徐 鵬， 薛冰蓉，吳 延，楊渝偉，薛 莉，葉 平

(1.綿陽(yáng)市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 綿陽(yáng) 621000;2.堀場(chǎng)(中國(guó))貿(mào)易有限公司醫(yī)療事業(yè)部，上海 200335)

血常規(guī)是最基本的血液學(xué)分析項(xiàng)目，及時(shí)出具患者血常規(guī)診斷報(bào)告，縮短門(mén)診患者等候血細(xì)胞分析報(bào)告時(shí)間是本科室亟待解決的問(wèn)題。近期本科室增設(shè)了用血量少、檢測(cè)時(shí)間更短的PENTRA MS60血液分析儀(簡(jiǎn)稱(chēng)PMS60)。PMS60和SYSMEX XS800i血液分析儀(簡(jiǎn)稱(chēng)XS800i)同時(shí)使用必然會(huì)導(dǎo)致結(jié)果差異，那么能否實(shí)現(xiàn)結(jié)果互認(rèn)并滿足臨床診治需求，是目前必須解決的問(wèn)題。如PMS60儀器的不典型淋巴細(xì)胞(atypical lymphocyte，ALY)是在散點(diǎn)圖中位于淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞之間的一群細(xì)胞，包括小原始細(xì)胞、大淋巴細(xì)胞、反應(yīng)性淋巴樣細(xì)胞、刺激性淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞等[1]，而XS800i與ALY相應(yīng)的警示標(biāo)志應(yīng)為原始細(xì)胞、異型淋巴細(xì)胞、異常淋巴細(xì)胞等。為了驗(yàn)證PMS60測(cè)定ALY結(jié)果的可靠性，我們以顯微鏡分類(lèi)鏡檢為標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)用PMS60、XS800i檢測(cè)相同樣本，對(duì)其ALY的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比對(duì)與分析。

材料和方法

一、樣本來(lái)源

408例樣本均來(lái)自綿陽(yáng)市中心醫(yī)院門(mén)診患者，經(jīng)PMS60檢測(cè)出現(xiàn)含ALY報(bào)警的樣本193例(男92例、女101例，年齡27 d～56歲，兒童158例，成人35例)，無(wú)ALY報(bào)警的樣本215例(男108例、女97例，年齡1個(gè)月 ～80歲，兒童162例，成人53例)。

二、方法

1.儀器與試劑 PMS60為法國(guó)ABX公司產(chǎn)品，XS800i為日本Sysmex公司產(chǎn)品。2臺(tái)儀器均使用原裝配套試劑和質(zhì)控品。OLYMPUS CX21顯微鏡由日本奧林巴斯公司生產(chǎn)。瑞氏染液按照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》(第3版)要求配制。

2.樣本采集 采用BD公司提供的含乙二胺四乙酸二鉀的尖底采血管采集末梢血0.5 mL后用混勻器充分混勻，采用BD公司提供的乙二胺四乙酸二鉀真空采血管采集靜脈血3 mL輕輕顛倒混勻，上機(jī)檢測(cè)，制備符合要求的血涂片并編號(hào)染色，均在2 h內(nèi)完成。

3.檢測(cè)方法 PMS60和XS800i測(cè)定均嚴(yán)格按照血液分析儀操作規(guī)程進(jìn)行操作。每張血涂片由有經(jīng)驗(yàn)的檢驗(yàn)工作人員在顯微鏡下采用雙盲法分類(lèi)200個(gè)白細(xì)胞。

三、ALY陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)

以顯微鏡檢查結(jié)果作為“金標(biāo)準(zhǔn)”。將儀器測(cè)定結(jié)果與鏡檢結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，有該項(xiàng)報(bào)警信號(hào)者，若鏡檢陽(yáng)性，則為真陽(yáng)性，否則為假陽(yáng)性;如果鏡檢陰性同時(shí)也沒(méi)有該項(xiàng)報(bào)警信號(hào)，則為真陰性，如果鏡檢陽(yáng)性而沒(méi)有該項(xiàng)報(bào)警信號(hào)，則為假陰性。

1.PMS60 以儀器廠商提供標(biāo)準(zhǔn)為依據(jù)，即出現(xiàn)ALY提示信息且比例＞2.5%和/或絕對(duì)值＞0.25×109/L為儀器報(bào)警陽(yáng)性。

2.XS800i 出現(xiàn)原始細(xì)胞、異常淋巴細(xì)胞和異型淋巴細(xì)胞任何1項(xiàng)或1項(xiàng)以上為儀器報(bào)警陽(yáng)性。

3.血涂片 (1)非淋系異常細(xì)胞≥1%;(2)異型淋巴細(xì)胞≥2%;(3)異常淋巴細(xì)胞(原始或幼稚淋巴細(xì)胞)≥1%;(4)漿細(xì)胞≥1%。只要滿足上述任何一項(xiàng)指標(biāo)者即為陽(yáng)性。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

運(yùn)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，對(duì)儀器顯示的ALY計(jì)算Kappa值，判斷警示標(biāo)志與相應(yīng)細(xì)胞檢出的一致性。Kappa值≥0.75，兩者達(dá)到滿意的一致性;0.4≤Kappa值＜0.75，兩者一致性尚可;Kappa 值 ＜0.4，兩者一致性不夠理想[2]。

結(jié) 果

一、2臺(tái)血液分析儀出現(xiàn)ALY報(bào)警陽(yáng)性樣本比對(duì)分析

PMS60與XS800i出現(xiàn)ALY報(bào)警一致率為89.7%，Kappa值為0.793，提示信息的一致性滿意。見(jiàn)表1。

表1 PMS60與XS800i出現(xiàn)ALY報(bào)警的比對(duì)分析(例)

二、2臺(tái)血液分析儀出現(xiàn) ALY報(bào)警與顯微鏡分類(lèi)結(jié)果比對(duì)分析

與顯微鏡分類(lèi)相比，PMS60出現(xiàn)ALY報(bào)警的Kappa值為0.792，一致性評(píng)價(jià)為滿意，血涂片復(fù)檢率(復(fù)檢率=真陽(yáng)性率+假陽(yáng)性率)為47.3%、漏檢率(假陰性率)為1.5%、總符合率(準(zhǔn)確度)為89.7%、約登指數(shù)為0.82;XS800i出現(xiàn)ALY報(bào)警的Kappa值為0.779，一致性評(píng)價(jià)為滿意，血涂片復(fù)檢率為43.9%、漏檢率(假陰性率)為3.4%、總符合率(準(zhǔn)確度)為89.2%、約登指數(shù)為0.79。見(jiàn)表2、表3。

表2 2臺(tái)血液分析儀出現(xiàn)ALY報(bào)警與顯微鏡分類(lèi)結(jié)果比對(duì)分析 (例)

表3 2臺(tái)血液分析儀出現(xiàn)ALY報(bào)警的敏感性及特異性分析 (%)

三、PMS60驗(yàn)證試驗(yàn)

隨機(jī)選擇112例樣本在該儀器上檢測(cè)，并與顯微鏡分類(lèi)結(jié)果對(duì)比分析，結(jié)果顯示20例ALY陽(yáng)性樣本中有5例假陽(yáng)性，92例陰性樣本中有1例假陰性，準(zhǔn)確度為94.6%。

討 論

PMS60采用的雙鞘流通道技術(shù)是白細(xì)胞五分類(lèi)、幼稚細(xì)胞定量測(cè)定的核心原理。在LMNE散點(diǎn)圖中同時(shí)得到嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、ALY和巨大未成熟細(xì)胞的結(jié)果。PMS60出現(xiàn)ALY報(bào)警信息的原因是樣本中可能存在漿細(xì)胞、ALY和大淋巴細(xì)胞[1]。XS800i采用半導(dǎo)體激光流式細(xì)胞結(jié)合細(xì)胞染色技術(shù)，在DIFF和BASO通道中同時(shí)得到嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞的結(jié)果，同時(shí)還得到幼稚粒細(xì)胞和OTHER(相當(dāng)于PMS60的ALY)2個(gè)研究性參數(shù)結(jié)果，在白細(xì)胞提示信息欄中可得到原始細(xì)胞、核左移、異型淋巴細(xì)胞、異常淋巴細(xì)胞等提示信息。XS800i中的OTHER參數(shù)僅對(duì)原始細(xì)胞、異型淋巴細(xì)胞及異常淋巴細(xì)胞等進(jìn)行大概分析[3]，而對(duì)于PMS60測(cè)定的ALY結(jié)果雖然是定量的，但畢竟是多類(lèi)細(xì)胞的綜合體。因此，PMS60的ALY警示標(biāo)志只能與XS800i的OTHER警示標(biāo)志做定性比較。本研究顯示，2臺(tái)儀器間出現(xiàn)ALY報(bào)警信息一致率高(89.7%)，Kappa 值為0.793，一致性滿意，該項(xiàng)可實(shí)現(xiàn)檢驗(yàn)結(jié)果互認(rèn)。

以顯微鏡分類(lèi)為標(biāo)準(zhǔn)，PMS60對(duì)ALY報(bào)警提示的Kappa值為0.792，顯示一致性為滿意。顯微鏡分類(lèi)陽(yáng)性的163例樣本中，出現(xiàn)異型淋巴細(xì)胞141例、原幼淋巴細(xì)胞5例、異常細(xì)胞6例、幼稚粒細(xì)胞8例、漿細(xì)胞2例、幼紅細(xì)胞1例?？梢?jiàn)PMS60檢測(cè)的ALY主要是異型淋巴細(xì)胞，而健康人血液中偶見(jiàn)異型淋巴細(xì)胞一般不超過(guò)2%[4]。另外，PMS60提示ALY的準(zhǔn)確度、敏感性及特異性都比較高(依次為 89.7%、96.3%、85.3%)。因此，PMS60對(duì)ALY的比例和絕對(duì)值設(shè)定的陽(yáng)性閾值分別為2%和0.2×109/L，而且需在ALY比例 ＞2.5%和/或 ALY 絕對(duì)值 ＞0.25×109/L時(shí)儀器才會(huì)出現(xiàn)ALY報(bào)警信息，此方案是可行的，此時(shí)進(jìn)行顯微鏡分類(lèi)也是必要的。

儀器的設(shè)計(jì)原理保證了儀器檢測(cè)結(jié)果的敏感性和穩(wěn)定性[5]，用血液分析儀進(jìn)行全血細(xì)胞分析，總希望有較高的定量檢測(cè)敏感性以避免漏檢，但這勢(shì)必會(huì)帶入假陽(yáng)性。血液分析儀對(duì)全血細(xì)胞進(jìn)行分析，不是由細(xì)胞核、細(xì)胞漿、細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的整體差異來(lái)鑒別細(xì)胞，因此不可避免存在干擾因素而產(chǎn)生一定的誤差。雖然血液分析儀可以大大提高工作效率，可信度也較高，但是如果完全依靠?jī)x器檢測(cè)結(jié)果，不加以分析和復(fù)查直接發(fā)出報(bào)告，會(huì)向臨床發(fā)出一定數(shù)量的錯(cuò)誤報(bào)告，造成誤診或?qū)е虏缓侠碇委焄6]。因此，根據(jù)國(guó)際血液學(xué)復(fù)審協(xié)作組制定41條規(guī)則和國(guó)際血液學(xué)復(fù)審協(xié)作組認(rèn)為5%是保證患者檢測(cè)結(jié)果安全的最大可接受的假陰性率和儀器識(shí)別能力及參數(shù)[7]，對(duì)PMS60制訂合適的復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)是必要的。本研究顯示，當(dāng)PMS60提示ALY陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)制訂為ALY比例＞2.5%和/或 ALY 絕對(duì)值 ＞0.25×109/L 時(shí)，其陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值都比較高(分別為81.3%、97.2%)，約登指數(shù)為 0.82(理想值為1)，準(zhǔn)確度為89.7%(理想值為100%)。因此，PMS60的ALY陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)是可信的。

綜上所述，PMS60對(duì)ALY具有較高的敏感性及較強(qiáng)的識(shí)別能力。在保證儀器正常使用情況下，當(dāng)有ALY比例＞2.5%和/或ALY絕對(duì)值＞0.25×109/L時(shí)，必須進(jìn)行顯微鏡分類(lèi)。

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