孫 聰 韓業(yè)超 吳 強(qiáng) (長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室，吉林 長(zhǎng)春 307)

冠心病是老年人群常見的慢性疾病，中醫(yī)藥治療有著悠久歷史。保元清血顆粒是由多味中藥經(jīng)提取后制成的顆粒制劑，其中肉桂是方中的主藥，含有的桂皮醛等成分具有補(bǔ)火助陽(yáng)、引火歸元、溫經(jīng)通絡(luò)的作用〔1〕。臨床上檢測(cè)桂皮醛作為藥品療效的質(zhì)量控制，但既往的方法缺乏穩(wěn)定性能〔2〕。本文采用高效液相色譜法檢測(cè)保元清血顆粒中不同含量桂皮醛在老年冠心病治療中的療效。

1 資料與方法

1.1 對(duì)象 選擇吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院中醫(yī)科住院患者90例，其中男54例，女36例;年齡60～82〔平均(68.5±6.7)〕歲。入選患者均符合冠心病臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)，心功能1～2級(jí)。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)心衰2度以上;(2)合并其他類型心臟病;(3)合并糖尿病及腦血管病;(4)不予合作者。

1.2 儀器 Agilent1100高效液相色譜儀;DAD檢測(cè)器;Agilent化學(xué)工作站;KQ-600DV型數(shù)控超聲波清洗儀;BP211D型電子分析天平;AS200-S電子分析天平;ED2N型超純水器。

1.3 試劑 桂皮醛對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供(批號(hào)110710-200714，供含量測(cè)定用);保元清血顆粒由長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)科研中心提供試產(chǎn)品(規(guī)格50 g/袋;批號(hào)為100802、100803、100804);甲醇、乙腈為色譜純;水為高純水。

1.4 方法

1.4.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取桂皮醛對(duì)照品50 mg，置50 ml量瓶中，加適量甲醇溶液并稀釋至刻度、搖勻;用0.45 μm微孔濾膜濾過，即得10.07 μg/ml的對(duì)照品溶液。

1.4.2 供試品溶液的制備 取保元清血顆粒5 g，以對(duì)照品制備方法精密稱定后置具塞錐形瓶中，精密加入50 ml甲醇，稱定重量，超聲提取30 min，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減損的重量，搖勻、濾過，精密量取續(xù)濾液1 ml，置20 ml量瓶中，加甲醇至刻度;搖勻，0.45 μm微孔濾膜過濾，即得供試品溶液。采用對(duì)照品進(jìn)行含量校正，按處方配比制成桂皮醛含量12.5、25.5、55.5 μg/ml的三種溶液試劑。

1.4.3 臨床分組及治療方法 將入選患者以隨機(jī)分組法均分為三組，每組30例，分別對(duì)應(yīng)給予不同濃度的供品溶液，即低劑量、中劑量和高劑量組;給藥方法為單劑量，3次/d，3 w為1個(gè)療程，兩個(gè)療程后檢測(cè)臨床指標(biāo)。

1.4.4 臨床指標(biāo)檢測(cè) 選用色譜條件:色譜柱為SB-C柱;流動(dòng)相為乙腈-水;流速為1.00 ml/min;柱溫為30℃;進(jìn)樣量為20 μl;DAD檢測(cè)器檢測(cè)波長(zhǎng)為290 nm。入選患者分別于入組前后進(jìn)行心電圖、心臟彩超及臨床自主癥狀評(píng)測(cè)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng) 用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)資料以±s表示，采用t檢驗(yàn)和χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 色譜條件適應(yīng)性結(jié)果 在本實(shí)驗(yàn)選定的色譜條件下，得到桂皮醛對(duì)照品及三組保元清血顆粒供試品色譜圖均無色譜峰出現(xiàn)，表明各組分不干擾桂皮醛的測(cè)定。

2.2 三組患者臨床資料對(duì)比 三組治療后均較治療前臨床資料明顯好轉(zhuǎn)，有顯著性差異(P＜0.05)，以高劑量組臨床癥狀緩解明顯;但治療后心電圖、左室舒張功能及左室射血分?jǐn)?shù)的改善三組無顯著性差異(P＞0.05)。見表1。

表1 三組患者治療前后一般臨床資料對(duì)比(n)

2.3 色譜線性關(guān)系觀察 在本實(shí)驗(yàn)色譜條件下，桂皮醛在0.5～50 μg/ml具有良好的線性關(guān)系，線性方程為 Y=3.551 606 3X－2.603 881 3，相關(guān)系數(shù)r為0.999 76。

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取三組各兩份樣品，共6份單劑量，分別于0、2、4、8、16、24 h 精密取樣 20 μl進(jìn)行色譜檢測(cè)，桂皮醛波峰面積為13%，表明本供試品在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3 討論

《中華人民共和國(guó)藥典》(2010年一部)規(guī)定中藥提取物桂皮醛采用兩次甲醇超聲處理且放置過夜，該法提取率雖高但耗時(shí)過長(zhǎng)。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)用甲醇超聲處理0.5 h即可達(dá)到較好的提取效果，可節(jié)省大量時(shí)間，提高檢測(cè)效率。桂皮醛的含量測(cè)定有薄層掃描法、微波提取過氧化氫氧化法、氣相色譜法、液相色譜法等。但薄層掃描法重復(fù)性相對(duì)較差，微波提取過氧化氫氧化法受干擾因素較多，氣相色譜法涉及內(nèi)標(biāo)物，分離難度很大，所以均未采用。相比之下液相色譜法操作簡(jiǎn)單、穩(wěn)定性好，是理想的測(cè)定方法。

有研究者采用乙腈-0.1%磷酸(35∶65)做流動(dòng)相〔2〕，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)和乙腈-水做流動(dòng)相比較，差別不明顯。在本文中采用液相色譜法，用甲醇-水作為流動(dòng)相〔3，4〕，發(fā)現(xiàn)乙腈-水比甲醇-水做流動(dòng)相分離度高、峰形好。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明該方法線性關(guān)系好、操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，適用于保元清血顆粒中桂皮醛含量的測(cè)定。

有殺菌、消毒、防腐、抗?jié)兗訌?qiáng)胃、腸道運(yùn)動(dòng)、抗病毒、抗癌、擴(kuò)張血管及降壓、壯陽(yáng)等多種功效〔5～9〕。冠心病臨床上常給予中藥制劑，而其療效通常缺乏穩(wěn)定的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)方法。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，同種中藥制劑采用高效液相色譜法檢測(cè)有著良好的線性關(guān)系，穩(wěn)定性能好，無劑量組分干擾現(xiàn)象。因此，該方法可以用于臨床中藥制劑療效的質(zhì)量控制。

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