亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        格爾德霉素對(duì)肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)的膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲能力的影響

        2013-09-12 03:16:44王春輝劉松巖韓雪梅吉林省人民醫(yī)院神經(jīng)外科吉林長(zhǎng)春30000
        中國(guó)老年學(xué)雜志 2013年19期
        關(guān)鍵詞:爾德膠質(zhì)瘤霉素

        王春輝 劉松巖 韓雪梅 (吉林省人民醫(yī)院神經(jīng)外科,吉林 長(zhǎng)春 30000)

        膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見(jiàn)的腫瘤,侵襲性生長(zhǎng)是其重要的生物學(xué)特性,是外科手術(shù)難以徹底切除和術(shù)后復(fù)發(fā)的主要原因。多年來(lái),膠質(zhì)瘤侵襲性生長(zhǎng)的發(fā)生機(jī)制一直是研究的熱點(diǎn)。已經(jīng)證實(shí),肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞侵襲性生長(zhǎng)〔1〕,格爾德霉素(GDM)作為一種抗腫瘤抗生素,對(duì)HGF具有明顯的抑制作用。本研究探討GDM對(duì)HGF誘導(dǎo)的膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲能力的影響。

        1 材料與方法

        1.1 主要試劑與細(xì)胞株 HGF購(gòu)自美國(guó)Calbiochem公司,GDM購(gòu)自美國(guó)Sigma公司,Matrigel膠購(gòu)自美國(guó)BD公司,Transwell小室購(gòu)自美國(guó)Pierce公司。人膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251-MG和U87-MG由吉林省腫瘤研究所提供,NIH3T3細(xì)胞為吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫教研室提供。

        1.2 細(xì)胞培養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)分組 37℃,5%CO2條件下,用含10%胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)U87和U251細(xì)胞。用終濃度為 30 μg/L的 HGF作用 24 h后,再加入濃度為500 nmol/L的GDM處理48 h,進(jìn)行Transwell實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照(NC)組、HGF組、GDM組和HGF+GDM組。

        1.3 條件培養(yǎng)液的制備 運(yùn)用含10%胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)NIH3T3細(xì)胞至細(xì)胞匯合,用無(wú)血清的培養(yǎng)基洗3次。然后加入新鮮無(wú)血清培養(yǎng)基,37℃,5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)48 h。收集培養(yǎng)上清液過(guò)濾,即為含趨化因子的條件培養(yǎng)基,-70℃存儲(chǔ)備用。

        1.4 Transwell實(shí)驗(yàn) 取Matrigel膠,用無(wú)血清培養(yǎng)基按1∶3稀釋混勻,以80 μl/孔加至Transwell小室的上室聚碳酸酯膜上(整個(gè)操作在冰上及無(wú)菌條件下進(jìn)行,所有器皿及試管均事先預(yù)冷)。37℃下聚合30 min。將經(jīng)過(guò)HGF和GDM預(yù)先處理的細(xì)胞在無(wú)菌超凈臺(tái)內(nèi)用0.25%胰酶消化,PBS洗1次,臺(tái)盼蘭計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù),無(wú)血清的培養(yǎng)基調(diào)細(xì)胞濃度為1.0×106個(gè)/ml,24孔板內(nèi)加入NIH3T3條件培養(yǎng)液,200 μl/孔,將制備好的Transwell小室置于其內(nèi),上室加入100 μl細(xì)胞懸液,使每孔含有細(xì)胞數(shù)為1.0 ×105個(gè),于37℃,5%CO2條件下培養(yǎng)18 h。棄去上室中的培養(yǎng)液,并用生理鹽水棉簽輕輕檫去Matrigel膠,采用0.1%結(jié)晶紫染色,倒置顯微鏡觀察,10×40倍視野下任取5個(gè)不重復(fù)視野照相,并記錄侵襲細(xì)胞數(shù)量。

        1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS12.0軟件進(jìn)行方差分析及q檢驗(yàn)。

        2 結(jié)果

        與NC組相比,HGF顯著提高了兩種膠質(zhì)瘤細(xì)胞的侵襲能力(P<0.05);GDM作用48 h后,U87及U251細(xì)胞穿膜細(xì)胞數(shù)顯著低于NC組及HGF組(P<0.05);GDM+HGF組兩種膠質(zhì)瘤細(xì)胞穿膜細(xì)胞數(shù)量明顯低于NC組及HGF組(P<0.05),接近于GDM組,即GDM抑制了HGF誘導(dǎo)的促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲能力。NC組有較多細(xì)胞穿過(guò)Matrigel膠進(jìn)入下室中。HGF組侵入下室細(xì)胞數(shù)量明顯多于NC組。GDM組侵入下室細(xì)胞數(shù)量明顯少于NC組和HGF組。HGF+GDM組侵入下室細(xì)胞數(shù)量明顯少于 NC組及 HGF組,接近于 GDM組。見(jiàn)表1和圖1。

        圖1 各組膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲能力比較(×400)

        與NC組比較:1)P<0.05;與HGF組比較:2)P<0.05

        3 討論

        膠質(zhì)瘤侵襲性生長(zhǎng)表現(xiàn)為廣泛的局部侵襲而罕見(jiàn)的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,其侵襲方式主要有三種:沿神經(jīng)細(xì)胞、沿血管組織和沿白質(zhì)髓鞘纖維。其侵襲過(guò)程涉及多個(gè)步驟:腫瘤細(xì)胞通過(guò)細(xì)胞膜表面受體黏附到細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)層黏蛋白上;蛋白水解酶前體的釋放和活化;蛋白水解酶對(duì)ECM,主要是Ⅳ型膠原的水解;瘤細(xì)胞伸出偽足向被降解的基質(zhì)區(qū)域運(yùn)動(dòng),形成局部侵襲生長(zhǎng)〔2〕。此過(guò)程至少兩次與ECM接觸,如缺乏能夠有效降解IV型膠原的酶,則腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程難以實(shí)現(xiàn)。因ECM主要是Ⅳ型膠原構(gòu)成,包括基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-2和MMP-9與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移關(guān)系最密切〔3~5〕。Sun等〔3〕構(gòu)建了 MMP-9 反義RNA載體,降低了MMP-9的表達(dá),體外實(shí)驗(yàn)顯示細(xì)胞增殖明顯受到抑制,體內(nèi)實(shí)驗(yàn)顯示,腫瘤體積、重量、微血管密度和增殖活性均明顯下降。此外,有學(xué)者使用RNA干擾技術(shù)同時(shí)沉默了喉癌HEP-2細(xì)胞株中MMP-2和MMP-9的表達(dá),發(fā)現(xiàn)HEP-2細(xì)胞分泌MMP-2和MMP-9能力下降的同時(shí),出現(xiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)受到抑制,侵襲實(shí)驗(yàn)表明其侵襲能力明顯下降〔6〕。關(guān)于HGF與MMP-2關(guān)系,Tsou等〔1〕報(bào)道HGF能夠增加軟骨肉瘤細(xì)胞MMP-2的表達(dá),并促進(jìn)細(xì)胞轉(zhuǎn)移。選擇性抑制MMP-9的表達(dá)能降低膠質(zhì)瘤細(xì)胞的侵襲能力〔7〕。此外,因腫瘤的生長(zhǎng)離不開(kāi)大量的新生血管,而MMP-2和MMP-9能夠通過(guò)降解基底膜來(lái)促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移,促進(jìn)新生血管的形成〔2〕,為腫瘤增殖提供條件,提高腫瘤的惡性程度。

        已經(jīng)證實(shí),格爾德霉素或其衍生物17-AAG能抑制MMP-2及MMP-9的分泌和活性〔8〕。課題組前期使用明膠酶譜法測(cè)定U87和U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞MMP-2及MMP-9活性。結(jié)果表明:肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子可顯著增強(qiáng)MMP-2和MMP-9活性;格爾德霉素能夠顯著抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞 MMP-2、MMP-9的活性,并能抑制HGF引起的MMP-2和MMP-9活性增強(qiáng)〔9〕。

        本研究表明:HGF可明顯增強(qiáng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲能力,而GDM對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的侵襲能力有顯著的抑制作用,并抑制了HGF增強(qiáng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲的能力,可能是通過(guò)抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞MMP-2、MMP-9的活性,進(jìn)而抑制了其侵襲。

        1 Tsou HK,Chen HT,Hung YH,et al.HGF and c-Met interaction promotes migration in human chondrosarcoma cells〔J〕.PLoS One,2013;8(1):e53974.

        2 Groblewska M,Siewko M,Mroczko B,et al.The role of matrix metalloproteinases(MMPs)and their inhibitors(TIMPs)in the development of esophageal cancer〔J〕.Folia Histochem Cytobiol,2012;50(1):12-9.

        3 Sun C,Wang Q,Zhou H,et al.Antisense MMP-9 RNA inhibits malignant glioma cell growth in vitro and in vivo〔J〕.Neurosci Bull,2013;29(1):83-93.

        4 Mou L,Kang Y,Zhou Y,et al.Neurokinin-1 receptor directly mediates glioma cell migration by up-regulation of matrix metalloproteinase-2(MMP-2)and membrane type 1-matrix metalloproteinase(MT1-MMP)〔J〕.J Biol Chem,2013;288(1):306-18.

        5 Kesanakurti D,Chetty C,Rajasekhar Maddirela D,et al.Functional cooperativity by direct interaction between PAK4 and MMP-2 in the regulation of anoikis resistance,migration and invasion in glioma〔J〕.Cell Death Dis,2012;3:e445.

        6 孫亞男,楊寶峰,劉 鳴,等.基質(zhì)金屬蛋白酶-2和-9基因同時(shí)沉默抑制喉癌侵襲生長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.中華醫(yī)學(xué)雜志,2008;88(1):36-9.

        7 Jung JS,Jung K,Kim DH,et al.Selective inhibition of MMP-9 gene expression by mangiferin in PMA-stimulated human astroglioma cells:involvement of PI3K/Akt and MAPK signaling pathways〔J〕.Pharmacol Res,2012;66(1):95-103.

        8 Yamamoto Y,Osanai T,Nishizaki F,et al.Matrix metalloprotein-9 activation under cell-to-cell interaction between endothelial cells and monocytes:possible role of hypoxia and tumor necrosis factor-alpha〔J〕.Heart Vessels,2012;27(6):624-33.

        9 王春輝,羅毅男,李蘊(yùn)潛,等.格爾德霉素對(duì)HGF誘導(dǎo)的人膠質(zhì)瘤細(xì)胞MMP-2及MMP-9活性的影響〔J〕.中國(guó)老年性雜志,2008;28(1):11-3.

        猜你喜歡
        爾德膠質(zhì)瘤霉素
        阿奇霉素在小兒百日咳的應(yīng)用
        COMPLEX INTERPOLATION OF NONCOMMUTATIVE HARDY SPACES ASSOCIATED WITH SEMIFINITE VON NEUMANN ALGEBRAS?
        桑葉中1-脫氧野尻霉素的抗病毒作用研究進(jìn)展
        羅爾德·達(dá)爾的《吹夢(mèng)巨人》
        我絕對(duì)絕對(duì)不吃番茄
        兒科臨床應(yīng)用中阿奇霉素的不良反應(yīng)的探討
        DCE-MRI在高、低級(jí)別腦膠質(zhì)瘤及腦膜瘤中的鑒別診斷
        磁共振成像(2015年8期)2015-12-23 08:53:14
        P21和survivin蛋白在腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)及其臨床意義
        Sox2和Oct4在人腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)及意義
        99mTc-HL91乏氧顯像在惡性腦膠質(zhì)瘤放療前后的變化觀察
        最近中文字幕国语免费| 东京热东京道日韩av| 高清少妇二区三区视频在线观看 | 青青手机在线视频观看| 最新国产一区二区三区| 国产精品成人亚洲一区| 国产精品办公室沙发| 国产婷婷色综合av蜜臀av| 香蕉久久福利院| 在线观看网址你懂的| 久久婷婷国产综合精品| 最新日韩精品视频免费在线观看| 久久国产劲爆内射日本| 精品人妻av中文字幕乱| 精品人妻一区二区三区在线观看| 亚洲欧美日韩成人高清在线一区| 男男车车的车车网站w98免费| 久久天天躁夜夜躁狠狠躁2022| 日韩欧美亚洲中字幕在线播放| 色婷婷一区二区三区四区| 久久精品一区二区三区夜夜| 漂亮人妻被强了中文字幕| 亚洲综合激情另类小说区| 久久久精品欧美一区二区免费| 亚洲国产福利成人一区二区| 久久天堂精品一区专区av| 国产精品国产三级第一集 | 中文字幕大屁股熟女乱| 精品国产一区二区av麻豆不卡| 久久96日本精品久久久| 亚洲精品国偷拍自产在线| av无码精品一区二区三区宅噜噜| 免费视频一区二区| 国产福利小视频91| 精品国产a毛片久久久av| 欧美做受又硬又粗又大视频| 国模无码视频一区| 久草视频华人在线观看| 国产精品主播在线一区二区| 青青草视频免费观看| 国产在视频线精品视频二代|