向 芳 張國豪 張信江 (遵義醫(yī)學院附屬醫(yī)院皮膚科，貴州 遵義 563003)

“壽星寶”保健酒是由淫羊霍、丹參、黃精等中藥和貴州茅臺酒經(jīng)現(xiàn)代工藝研制而成的一種藥酒，具有益氣活血、補腎防衰的功效。藥酒是中藥的一種劑型，有“酒的作用和藥物功效”的雙重作用。本實驗從衰老生化指標的角度來探討“壽星寶”保健酒對小鼠皮膚的抗衰老功效及其作用機制，為其實際應用和功能學評價提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 實驗動物 SPF級12月齡的昆明種小鼠，雌雄兼用，體重45～55 g，由第三軍醫(yī)大學實驗動物中心提供。

1.2 受試藥物 藥酒以淫羊霍、丹參、黃精、葛根、紅花5種優(yōu)質(zhì)中藥材為主要原料，以貴州茅臺酒廠生產(chǎn)的酒度為53%醬香型的茅臺酒作為基酒，經(jīng)浸泡、過濾、提取制成。經(jīng)毒理學安全性評價后，作為本實驗的受試藥物。

1.3 主要試劑與儀器 超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)試劑盒 、丙二醛(MDA)試劑盒、皮膚羥脯氨酸(Hyp)試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供。SHHW21.420A型電熱恒溫水箱、Multiskan Spectrum全波長酶標儀、FC104電子分析天平、Soniprep150型超聲波分解器、Thermo Heraeus Multifuge X1R冷凍離心機，實驗儀器均由學院中心實驗室提供。

1.4 實驗方法

1.4.1 實驗步驟 80只昆明種老齡小鼠隨機分成老齡對照組，保健酒低、中及高劑量組，每組20只。保健酒樣品按人體(60 kg)推薦劑量為每人 60 ml/d，設計為 5、10、20 ml·kg－1·d－1三個劑量組，其中 10 ml·kg－1·d－1相當于人體推薦用量。對照組給予等量生理鹽水，各組均采用灌胃法，2次/d，連續(xù)3個月。給藥期間各組每周重新稱重1次，按體重的變化重新計算藥酒的劑量。實驗結束后小鼠斷頸處死，取背部皮膚迅速冷凍保存，擬作皮膚組織勻漿及測定皮膚抗衰老指標用。

1.4.2 10%皮膚勻漿的制備 取脫毛后背部皮膚組織0.5 g左右，經(jīng)冷生理鹽水漂洗，除去皮下脂肪和血液，濾紙拭干，稱重量，放入小燒杯內(nèi)。用移液器量取該組織塊重量9倍冷生理鹽水，先取2/3量倒入裝有組織塊燒杯中，剪碎組織塊后倒入勻漿管中，將剩余1/3生理鹽水沖洗燒杯壁，一起倒入勻漿管中進行勻漿，充分研碎使組織勻漿化。再將制備好的勻漿以轉(zhuǎn)速2 000 r/min離心15 min，取上清液備用。

1.4.3 皮膚組織勻漿生化指標測定 皮膚組織勻漿SOD、GSH-Px活力、MDA及Hyp含量的測定，參照南京建成生物工程公司SOD、GSH-Px、MDA及Hyp試劑盒說明書方法測定。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件處理，數(shù)據(jù)以±s表示，各組間比較用單因素方差分析(ANOVA)進行檢驗。

2 結果

保健酒對小鼠皮膚SOD活力、GSH-Px活力、MDA及Hyp含量的影響見表1。與老齡對照組相比，保健酒低、中、高劑量組小鼠皮膚SOD活力均明顯升高，MDA含量明顯降低(P＜0.01)，而GSH-Px活力、Hyp含量亦明顯升高(P＜0.05)。其中中劑量組SOD活力、Hyp含量明顯高于低劑量組，MDA含量明顯低于低劑量組(P＜0.01)，中劑量組GSH-Px活力高于低劑量組(P＜0.05)。高劑量組SOD活力、Hyp含量、GSH-Px活力均明顯高于低劑量組，MDA含量明顯低于低劑量組(P＜0.01)。高劑量組SOD活力、GSH-Px活力、Hyp含量高于中劑量組，MDA含量低于中劑量組，但差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，提示“壽星寶”保健酒低、中、高劑量組均能明顯提高小鼠皮膚SOD活力、GSH-Px活力、Hyp含量及降低MDA含量。其中高劑量組和中劑量組功效明顯強于低劑量組，而高劑量組和中劑量組功效相當。

表1 “壽星寶”保健酒對小鼠皮膚SOD活力、GSH-Px活力、MDA及Hyp含量的影響(±s，n=20)

表1 “壽星寶”保健酒對小鼠皮膚SOD活力、GSH-Px活力、MDA及Hyp含量的影響(±s，n=20)

與老齡對照組比較:1)P＜0.01，2)P＜0.05;與保健酒低劑量組比較:3)P＜0.01，4)P＜0.05

組別 劑量(ml/kg)SOD活力(U/mgprot) GSH-Px活力(U/mgprot) MDA含量(nmol/mgprot) Hyp含量(μg/mg)13.48±1.88 33.73±5.33 2.37±0.47 1.69±0.24保健酒低劑量組 5 16.98±2.941) 37.85±6.242) 1.60±0.371) 1.90±0.222)保健酒中劑量組 10 20.99±2.591)3) 42.74±6.922)4) 1.24±0.301)3) 2.21±0.272)3)保健酒高劑量組 20 22.65±3.691)3) 45.30±6.572)3) 1.06±0.291)3) 2.30±0.392)3)老齡對照組 －

3 討論

皮膚衰老是機體衰老的重要外在表現(xiàn)之一，而機體衰老源于細胞的衰老。自由基累積損傷是皮膚衰老的重要因素。隨著機體的衰老，體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)功能衰退，抗氧化酶的活性不斷降低，自由基過量積聚，就會引起機體損傷，將不飽和脂肪酸氧化成超氧化物，形成脂褐素。氧自由基過多還會破壞細胞膜及其他重要成分，使蛋白質(zhì)和酶變性，最后造成細胞組織功能及形態(tài)結構損害，使皮膚表現(xiàn)出變性、萎縮、粗糙無光、彈性減退、皺紋顯現(xiàn)等。同時，氧化性損傷造成體內(nèi)具有合成膠原能力的成纖維細胞受損，從而使膠原蛋白合成也受到影響，加之細胞內(nèi)羥化酶在自由基攻擊下失去羥化功能，使羥脯氨酸的生成也減少，最終導致膠原纖維合成障礙〔1〕。SOD作為機體清除自由基的主要酶類，是抗衰老研究中公認的參考指標之一。由于各種原因引起的皮膚中SOD活性降低，會使自由基過度的攻擊正常細胞，破壞各種生物膜，使細胞發(fā)生衰老，功能喪失。MDA是體內(nèi)多價不飽和脂肪酸組分受活性氧作用后過氧化反應的產(chǎn)物，由其含量可推斷體內(nèi)自由基生成的多少及自由基對機體的損傷程度。GSH是一種低分子清除劑，它可以清除超氧陰離子、過氧化氫等，能夠穩(wěn)定含巰基的酶和防止血紅蛋白及其他輔助因子受氧化損傷，因此GSH量的多少是衡量機體抗氧化能力大小的重要因素。Hyp是真皮內(nèi)含量豐富而且比較穩(wěn)定的氨基酸，它的含量可以直接反映出真皮內(nèi)膠原纖維的含量變化，而膠原纖維的含量變化可以提示皮膚老化的程度。

現(xiàn)代藥理學研究表明:淫羊霍中所含的黃酮及苷類具有清除自由基的能力，其抗氧化活性較強〔2〕。丹參中的丹參酮可減少自由基的產(chǎn)生，提高抗氧化酶活性，同時還可使成纖維細胞活性增強，膠原蛋白合成增加〔3〕。黃精中的黃精多糖可顯著提高抗氧化酶活性，增強機體的抗氧化能力〔4〕。黃精外用有促進膠原纖維合成，延緩衰老，改善皮膚功能狀態(tài)的作用〔5〕。葛根所含的葛根黃酮可提高抗氧化酶活性，增強其對自由基的清除能力，抑制脂質(zhì)過氧化，降低體內(nèi)MDA的生成，從而起到保護機體組織的作用〔6〕。紅花中有效成分紅花黃色素有抗氧化活性，具有較強的清除羥自由基和超氧陰離子自由基的能力，尤其對羥自由基的清除效果很好，清除率達98.31%〔7〕。貴州茅臺酒具有獨特的釀造工藝，除含有豐富的氨基酸和維生素外，還含有SOD及各種人體必需的微量元素，具有清除自由基、抗氧化、保護細胞的作用〔8〕。將上述各種具有協(xié)同作用的中藥與酒融于一體制成藥酒，不僅配制方便、藥性穩(wěn)定、安全有效，而且酒精是一種良好的半極性有機溶劑，中藥的各種有效成分都易溶于其中，藥借酒力、酒助藥勢而充分發(fā)揮其效力，提高療效。

本實驗說明“壽星寶”保健酒可能是通過有效提高皮膚抗氧化酶的活性，增強機體抗氧化和清除自由基的能力，刺激衰老皮膚成纖維細胞活力，促進膠原蛋白的合成，從而起到預防和延緩皮膚衰老的作用。

值得一提的是，適量飲用保健酒有益健康與養(yǎng)顏，但過度濫飲則會導致皮膚內(nèi)毛細血管疲勞而缺氧，尤其是嗜酒者極易發(fā)展成慢性酒精中毒，久之不僅不利健康，而且有損容顏，故飲用保健藥酒也要適可而止。

1 王 萍，王小燕.本草養(yǎng)顏膏對老齡大鼠皮膚SOD和Hyp的影響〔J〕.中醫(yī)藥學報，2009;37(1):18-20.

2 侯麗麗，張守勤，李東升，等.淫羊藿有效成分抗氧化活性研究〔J〕.安徽農(nóng)業(yè)科學，2011;39(3):1376-7.

3 梁 杰，李 響.枸杞多糖與丹參酮延緩小鼠皮膚衰老的實驗研究〔J〕.中國實用醫(yī)藥，2009;4(9):5-6.

4 王玉勤，吳曉嵐，張廣新，等.黃精多糖對大鼠抗氧化作用的實驗研究〔J〕.中國現(xiàn)代醫(yī)生，2011;49(5):6.

5 楊智榮，趙文樹，李建民，等.外用黃精制劑對小鼠衰老皮膚膠原纖維影響的實驗研究〔J〕.中醫(yī)藥學報，2005;33(4):42-3.

6 鄭王巧，郭春花，張曉一，等.葛根黃酮對亞急性衰老模型小鼠抗氧化作用的研究〔J〕.四川生理科學雜志，2009;31(4):145-6.

7 馮 濤，閻婷婷，閻國榮，等.紅花提取物清除自由基能力的初步研究〔J〕.天津農(nóng)學院學報，2010;17(1):6-9.

8 吳 君，程明亮，張國豪，等.茅臺酒與肝病關系的流行病學調(diào)查及病理組織學研究〔J〕.世界華人消化雜志，2001;9(12):1374-8.