凈水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Capcell pakmg C18色譜柱(150mm ×4.6mm，5μm);流動相:乙腈－水(40∶60);檢測器:蒸發(fā)光散射檢測器;流速:0.6mL/min，柱溫:30℃。ELDS檢測參數(shù):漂移管溫度為90℃;蒸發(fā)器氣流:1.4 SLM;理論板數(shù)按酸棗仁皂苷A計算應(yīng)不低于2 000[3]。

2.2 溶液制備

精密稱取五氧化二磷減壓干燥12 h以上的酸棗仁皂苷A對照品10.39mg，置50mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。取本品20粒內(nèi)容物，研細，取約2.5 g，精密稱定，加甲醇60mL，超聲處理1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20mL使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次40 mL，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次40mL，棄去氨洗滌液，再用水洗滌2次，每次40mL，分到正丁醇液，回收溶劑至干，殘渣用水5mL溶解，通過D101型大也吸附樹脂柱(內(nèi)徑為1 cm，柱高為10 cm)，用水40mL和40%乙醇30mL洗脫，棄去洗脫液，再用乙醇50mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5mL，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。取不含炒酸棗仁的處方藥味，按安神膠囊的制備工藝，制成陰性樣品，再依法制備陰性對照品溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:精密量取質(zhì)量濃度為0.207 8 g/L的對照品溶液適量，分別精密吸取 2，4，6，8，10，20 μL，按照 2.1 項下方法進樣，以進樣量的自然對數(shù)(Y)為橫坐標、峰面積積分值的自然對數(shù)(X)為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程Y=0.561 9X － 1.764 7，r=0.998 4(n=6)。結(jié)果表明，酸棗仁皂苷A進樣量在 0.415 6～4.156 0μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

專屬性試驗:取2.2項下3種溶液各10μL，按2.1項下色譜條件進樣。結(jié)果陰性對照品溶液色譜在與對照品溶液色譜相同保留時間處未見色譜峰，故認為陰性對照無干擾。色譜圖見圖1。

精密度試驗:精密吸取同一對照品溶液，連續(xù)進樣6次，每次進樣10 μL。結(jié)果的 RSD=0.38%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:精密吸取同一供試品溶液，于 0，2，4，8，12，24 h 時分別測定峰面積。結(jié)果的 RSD=1.7%(n=6)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗:取同一批號樣品6份，按2.2項下方法制備溶液，照2.1項下色譜條件測定。結(jié)果酸棗仁皂苷A平均含量為0.146 1mg/g，RSD=1.2%(n=6)，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗:取已知含量的同一批號(批號為20110501，含量為 0.146 1mg/g)樣品約 2.0，2.5，3.0 g 各 3 份，精密稱定，分別精密加入 2.2 項下對照品溶液 0.8，1.0，1.2mL，按供試品溶液制備溶液，照2.1項下色譜條件測定，計算加樣回收率。結(jié)果見表1。

表1 酸棗仁皂苷A加樣回收試驗結(jié)果(n=9)

2.4 樣品含量測定

同一批號的樣品分別取2份，依法制備供試品溶液，分別精密吸取對照品溶液5，10μL和供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，照2.1項下色譜條件測定，按外標兩點法對數(shù)方程計算含量。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果(n=2)

3 討論

安神膠囊臨床用于陰血不足、失眠多夢、心悸不寧、五心煩熱、盜汗耳鳴等癥[1]。其主要成分為炒酸棗仁，而酸棗仁有效成分為各種皂苷類、黃酮類，酸棗仁中所含的皂苷類成分被一致認為是酸棗仁鎮(zhèn)靜催眠作用的有效成分[5－10]。因此可通過測定酸棗仁皂苷A的含量對酸棗仁藥材的質(zhì)量進行控制，進而有效、準確地控制安神膠囊的質(zhì)量。

曾分別用超聲處理、水浴回流等方法操作，發(fā)現(xiàn)兩者差別不大，因超聲在實際工作中使用方便，因此用超聲處理[11]。曾有報道采用反相高效液相色譜法測定酸皂仁皂苷A[12]。酸棗仁皂苷類成分紫外吸收差，因此不能用紫外法。蒸發(fā)光散射檢測器屬通用型檢測器，因此可用于同時測定酸棗仁中皂苷類成分和黃芪甲苷。從樣品含量測定結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，各個批號樣品含量測定數(shù)據(jù)相差較大，可能是因為原標準中炒酸棗仁沒有質(zhì)量控制指標，各個廠家所用酸棗仁質(zhì)量有差別。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:496.

[2]路 丹，王 菲，李 清，等.酸棗仁皂苷提取物的制備與酸棗仁皂苷A和B的含量測定[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報，2011，28(7):35－39.

[3]何新榮，劉 萍，孫 艷，等.HPLC－ELSD測定棗仁安神膠囊中酸棗仁皂苷A的含量[J].中國藥師，2011，14(4):57－59.

[4]隋 宏，周慧玲，陳建峰，等.HPLC－ELDS測定酸棗仁合劑中酸棗仁皂苷A的含量[J].現(xiàn)代食品與藥品雜志，2007，17(6):35－37.

[5]馬曉瑩.神牡膠囊中酸棗仁皂苷A的含量測定[J].西北醫(yī)學(xué)雜志，2010，2(25):30 －31.

[6]黃勝英，謝世榮，黃彩云，等.酸棗仁皂苷的鎮(zhèn)靜作用研究[J].大連大學(xué)學(xué)報，2002，23(4):90.

[7]馬進杰，劉 萍，馬百平.酸棗仁化學(xué)成分及其鎮(zhèn)靜催眠作用研究進展[J].國際藥學(xué)研究雜志，2011(3):42－47.

[8]張 雪，李和平，李更生.酸棗仁、茯神功能食品的制備及改善睡眠功效的研究[J].食品科技，2012(1):107－110.

[9]陳 雯，黃世敬.酸棗仁化學(xué)成分及藥理作用研究進展[J].時珍國醫(yī)國藥，2011(7):184－186.

[10]黃宜生.酸棗仁皂苷A對大鼠心肌缺血再灌注的保護作用及機制研究[D].廣東:南方醫(yī)科大學(xué)，2011.

[11]房信勝，王建華，祝麗香，等.微波輔助提取酸棗仁皂苷A的工藝優(yōu)化[J].林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)，2010(1):96－100.

[12]楊瑞瑞，喬蓉霞，杜宏偉，等.補腦丸質(zhì)量標準研究[J].中國藥業(yè)，2010(18):49－51.