李琳蕓

(華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬荊州醫(yī)院檢驗科，湖北 荊州 434020)

采用間接免疫熒光法能檢測到患者血清中存在的多種熒光類型的自身抗體。間接免疫熒光法檢測的熒光類型的名稱目前國內(nèi)尚缺乏標(biāo)準(zhǔn)化，按照美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(NCCLS)I/LA2-A文件[1]，可分為核顆粒型、核纖維型、核仁型和胞漿型等，其中主要是抗細(xì)胞核型自身抗體?？辜?xì)胞漿型自身抗體的熒光模型缺乏特征性，其臨床意義不甚清楚。本研究對164例抗細(xì)胞漿型自身抗體陽性患者的臨床情況進(jìn)行分析，以探討該類抗體的臨床意義。

材料和方法

一、標(biāo)本來源

164例抗細(xì)胞漿型自身抗體陽性患者來自2010年1至8月住院患者，男28例，女136例，年齡3～78歲。各疾病均符合其診斷標(biāo)準(zhǔn)。抽取受試者靜脈血，分離獲得血清，立即檢測。

二、儀器與試劑

LeicaDM2500多功能顯微鏡購自德國Leica公司;PBT-X4生物芯片識別儀購自南京大淵公司;抗核抗體IgG檢測試劑盒購自德國歐蒙公司;8項自身抗體IgG蛋白芯片檢測試劑盒購自南京大淵公司。

三、方法

采用間接免疫熒光法檢測患者血清標(biāo)本中的自身抗體，生物基質(zhì)為HEp-2細(xì)胞及猴肝細(xì)胞生物薄片。熒光顯微鏡下觀察熒光模型。抗雙鏈DNA(dsDNA)、抗干燥綜合征A抗原抗體(SSA)、抗干燥綜合征B抗原抗體(SSB)、抗DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶-1抗體(Scl-70)、抗組氨酰tRNA合成酶抗體(Jo-1)、抗 Smith抗體(Sm)、抗 U1核糖核蛋白(U1-RNP)及抗核糖體P蛋白抗體(Rib-p)均用蛋白芯片法檢測，嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行檢測。

四、統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 11.5統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。2組特異性抗體檢出率以及不同疾病抗體組成的比較均采用R×C列聯(lián)表的χ2檢驗，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

一、164例抗細(xì)胞漿型自身抗體陽性標(biāo)本中，14例(9%)為胞漿纖維型，150例(91%)為胞漿顆粒型，見圖1。

二、抗細(xì)胞漿型自身抗體與其他自身抗體的相關(guān)性分析顯示，79例(48%)為抗細(xì)胞漿型自身抗體單陽性，其中9例(11%)檢測出特異性抗體;85例(52%)為合并抗細(xì)胞核型自身抗體陽性，其中53例(62%)檢測出特異性抗體，2組特異性抗體檢出率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=44.95，P＜0.01)。所有標(biāo)本中合并抗細(xì)胞核型自身抗體陽性及特異性抗體檢出例數(shù)，見表1。

圖1 抗細(xì)胞漿型自身抗體熒光圖(×400)

三、164例抗細(xì)胞漿型自身抗體陽性病例中，99例(60%)為自身免疫性疾病，包括系統(tǒng)性紅斑狼瘡、多發(fā)性肌炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、硬皮病、干燥綜合征、重疊綜合征等，65例(40%)為非自身免疫性疾病，包括感染性疾病、心肺疾病等。99例自身免疫性疾病中68例為抗細(xì)胞漿型自身抗體合并抗細(xì)胞核型自身抗體陽性;65例非自身免疫性疾病中48例抗細(xì)胞漿型自身抗體單陽性，兩者自身抗體組成差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=28.26，P ＜0.01)，見表2。

表1 抗細(xì)胞漿型自身抗體陽性標(biāo)本特異性抗體檢出例數(shù)

表2 不同病種與自身抗體的相關(guān)性

討 論

以商家提供或自制的人上皮細(xì)胞HEp-2細(xì)胞作為基質(zhì)，采用間接免疫熒光法檢測患者血清標(biāo)本是目前臨床上篩檢抗自身抗體的主要方法[2]。HEp-2細(xì)胞表達(dá)大量的細(xì)胞漿抗原，可用于檢測抗細(xì)胞漿型自身抗體。與抗細(xì)胞核型自身抗體比較，大多數(shù)抗細(xì)胞漿型自身抗體熒光模型缺乏特征性，其臨床意義不甚清楚，相關(guān)文獻(xiàn)報道較少。因此，本研究總結(jié)分析164例抗細(xì)胞漿型自身抗體陽性患者的臨床情況，以探討該類抗體的臨床意義。

164例抗細(xì)胞漿型自身抗體陽性病例中，91%為胞漿顆粒型，9%為胞漿纖維型，52%病例同時存在抗細(xì)胞核型自身抗體陽性。自身抗體的最終區(qū)分需要使用純化的抗原，而到目前為止，并不是所有的自身抗體熒光模型都已確定其特異性抗體。本實驗室使用的自身抗體譜為常規(guī)的自身抗體，包括抗 dsDNA、抗 SSA、抗 SSB、抗 Scl-70、抗Jo-1、抗Sm、抗U1-RNP及抗Rib-p。抗細(xì)胞漿型自身抗體單陽性組特異性抗體檢出率為11%，而合并抗細(xì)胞核型自身抗體陽性組的特異性抗體檢出率為62%，明顯高于前者。已明確熒光模型為抗細(xì)胞漿型的抗體有2種，即抗Rib-p與抗Jo-1[3]。本研究總結(jié)的164例抗細(xì)胞漿型自身抗體陽性標(biāo)本中共有33例出現(xiàn)抗Rib-p陽性，6例出現(xiàn)抗Jo-1陽性，其中79例抗細(xì)胞漿型自身抗體單陽性病例中檢出抗Rib-p陽性6例，檢出抗Jo-1陽性2例。以上數(shù)據(jù)提示大部分的抗細(xì)胞漿型自身抗體對應(yīng)的特異性抗體檢出率低，可能為常規(guī)抗體譜以外的其他抗體。

自身抗體對于自身免疫性疾病的診斷和鑒別診斷具有重要意義[4]。本研究分析顯示，164例抗細(xì)胞漿型自身抗體陽性病例中，99例為自身免疫性疾病，其中68例為抗細(xì)胞漿型自身抗體合并抗細(xì)胞核型自身抗體陽性;65例為非自身免疫性疾病，其中48例抗細(xì)胞漿型自身抗體單陽性，提示抗細(xì)胞漿型自身抗體在自身免疫性與非自身免疫性疾病中均能出現(xiàn)，自身免疫性疾病中抗細(xì)胞漿型自身抗體多與抗細(xì)胞核型自身抗體同時出現(xiàn)，而在非自身免疫性疾病中，抗細(xì)胞漿型自身抗體多單獨出現(xiàn)。需要注意的是，本研究分析的非自身免疫性疾病中40%為感染性疾病(包括病毒、支原體感染等)。自身抗體的產(chǎn)生機制不明確，其中有不少研究顯示自身免疫反應(yīng)的發(fā)生與病毒或細(xì)菌等微生物的感染密切相關(guān)，比如EB病毒、柯薩奇病毒、人巨細(xì)胞病毒、解脲脲原體等感染患者可檢測出自身抗體[5-9]，這些微生物的蛋白或多肽可能存在與自身抗原相似的表位而誘導(dǎo)交叉反應(yīng)，導(dǎo)致自身免疫的發(fā)生。有報道認(rèn)為發(fā)生這些感染的患者在初期可無任何自身免疫的癥狀，感染急性期(數(shù)天)隨著自身免疫反應(yīng)的發(fā)生而出現(xiàn)某些不典型的癥狀，但在此階段臨床尚不能確診為自身免疫性疾病，其中某些患者可能在感染慢性期(數(shù)周或數(shù)月)逐漸發(fā)展成為臨床能確診的自身免疫性疾病，而此時感染已被清除，常導(dǎo)致難以確定感染與自身免疫性疾病發(fā)生的相關(guān)性[10]。本研究檢測的這些抗細(xì)胞漿型自身抗體陽性的感染性疾病患者，有可能處于感染急性期而發(fā)生自身免疫反應(yīng)，對于這類患者，臨床醫(yī)生應(yīng)繼續(xù)追蹤觀察或告知其注意病情變化，以早期發(fā)現(xiàn)自身免疫性疾病的發(fā)生。

受到臨床認(rèn)識、檢測方法和檢測試劑等因素的制約，本研究總結(jié)分析的結(jié)論有限，但從以上結(jié)果可以看出，關(guān)于抗細(xì)胞漿型自身抗體存在以下問題:(1)大部分的抗細(xì)胞漿型自身抗體不能確定特異性抗體或抗原，需要總結(jié)特征性的抗細(xì)胞漿型自身抗體的熒光模型，研究其對應(yīng)的特異性抗體及其抗原成分;(2)對于抗細(xì)胞漿型自身抗體陽性的自身免疫性疾病患者，該抗體陽性對于疾病的活動性、療效及疾病預(yù)后監(jiān)測等的價值有待進(jìn)一步的探討;對于尚未診斷為自身免疫性疾病的患者，尤其是感染性疾病的患者，可追蹤觀察其抗體水平及其病情的發(fā)展變化。

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