趙元明

(濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東 濟(jì)寧 272029)

谷氨酸脫氫酶(GLDH)是1種含鋅線粒體酶，主要分布于肝臟、心肌和腎細(xì)胞線粒體的基質(zhì)及內(nèi)膜中，而以肝組織活性最高[1]。分布于肝細(xì)胞線粒體內(nèi)的GLDH在肝細(xì)胞受損害時(shí)會(huì)明顯升高[2]。天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)則主要存在于心、肝和骨骼肌中，其中肝中的AST大部分存在于線粒體中，所以AST的檢測(cè)也可作為肝細(xì)胞損害的輔助性指標(biāo)[3]。本研究測(cè)定了各種肝病患者的 GLDH、AST和丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)活性，以評(píng)價(jià)臨床應(yīng)用價(jià)值。

材料和方法

一、研究對(duì)象

1.正常對(duì)照組 選取2011年1月至8月在濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院進(jìn)行健康體檢的健康人120名，男69名，女51名，年齡16～57歲，各種理化指標(biāo)均正常，并且排除心、腦、骨、腎及肝膽等系統(tǒng)的疾病。

2.肝膽疾病組 選取2011年1月至12月濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院住院的患者180例，男102例，女78例，年齡8～67歲，均以臨床癥狀結(jié)合血清病毒學(xué)標(biāo)志及其他臨床輔助綜合判斷，其中急性肝炎40、肝癌32例、肝硬化28例、膽道腫瘤25例、膽結(jié)石25例、其他肝膽疾病30例(包括肝膿腫、膽結(jié)石及膽囊炎等)。所測(cè)樣本均合格。

二、儀器與試劑

儀器為日立7600-120全自動(dòng)生化分析儀。GLDH試劑由羅氏公司提供，AST、ALT試劑均由德國(guó) CENTRONIC公司提供，質(zhì)控品由英國(guó)RANDOX公司提供。采用試劑說明書推薦的參數(shù)進(jìn)行相關(guān)測(cè)定。

三、測(cè)定方法

GLDH、AST和ALT測(cè)定均采用酶速率法，并分別采用低、中、高值進(jìn)行精密度檢測(cè)，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作和結(jié)果判定。原理:α-酮戊二酸+NADH+NH4+谷氨酸+NAD++H2O。在上述反應(yīng)中，NADH被氧化生成NAD+的速率與GLDH的活性成正比。在340 nm波長(zhǎng)下測(cè)定NADH的下降速率，即可計(jì)算出GLDH的活性。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

陽性判斷界值采用正常對(duì)照組95%水平確定參考范圍，計(jì)量數(shù)據(jù)以表示，采用SPSS17.0進(jìn)行t檢驗(yàn)和相關(guān)性分析。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、精密度測(cè)定

低、中、高值質(zhì)控品的批內(nèi)變異系數(shù)(CV)值分別為 2.36%、3.24%和 2.75%。

二、各組GLDH、AST和ALT測(cè)定結(jié)果

不同肝膽疾病組血清GLDH、AST和ALT活性均有不同程度升高，與正常對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05);GLDH的平均升高倍數(shù)(8.8倍)高于AST(4.2倍)。急性肝炎組ALT的平均升高倍數(shù)(67.3倍)遠(yuǎn)高于 GLDH(11.6倍);肝癌組GLDH的平均升高倍數(shù)(15.4倍)高于ALT(4.8倍);其他疾病組二者的升高倍數(shù)相當(dāng)。結(jié)果見表1、圖1。

表1 正常對(duì)照組和肝膽疾病各組GLDH、AST和ALT活性比較(，U/L)

表1 正常對(duì)照組和肝膽疾病各組GLDH、AST和ALT活性比較(，U/L)

注:與正常對(duì)照組比較，*P ＜0.05、＊＊P ＜0.01

組別 例數(shù)GLDH AST ALT正常對(duì)照組120 4.37 ±2.88 26.80 ±6.32 23.21 ±5.22急性肝炎組 40 45.32±28.31＊＊ 150.21±73.33＊＊ 1023.55±732.21肝硬化組 28 37.66±12.33＊＊ 105.56±60.02＊＊ 168.03±77.03＊＊肝癌組 32 66.27 ±32.21＊＊ 159.34 ±66.88＊＊ 95.43 ±55.06＊＊膽道腫瘤組 25 17.46 ±10.03* 90.01 ±34.33* 168.32 ±64.31＊＊膽結(jié)石組 25 30.31±16.22＊＊ 76.30±39.39* 155.82±70.01＊＊其他疾病組 30 22.23±8.03＊＊ 63.31±26.43*33.23 ±13.09

三、各肝膽疾病組GLDH和AST的相關(guān)性分析

從表1可見，肝膽疾病患者GLDH活性升高均伴隨不同程度AST活性增高，但AST活性增高并不都有GLDH活性升高。GLDH和AST的相關(guān)性分析顯示:肝癌、膽結(jié)石患者二者活性變化有明顯相關(guān)性(r=0.86，P ＜0.01)，急性肝炎和膽道腫瘤患者二者有相關(guān)性(r=0.72，P ＜0.05)，而肝硬化及其他肝膽疾病患者二者無相關(guān)性(r=0.41，P ＞0.05)。

討 論

本研究精密度試驗(yàn)顯示，GLDH、AST和ALT試劑的批內(nèi)精密度＜5%，表明檢測(cè)結(jié)果有很好的重復(fù)性。

健康人正常情況下血中GLDH含量很低，但在肝細(xì)胞損傷或壞死時(shí)可進(jìn)入血流，使血清中GLDH活性明顯增高[4]。GLDH活性無季節(jié)性波動(dòng)，個(gè)體差異小，不受其他因素影響。因此，測(cè)定血清GLDH活性可作為診斷肝細(xì)胞病變的重要指標(biāo)[5]。

將ALT、AST與GLDH聯(lián)合檢測(cè)表明，GLDH反映肝實(shí)質(zhì)損傷的特異性高于 ALT和 AST[6]。本研究結(jié)果顯示，ALT在肝臟輕度病變時(shí)即明顯升高，而在中、重度肝臟病變時(shí)則升高不明顯。雖然ALT在肝病早期即可出現(xiàn)改變，但特異性較差，其升高幅度亦不一定完全反映肝細(xì)胞損害的程度。ALT同時(shí)存在于線粒體及細(xì)胞漿，相對(duì)分子質(zhì)量約為105。GLDH只存在于線粒體，而不存在于細(xì)胞漿，相對(duì)分子質(zhì)量約為106[7]。因此，肝細(xì)胞病變僅為細(xì)胞膜通透性改變時(shí)，血清GLDH不升高，而當(dāng)細(xì)胞壞死與線粒體崩解時(shí)，GLDH解離并逸出細(xì)胞。所以，GLDH正常不能排除肝細(xì)胞的輕度損害，而GLDH異常提示則肝細(xì)胞壞死，GLDH與ALT二者同時(shí)測(cè)定將有助于肝細(xì)胞損傷及其嚴(yán)重程度的判定[8]。

本研究結(jié)果顯示，不同肝膽疾病血清中GLDH、AST和ALT活性都明顯高于正常對(duì)照組。表明在不同肝膽疾病中，3種酶的活性均升高，但升高幅度不同，GLDH的升高幅度均高于AST。這種差異在肝癌和肝硬化患者中表現(xiàn)更明顯。在膽道疾病、膽結(jié)石和其他疾病中GLDH活性亦較AST升高幅度高，但差異相對(duì)肝癌和肝硬化較低。這可能與GLDH在正常情況下血清含量較低，當(dāng)肝細(xì)胞損傷累及線粒體時(shí)，血清GLDH活性明顯升高有關(guān)。AST同時(shí)存在于肝細(xì)胞胞質(zhì)中，當(dāng)肝細(xì)胞損傷時(shí)升高不如GLDH明顯，本研究結(jié)果證明了這一點(diǎn)。

對(duì)肝膽疾病各組的GLDH和AST活性進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示肝癌和膽結(jié)石患者的GLDH和AST活性變化有明顯相關(guān)性(r=0.86，P＜0.01)，而在肝硬化和其他疾病患者中則無相關(guān)性(r=0.41，P ＞0.05)，表明 GLDH 在診斷肝實(shí)質(zhì)性損傷時(shí)特異性優(yōu)于AST。

由于GLDH在體內(nèi)的生物半衰期為16 h，所以當(dāng)病情得到良好控制或改善后，GLDH活性隨即降低，故 GLDH可作為療效判定的指標(biāo)。GLDH持續(xù)高水平，提示肝細(xì)胞線粒體破壞持續(xù)存在，表明預(yù)后不良。因此，測(cè)定GLDH的活性對(duì)肝病早期診斷、掌握病情、判斷預(yù)后有其重要臨床意義[9]。

綜上所述，測(cè)定血清中GLDH活性可作為診斷肝細(xì)胞病變，特別是壞死性肝病的重要指標(biāo)之一。而對(duì)于其他一些疾病GLDH也有診斷價(jià)值，并且有應(yīng)用和開發(fā)前景。

[1]曹 燕，王柏山，牛廣華，等.谷氨酸脫氫酶檢測(cè)在慢性肝炎中的應(yīng)用[J].上海醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，2003，18(4):247-248.

[2]張立江，王佳楠，高俊芬.速率法檢測(cè)血清 GLDH 120例臨床分析[J].中國(guó)社區(qū)醫(yī)師，2008，9(11):90.

[3]高 玲，孫艷紅，王勇強(qiáng).幾種肝膽疾病血清中谷氨酸脫氫酶和AST活性變化的研究[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2004，20(2):201-202.

[4]李 倩，陳蔚銘，康向東.谷氨酸脫氫酶、膽堿酯酶在高血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶肝病患者鑒別診斷中的應(yīng)用[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2005，20(5):437-438.

[5]潘 峰，李榮斌，張麗霞.血清GLDH和AST-m在診斷幾種肝臟疾病中的意義[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2005，9(6):986-987.

[6]黃慧謙，呂 寧，侯志平，等.肝損傷酶活性聯(lián)合檢測(cè)在肝膽疾病診斷中的相關(guān)分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2008，5(8):453-454.

[7]劉金濤.谷氨酸脫氫酶活力變化在肝損傷中的應(yīng)用[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2011，32(2):270-271.

[8]邢 俊，李江華.血清谷氨酸脫氫酶檢測(cè)在肝細(xì)胞損傷性疾病中的臨床應(yīng)用價(jià)值[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2007，30(5):34-35.

[9]雷 鳴，朱志斌.血清GLDH和(AST+ALT)/GLD比值對(duì)肝病診斷的臨床探討[J].實(shí)用醫(yī)技雜志，2007，14(28):3842-3844.