楊芳 韋瑞紅 曾曉娟 何春容 劉小樂 張仙

Toll樣受體4在胎膜早破中的表達及意義

楊芳 韋瑞紅 曾曉娟 何春容 劉小樂 張仙

目的 探討Toll樣受體4(TLR4)在胎膜早破中的表達及意義。方法 選擇100例早產(chǎn)胎膜早破孕婦設(shè)為PPROM組, 100例足月胎膜早破孕婦設(shè)為PROM組, 100例足月正常孕婦作為對照組,采用免疫組織化學(xué)法檢測胎膜破裂口處胎膜組織TLRs的分布與表達。結(jié)果 胎膜組織中TLR4的表達，PPROM組與PROM組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義;PROM組與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義；PPROM組與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論 Toll樣受體4在胎膜早破孕婦中高表達, 為胎膜早破的早期診斷提供更敏感的信號指標。

Toll樣受體；胎膜早破；胎盤

胎膜早破可引起早產(chǎn)、臍帶脫垂, 并危及母兒安危, 但其確切的發(fā)病機制尚未明確。近年來, Toll樣受體(TLRs), 尤其是TLR4在胎膜早破中的作用越來越受到重視。TLRs通過識別病原微生物的病原相關(guān)分子模式激活先天性免疫應(yīng)答,此外, 還可引起細胞因子釋放, 上調(diào)共刺激分子表達, 為啟動獲得性免疫提供必要的活化信號, 其在眾多疾病的發(fā)生和進展中起重要作用。本研究通過探討TLR4在胎膜早破中的表達情況, 分析其在胎膜早破中的診斷及治療價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇100例早產(chǎn)胎膜早破孕婦設(shè)為PPROM組, 100例足月胎膜早破孕婦設(shè)為PROM組, 100例足月正常孕婦作為對照組, 排除機械性損傷和多胎、胎位異常、頭盆不稱等原因所致的PROM, 臨床無感染征象, 無其他產(chǎn)科合并癥和并發(fā)癥, 近期無外傷和性交等明顯誘因, 且PROM組均在破膜12 h以內(nèi)分娩。所有病例研究期間均排除妊娠期高血壓疾病、妊娠期糖尿病、胎兒生長受限、肝病、心血管系統(tǒng)疾病、內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病、風(fēng)濕性疾病活動期、其他系統(tǒng)感染等。胎膜早破診斷標準依據(jù)樂杰主編婦產(chǎn)科學(xué)第七版教材。

1.2 標本采集 胎盤娩出后, 各組在嚴格無菌操作下取距胎膜破裂口附近＜4 cm的胎膜, 大小約2 cm×2 cm×1 cm, 經(jīng)10%甲醛固定后, 送病理檢查。

1.3 方法 采用免疫組織化學(xué)法檢測胎膜破裂口處胎膜組織TLRs的分布與表達。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS11.0統(tǒng)計軟件, 組間計數(shù)資料采用χ2檢驗, 當P＜0.05時認為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

胎膜組織中TLR4 的表達 PPROM組與PROM組TLR4水平比較, t =1.4, P=0.32, 差異無統(tǒng)計學(xué)意義( P＞0.05)。PROM組與對照組TLR4水平比較, t=12.49, P=0.01, 差異有統(tǒng)計學(xué)意義( P＜0.05)。PPROM組與對照組TLR4水平比較, t=11.32, P=0.02, 差異有統(tǒng)計學(xué)意義( P＜0.05)。 如表1。

表 1 三組孕婦胎膜組織TLR4蛋白水平比較( x-±s)

3 討論

胎膜早破可引起早產(chǎn)、臍帶脫垂, 并危及母兒安危。據(jù)報道, 妊娠37周前的胎膜早破發(fā)生率2%～3.5%, 37周后約為10%。導(dǎo)致胎膜早破的因素很多, 如雙胎、胎位異常、頭盆不稱、感染和排除機械性損傷等, 但其確切的發(fā)病機制尚未完全清楚。越來越多的證據(jù)表明, 亞臨床的生殖道或其他器官系統(tǒng)的感染對妊娠的結(jié)果有負面影響。近年來隨著生殖免疫學(xué)的發(fā)展, Toll樣受體(TLRs), 尤其是Toll樣受體4在胎膜早破中的作用越來越受到重視。

Toll樣受體(Toll-like receptor ,TLRs)是天然免疫系統(tǒng)中特異的I型跨膜受體和病原模式識別受體, 是一類進化保守的胚系編碼的模式識別受體(PRR), 通過模式識別的方式識別并結(jié)合不同的細菌或病毒的分子結(jié)構(gòu), 啟動機體的天然免疫和引起獲得性免疫反應(yīng)［1］。TLRs在急性炎癥反應(yīng)、細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和細胞凋亡中起重要作用。TLRs是一類誘導(dǎo)早期天然免疫, 并與隨后的適應(yīng)性免疫應(yīng)答一起調(diào)控細胞間相互作用的受體。TLRs最初是作為一種參與果蠅胚胎背腹軸形成的重要蛋白質(zhì)被發(fā)現(xiàn)的。1997年人類Toll蛋白的氨基酸序列被報道, 因其與果蠅Toll蛋白的結(jié)構(gòu)同源性較高, 故稱之為Toll樣受體［2］。母胎界面的免疫活性細胞為什么能讓胚胎作為一種“非己”的物質(zhì)“免疫赦免”, 一直備受關(guān)注。TLRs不僅參與先天性免疫, 而且與特異性免疫、免疫耐受和某些疾病防治密切相關(guān)。TLR4作為連接組織細胞和病原體之間的橋梁通過激活NF-?B途徑參與脂多糖誘導(dǎo)的炎癥應(yīng)答［3］。TLR2和TLR4對PAMP進行識別、結(jié)合, 并引發(fā)一系列信號轉(zhuǎn)導(dǎo), 進而導(dǎo)致炎性介質(zhì)的釋放, 最終引起Thl樣炎癥反應(yīng).滋養(yǎng)細胞凋亡［4］。Justine等［5］認為豚尾猴同人類一樣, 體內(nèi)存在類似的機制使TLR4/MD-2對脂多糖產(chǎn)生應(yīng)答, 革蘭陰性菌內(nèi)毒素(脂多糖LPS)可能通過激活NF-?B途徑誘發(fā)宿主的免疫應(yīng)答, 引起不同程度的絨毛膜羊膜炎。從免疫學(xué)角度來看, TLR2和TLR4與胎膜早破之間極可能存在著必然的聯(lián)系。Rey等［6］調(diào)查南美洲人口是否早產(chǎn)及胎膜早破新生兒與健康足月新生兒有不同的TLR4Asp299Gly等位基因頻率。結(jié)果顯示, 攜帶TLR4等位基因Asp299Gly的胎兒增加了早產(chǎn)(平均＜33妊娠周)的危險性, 同時伴有胎膜早破。但是通過查閱大量的國內(nèi)外文獻, 發(fā)現(xiàn)TLRs與胎膜早破的關(guān)系尚不明確。

TLR2和TLR4的應(yīng)用具有良好的前景, 有望成為免疫治療的新靶位, 但尚待深入研究［7］。因此, 本研究采用免疫組化方法, 通過比較胎膜早破和無胎膜早破的胎盤組織中TLRs的表達水平, 從基因水平探討Toll樣受體在胎膜早破發(fā)生發(fā)展中的作用。隨著對胎膜早破發(fā)病機制認識的不斷深入, 將為胎膜早破的早期診斷提供更敏感的信號指標, 從而找到對胎膜早破更具有針對性、更安全有效的治療方法。為對其免疫治療提供新思路。

［1］ Trinchieri G,Sher A.Cooperation of Toll-like receptor signals in innate immune defenee.Nat Rev lmmmunol, 2007,7(3):179-190.

［2］ Medzhitoy R,Preston-Hurlburt P,Janeway C A.A human homologene of the drosophila toll protein signals activation of adaptive immunity.Nature, 1997,388(6640):394-397.

［3］ Escoubet-Lozach L, Benner C, Kaikkonen MU, et al.MechanismsEstablishing TLR4-Responsive Activation States of Inflammatory Response Genes.PLos Genet, 2011, 7(12):e1002401.

［4］ 翟洪波.Toll樣受體2和4表達與原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn).國際婦產(chǎn)科學(xué)雜志.2010,37(5):336-339.

［5］ Justine C,Sumita J,David J, et al.Differertial host response to LPS variants in am niochosion and the T LR4/MD-2system in Macacanemestrina.Placenta, 2010, 31(9):811-817.

［6］ Rey G,Skowronek F,Alciaturi J,et al.Toll receptor4 Asp299Gly polymorphism and its association with preterm birth and premature rupture of membranes in a South American population.MolHum Reprod, 2008,14(9):555-559.

［7］ 段麗君, 曾蔚越.Toll樣受體及其基因多態(tài)性與早產(chǎn).國際婦產(chǎn)科學(xué)雜志, 2009,36(5):387-389.

Expression and significance of toll like receptor 4 in premature rupture of the membranes

YANG Fang,WEI Rui-hong, ZENG Xiao-Juan, et al.Department of Gynecology and Obstetrics, Fourth People’s Hospital of Shenzhen, Shenzhen 518000, China

Objective To study expression and significance of toll like receptor 4 in premature rupture of the membranes.Methods 100 cases of preterm premature rupture of the membranes in pregnant women for PPROM group, 100 cases of term pregnant women with premature rupture of membranes was set to PROM group, in 100 cases of normal pregnant women as controls, using immunohistochemistry assay for detection of rupture of membranes mouth tissue distribution and expres sion in fetal membranes T LRs.Results The expression of TLR4 in the organiz ation of membranes, PPROM group compared with PPROM group there was no statisticallysignificant difference; PROM group compared with control group the difference was s tatistically significant; PPROM group compared with control group the difference was statistically significant.Conclusion Toll like receptor 4 expression in pregnant women with premature rupture of membranes premature rupture of membranes, as early diagnosis provides more sensitive signal indicator.

Toll like receptor; Premature rupture of membranes; Placenta

518000 深圳市第四人民醫(yī)院婦產(chǎn)科