周海霞 李燕輝 時志民* 王 蕾 司軍英 吳彩花 范 建

子宮內(nèi)膜癌是女性生殖道常見的惡性腫瘤之一，約占女性惡性腫瘤的7%，近年來在我國其發(fā)病率逐年上升，已占到女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的20%～30%。腫瘤的發(fā)生發(fā)展是多因素、多步驟和多基因參與的過程，在這一過程中凋亡抑制、細胞過度增殖、癌基因激活等起到了重要作用。

1 材料與方法

1.1 材料

選取2009年1月至2012年3月在本院婦科行子宮內(nèi)膜癌切除術的子宮標本60例，年齡35～68歲，平均年齡為52.22歲，所有子宮內(nèi)膜癌患者術前均未行放、化療及激素治療；取因子宮肌瘤或子宮脫垂而行子宮切除術的正常子宮內(nèi)膜標本32例，年齡在32～61歲，平均年齡為48.25歲。按照2000年國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(Federation International of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO)標準進行臨床病理分期和組織分級：Ⅰ期15例，Ⅱ期24例，Ⅲ期12例，Ⅳ期9例；G1級36例，G2級13例，G3級11例。病灶局限于黏膜層及浸潤≤1/2肌層44例，浸潤＞1/2肌層16例。

1.2 試劑與方法

常規(guī)免疫組化試劑盒S-P、二硝基聯(lián)苯胺(DAB)顯色液及兔抗人E2F轉(zhuǎn)錄因子1(E2F-1)多克隆抗體購自美國Santa Cruz生物技術有限；鼠抗人Ki-67單克隆抗體購自北京中杉金橋生物技術有限公司。采用免疫組化(streptavidin-peroxidase，SP)法操作，按試劑盒說明書進行，取已知切片作為陽性對照，以PBS緩沖液代替一抗作為陰性對照。

1.3 結果判斷

E2F-1和Ki-67陽性定位于細胞核，以各種抗體在細胞核或胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性信號。參照Parenti等的標準，每張切片均隨機觀察5個高倍視野(×400)，陽性細胞數(shù)＜5%為(－)，5%～25%為(＋)，＞25%～50%為(＋＋)，＞50%為(＋＋＋)。以＋～＋＋＋均視為陽性表達，－視為陰性表達。

1.4 統(tǒng)計學分析

應用SPSS 12.0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料采用x2檢驗。相互關系用等級相關性分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 E2F-1和Ki-67在正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜癌組織中的表達

在32例正常的子宮內(nèi)膜中E2F-1無表達，Ki-67有4例；60例子宮內(nèi)膜癌中E2F-1的表達31例，表達率為58.33%(35/60)，兩者比較差異有統(tǒng)計學意義(x2＝27.71，P＜0.05)；60例子宮內(nèi)膜癌組織中Ki-67陽性表達51例，表達率為85.00%(51/60)，兩者比較差異有統(tǒng)計學意義(x2＝42.63，P＜0.05)(見表1)。

2.2 E2F-1和Ki-67在子宮內(nèi)膜癌中的表達與臨床病理指標的關系

E2F-1和Ki-67在子宮內(nèi)膜癌中的表達與組織學分級、臨床病理分期以及淋巴道轉(zhuǎn)移有關(x2＝20.64，x2＝5.23，x2＝11.77，x2＝4.04，x2＝5.79，x2＝8.28；P＜0.05)；而與組織學類型無關(x2＝3.51，x2＝0.941；P＞0.05)(見表1)。

表1 E2F-1和Ki-67在正常子宮內(nèi)膜及子宮內(nèi)膜癌中的表達與臨床病理指標的關系

2.3 E2F-1和Ki-67在子宮內(nèi)膜癌組織中的相關性分析

E2F-1和Ki-67在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達無明顯相關性(r＝0.166，P＞0.05)(見表2)。

表2 E2F-1和Ki-67在子宮內(nèi)膜癌組織中表達的相關性分析

3 討論

細胞周期不同時相間存在關鍵的檢查點，人體細胞的正常生長依賴于各種調(diào)節(jié)因子對其檢查點的平衡調(diào)控，任何一種紊亂的發(fā)生將導致細胞異常增殖，從而誘發(fā)腫瘤[1]。E2F-1蛋白作為轉(zhuǎn)錄因子家族中的一員，調(diào)控因子是E2F家族中第一個被克隆出來的蛋白，對細胞周期限制點起直接調(diào)控作用，是細胞周期中G1期向S期過渡的重要調(diào)控因子，調(diào)控作用機制可能是通過p16INK4a-cyclinD1/CDK-pRb通路[2]。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，作為G1/S期檢查點的重要調(diào)控因子E2F-1在許多腫瘤中均有表達，且與腫瘤的生物學行為有關，在胃癌和涎腺腫瘤中均可見到E2F-1的過度表達[3]。在食管鱗狀細胞癌、乳房癌及表面移行細胞癌中E2F-1的表達與腫瘤進展關系密切[4-6]。本實驗結果顯示，E2F-1蛋白陽性表達主要位于細胞核內(nèi)，在子宮內(nèi)膜癌組織中呈過度表達，在正常子宮內(nèi)膜組織中不表達，差異有統(tǒng)計學意義(x2＝27.71，P＜0.05)，由此推斷在子宮內(nèi)膜癌中，E2F-1過表達起到了促進作用；E2F-1與FIGO分期、組織學分級、有無淋巴結轉(zhuǎn)移及浸潤深度有關，表明E2F-1的過表達在一定程度上可以反映子宮內(nèi)膜癌的生物學特性，其表達水平越高腫瘤的侵襲力越強，惡性度則越高。

Ki-67是一種與細胞增殖密切相關的大分子蛋白，屬于IgG家族，是目前臨床上廣泛應用的檢測細胞增殖的標志。Ki-67的檢測對于判斷腫瘤的惡性程度、進展及其生物學行為具有重要的意義。Ki-67在除了G0期之外的所有細胞周期中都有表達，定位在細胞核，與細胞的合成代謝有關，其表達的高低反映了細胞增殖的程度。另外有報道，Ki-67的表達水平與子宮內(nèi)膜癌的臨床分期和組織學分級相關[6]，是目前研究細胞增殖活性的重要指標，已被應用于許多腫瘤生物學行為的研究。Ki-67抗原表達可反映腫瘤細胞的增殖活性，與惡性腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預后高度相關[7-8]。近年來有學者研究發(fā)現(xiàn)，Ki-67的表達能較好地體現(xiàn)腫瘤細胞分化低、增殖快的特點，可作為腫瘤發(fā)生發(fā)展的早期事件[9-10]。本研究結果表明，在子宮內(nèi)膜癌組織中Ki-67陽性表達定位于細胞核，呈過度表達，而與正常組織中表達差異有顯著性(x2＝42.63，P＜0.05)；Ki-67與FIGO分期、組織學分級及有無淋巴結轉(zhuǎn)移有關(x2＝4.04，x2＝5.23，x2＝8.28；P＜0.05)。因此，子宮內(nèi)膜癌中Ki-67的高表達可提示腫瘤細胞增殖活躍，侵襲性強，易發(fā)生轉(zhuǎn)移，預后不良。Ki-67能客觀反映子宮內(nèi)膜癌的增殖活性，可以成為評價子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展和預后的重要指標。

本研究對E2F-1和Ki-67在子宮內(nèi)膜癌組織中表達進行相關性分析發(fā)現(xiàn)，E2F-1和Ki-67在子宮內(nèi)膜癌中無相關性，但是兩者都定位在細胞核，在細胞周期中E2F-1起到了使細胞由GI期順利進入S期，而Ki-67在S期后逐漸顯示作用，表明在子宮內(nèi)膜癌的早期E2F-1表達升高，促使GI期進入S期，之后Ki-67可能發(fā)揮作用，促使細胞異常增殖。E2F-1與Ki-67在子宮內(nèi)膜癌中可能存在某種聯(lián)系，有待于進一步深入研究。通過對E2F-1和Ki-67在子宮內(nèi)膜癌的研究證實，兩者均可促進子宮內(nèi)膜癌發(fā)生和發(fā)展。

總之，子宮內(nèi)膜癌組織中E2F-1和Ki-67處于過表達狀態(tài)，均促使細胞異常增殖，在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起到了一定作用，檢測兩者可以對臨床診斷和治療提供一定的幫助。

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